موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:59 دقيقة • August 7th, 2025
املأ ماصة دقيقة بخليط من الحمض النووي يحتوي على نواقل البلازميد التي تحمل الجين محل الاهتمام وصبغة التتبع. قم بتثبيته في معالج دقيق.
ضع كتلة الاغاروز تحت المجهر وضع شريحة دماغ جنينية للفأر مدمجة في الاغاروز مع الخلايا العصبية الداخلية القشرية فوقها.
اخفض الماصة الدقيقة وحقن خليط الحمض النووي في منطقة سلف الخلايا العصبية الداخلية. صبغة التتبع تحدد موقع الحقن.
ضع كتلة agarose أخرى على قطب صحن Petri وعمود agarose على قطب الغطاء.
انقل الشريحة إلى الكتلة وقم بمحاذاة قطب الغطاء فوق موقع الحقن.
قم بتطبيق نبضات كهربائية قصيرة لاختراق أغشية الخلايا مؤقتا ، مما يسمح للبلازميدات بدخول النواة.
احتضان الشريحة في وسط للحفاظ على صلاحية الخلية.
داخل النواة ، يحفز البلازميد التعبير الجيني ، وينتج البروتين المستهدف ، وينظم وظائف سلف الخلايا العصبية الداخلية.
للحقن ، امزج التعبير والتحكم في ناقل الحمض النووي بتركيز 1 ميكروغرام لكل ميكرولتر لكل ناقل ، وأضف محلول مخزون أخضر سريع عند تخفيف من 1 إلى 10. املأ ماصة زجاجية دقيقة بقطر داخلي 0.5 ملم ، وقطر خارجي 1 ملم ب 10 ميكرولتر من خليط الحمض النووي ، وقم بتحميل الماصة الدقيقة في حاقن مضخة بيكو تعمل بالهواء المضغوط ضع الكتلة الأكبر من الاغاروز تحت مجهر مجسم ، وضع الشريحة المراد حقنها على قطعة الاغاروز.
بعد ذلك ، قم بحقن 25 إلى 50 نانولتر في منطقة بروز العقدة الإنس
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية