JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 3:00 د • June 17th, 2025
خذ شريحة دماغ فأر ثابتة كيميائيا في طبق متعدد الآبار.
يحتوي النسيج على محاور محاطة بأغلفة المايلين الغنية بالدهون. تحتوي أجسام الخلايا على أجسام Nissl تتكون من شبكة إندوبلازمية خشنة وريبوسومات.
احتضان في محلول نفاذية يحتوي على صبغة نيسل الفلورية. يتخلل المحلول الأغشية الخلوية ، مما يسمح للبقعة بالارتباط بالحمض النووي الريبي الريبوزومي داخل أجسام Nissl وتسمية أجسام الخلايا.
ضع الأنسجة تحت مجهر متحد البؤر باستخدام نظام تصوير متماسك مضاد لستوكيس رامان ، أو CARS.
مضخة متزامنة مباشرة وأشعة ليزر ستوكس على الأنسجة ، مضبوطة لإثارة الروابط الجزيئية في غمد المايلين الغني بالدهون.
أدخل شعاع ليزر مسبار للتفاعل مع الروابط المثارة وإنتاج إشارة مضادة لستوك خاصة بالمايلين.
يلتقط كاشف الضوء الإشارة لإنشاء صورة خاصة بالمايلين.
استخدم التصوير متحد البؤر لالتقاط الإشارات من أجسام Nissl المصنفة.
تراكب الصور متحد البؤر و CARS لتصور البنية العصبية.
بعد تحضير الأنسجة كما هو موضح في المخطوطة ، قم بإزالة البقع من الأقسام العائمة للنسل ووسائط الأجسام المضادة لتصور أجسام الخلايا. بعد ذلك ، احتضن الأقسام على شاكر مختبر قياسي لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. قبل إحضار العينات إلى المجهر ، قم بتشغيل وتسخين ليزر CARS لمدة ساعة واحدة على الأقل. بعد ذلك ، قم بمحاذاة ليزر CARS عن طريق التداخل المكاني بين المضخة وأشعة الليزر Stokes ، واضبط التأخير بين شعاعي الليزر.
كوهلر البصريات المكثف والحجاب الحاجز للمجهر للتصوير الأمامي للسيارات. بعد ذلك ، اضبط المنظار الخارجي لتوسيط ليزرين متداخلين مكانيا على مرايا رأس المسح بالمجهر. للحصول على أفضل كشف عن CARS غير الممسوح ضوئيا ، تأكد من أن المكثف منزف.
بالنسبة للتصوير المناعي الفلوري متحد البؤر ، وتصوير CARS ، قم بتركيب ليزر CARS مع كل من أجهزة الكشف الأمامية وغير الممسوحة ضوئيا epi-CARS من خلال دمج مجهر متحد البؤر مزود بالليزر المرئي للتصوير الفلوري. الآن ، ضع الأقسام في طبق ثقافة مع قاع غطاء و PBS لتجنب تجفيف الأنسجة. استخدم أيضا وزنا زجاجيا لإبقاء الأنسجة بالقرب من الغطاء.
استخدام واجهة المستخدم الرسومية. قم بتعيين معلمات الحصول على الصور للتصوير متحد البؤر الفلوري CARS و Nissl. ضع العينة على مرحلة المجهر. ركز العينة والتقط الصور.