نقل الجينات بمساعدة التثقيب الكهربائي المضمن في الأغروز في أسلاف الخلايا العصبية القشرية للفأر

املأ ماصة دقيقة بخليط من الحمض النووي يحتوي على نواقل البلازميد التي تحمل الجين محل الاهتمام وصبغة التتبع. قم بتثبيته في معالج دقيق.

ضع كتلة الاغاروز تحت المجهر وضع شريحة دماغ جنينية للفأر مدمجة في الاغاروز مع الخلايا العصبية الداخلية القشرية فوقها.

اخفض الماصة الدقيقة وحقن خليط الحمض النووي في منطقة سلف الخلايا العصبية الداخلية. صبغة التتبع تحدد موقع الحقن.

ضع كتلة agarose أخرى على قطب صحن Petri وعمود agarose على قطب الغطاء.

انقل الشريحة إلى الكتلة وقم بمحاذاة قطب الغطاء فوق موقع الحقن.

قم بتطبيق نبضات كهربائية قصيرة لاختراق أغشية الخلايا مؤقتا ، مما يسمح للبلازميدات بدخول النواة.

احتضان الشريحة في وسط للحفاظ على صلاحية الخلية.

داخل النواة ، يحفز البلازميد التعبير الجيني ، وينتج البروتين المستهدف ، وينظم وظائف سلف الخلايا العصبية الداخلية.

للحقن ، امزج التعبير والتحكم في ناقل الحمض النووي بتركيز 1 ميكروغرام لكل ميكرولتر لكل ناقل ، وأضف محلول مخزون أخضر سريع عند تخفيف من 1 إلى 10. املأ ماصة زجاجية دقيقة بقطر داخلي 0.5 ملم ، وقطر خارجي 1 ملم ب 10 ميكرولتر من خليط الحمض النووي ، وقم بتحميل الماصة الدقيقة في حاقن مضخة بيكو تعمل بالهواء المضغوط ضع الكتلة الأكبر من الاغاروز تحت مجهر مجسم ، وضع الشريحة المراد حقنها على قطعة الاغاروز.

بعد ذلك ، قم بحقن 25 إلى 50 نانولتر في منطقة بروز العقدة الإنسية أو العقدية الذيلية المختارة من الشريحة. مباشرة بعد الحقن ، ضع كتلة الاغاروز الصغيرة على قطب طبق بتري ، واستخدم ملعقة صغيرة مسطحة لربط عمود الاغاروز بقطب الغطاء المتحرك.

انقل الشريحة المحقونة بالغشاء الداعم لها إلى كتلة الاغاروز ، ثم ضع القطب العلوي مع عمود الاغاروز أعلى المنطقة المحددة من الشريحة. ثم قم بطلاء المنطقة بالكهرباء بنبضتين 5 مللي ثانية بجهدهما 125 فولت ، بمسافة 500 مللي ثانية. بعد التثقيب الكهربائي ، ضع الشريحة مع غشاءها الداعم مرة أخرى في طبق التثبيت الخاص بها وأعد الطبق إلى حاضنة زراعة الأنسجة.