JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 3:53 د • August 7th, 2025
خذ جرو فأر مخدر مصاب بفقدان السمع المستحث وراثيا.
في هذه الحالة ، تفتقر خلايا الشعر في الأذن الداخلية إلى ناقلات الغلوتامات ، مما يمنع الغلوتامات من التعبئتها في حويصلات وإطلاقها.
هذا يعطل نقل الإشارات الصوتية إلى العصب السمعي.
احلق الفأر خلف أذنه اليسرى ، وقم بتطهير ووضع مرهم العين.
مد الرقبة وعمل شق.
اسحب الأنسجة الدهنية والعضلات لكشف العظم الصدغي.
ثقب الفقاعة الطبلية ، وهي جزء من العظم الصدغي ، وقم بتوسيع الفتحة لفضح غشاء النافذة المستدير أو RWM ، وهو حاجز رفيع للأذن الداخلية.
ثقب RWM وحقن الناقل الفيروسي المرتبط بالغدة الذي يحمل الجين العلاجي.
تنتشر الجزيئات الفيروسية وتدخل خلايا الشعر.
داخل خلايا الشعر ، تقوم الجسيمات الفيروسية بتوصيل مادتها الوراثية إلى النواة ، مما يؤدي إلى إنتاج ناقل الغلوتامات.
هذا يسمح بتعبئة الغلوتامات وإطلاقها ، واستعادة الإشارات الصوتية إلى العصب السمعي.
بعد تأكيد التخدير عن طريق قرصة إصبع القدم ، حلق المنطقة اليسرى بعد الأذن وتطهير جلد فأر ما بعد الولادة من 10 إلى 12 فأر بنسبة 70٪ من الإيثانول واليود البوفيدون. ثم قم بتغطية العينين بمرهم واقي للعيون ، وضع مع تمديد الرقبة على وسادة تدفئة. عند اكتمال التحضير الجراحي ، قم بشق الأنسجة تحت الجلد بمقص صغير لكشف العضلة التالية للأذن. بعد سحب الأنسجة الدهنية إلى الجانب الخلفي من الشق ، افصل العضلات إلى الجانبين الأيمن والأيسر ، بشكل عمودي على الشق.
لفضح العظم الصدغي. استخدم إبرة قياس 25 لثقب الفقاعات الطبلية. تقشير العظم مرة أخرى بالملقط حسب الضرورة لتوسيع الثقب ، والسماح بالوصول إلى المنعطف القاعدي للقوقعة.
بعد ذلك ، قم بتوسيع الفتحة بشكل كاف للسماح بتصور الشريان الثابت وغشاء النافذة المستدير. ثقب غشاء النافذة المستدير برفق في المنتصف باستخدام ماصة شعرية من البورسليكات. جفف غشاء النافذة المستدير بورق ترشيح معقم. ثم انتظر من خمس إلى عشر دقائق حتى يستقر تدفق السوائل.
في هذه الخطوة ، توخ الحذر عند إمساك الماصة وتقدمها ، بحيث تجعل ثقب غشاء النافذة المستدير صغيرا قدر الإمكان. اعتمادا على استخدام المجهر، يمكن حمل الماصة باليد أو بواسطة مناور دقيق. كما ترون هنا ، نحمل الماصة يدويا ، حيث أن المجهر قريب جدا من الماوس بحيث لا يسمح بمعالج دقيق.
الآن ، اسحب ميكرولترا إلى اثنين من الفيروس في ماصة زجاجية مسحوبة برأس قطره 15 ميكرومتر وحقن الفيروس بشكل دقيق في سكالا طبلة من خلال نفس الفتحة التي تم إجراؤها مسبقا في غشاء النافذة المستدير.