قنوات Schwann المصنفة بالخلايا لتجديد المحور العصبي بعد إصابة الحبل الشوكي

خذ فأرا مخدرا بفقرات مكشوفة ، مع استئصال العمليات الشائكة والصفيحة من مستويات الصدر T7 إلى T9.

قطع الجذور الظهرية والبطنية أعلى وأسفل T8.

ضع المحلول الملحي للمساعدة في وقف النزيف وإزالة السائل باستخدام إسفنجة.

قم

بعبور الحبل الشوكي بين T8 و T9 لقطع الألياف العصبية.

ضع الرغوة المضغوطة في الفجوة وقم بتطبيق المحلول الملحي.

بمجرد توقف النزيف ، قم بإزالة الرغوة وإزالة السوائل المتبقية.

حرك قناة بوليمر كهرضغطية معدة مسبقا ، مع فتح النوافذ ، فوق جذع الحبل الشوكي المنقاري.

أدخل الجذع الذيلي في الطرف المقابل للقناة.

حقن خلايا شوان ، معلقة في مصفوفة قابلة للحقن ، من خلال نوافذ القناة.

أغلق النوافذ بإحكام.

تملأ خلايا شوان القناة وتفرز عوامل التغذية العصبية التي تدعم نمو المحور العصبي.

توفر القناة التوجيه الهيكلي ، بينما تولد خصائصها الكهرضغطية إشارات كهربائية حيوية لنمو العصب.

تدريجيا ، تتجدد المحاور عبر الجسر ، مما يعيد الاستمرارية بين جذوع الأشجار.

عندما تتم إزالة جميع الصفيحات ، تأكد من أن الفجوات بين العمليات المستعرضة مرئية ، خاصة في T8 ، وافحص العظام على طول كلا الجانبين بين T7 و T9 للتأكد من عدم وجود شظايا عظمية بارزة ظاهريا ، ويجب أن تصبح الجذور الظهرية مرئية. باستخدام مقص زنبركي بزاوية ، قم بقص الجذور الظهرية والبطنية أعلى وأسفل T8. وأضف المحلول الملحي إلى الحبل الشوكي للمساعدة في وقف النزيف.

بعد ذلك ، ضع المقص الزنبركي الزاوي فوق الحبل الشوكي في الفجوات بين العمليات العرضية في T8 ، وقم بعمل قطع واحد لقطع الأنسجة العصبية تماما. ضع قطعة صغيرة من الرغوة المضغوطة في الفجوة الناتجة من 2 إلى 2.5 ملم ، وأضف المحلول الملحي على الفور إلى المنطقة.

أثناء انتظار وصول جذوع الحبل المقطوع إلى الإرقاء ، قم بقطع مثلثات الامتصاص إلى قطع رفيعة وطويلة وقم بإزالة القناة من تخزين PBS. ضع بعض المثلثات في القناة لإزالة PBS الزائدة وتأكد من أن النوافذ المقطوعة مسبقا مفتوحة.

بعد ذلك ، قم بإزالة الوسط من حبيبات خلية GFP Schwann وأعد تعليق خلايا Schwann في 10 ميكرولتر من DMEM / F-12 البارد. أضف 10 ميكرولترات من الجل القابل للحقن البارد إلى تعليق الخلية واخلطه جيدا مع سحب العينات المتكرر. ثم ضع تعليق الخلية على الجليد. عندما تكون جذوع الحبل جاهزة ، قم بإزالة الرغوة المضغوطة ثم استخدم قطعا طويلة من مثلثات الامتصاص لإزالة المحلول الملحي والدم من منطقة استئصال الصفيحة الفقرية.

بعد ذلك ، استخدم ملعقة صغيرة لرفع الجذع المنقاري برفق وانزلاق القناة فوق الجذع بحيث تكون النوافذ متجهة لأعلى. الحرص على إدخال الجذع بالكامل وعدم وجود نزيف زائد في القناة. ارفع الجذع الذيلي برفق وانزلق الطرف الآخر من القناة فوقه. مع الحرص على إدخال الجذع بالكامل وأن تكون النوافذ على السطح الظهري.

بعد ذلك ، استخدم ماصة دقيقة مزودة برأس تحميل لطخة غربية لحقن 20 ميكرولترا من خليط المصفوفة القابلة للحقن لخلية GFP Schwann في القناة من خلال إحدى النوافذ المقطوعة مسبقا. وأغلق النوافذ.