موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 4:07 دقيقة • June 17th, 2025
ابدأ بألياف عضلات الفئران الثابتة كيميائيا والمتنفذة كيميائيا الموضوعة في آبار صفيحة متعددة الآبار.
احتضن في محلول مانع لتقليل ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة.
أضف الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف بروتينا قبل المشبكي معبرا عنه عند الوصلة العصبية العضلية أو NMJ.
يغسل بمحلول عازل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
احتضان مع الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالفلوروفور التي تستهدف الأجسام المضادة الأولية ، والسموم العصبية المترافقة بالفلوروفور التي ترتبط بمستقبلات الأستيل كولين بعد المشبكي.
يغسل بمخزن مؤقت لإزالة الكواشف غير المرتبطة.
ضع الألياف على شريحة بوسائط تثبيت ، ضع غطاء ، وثبته بمغناطيس أسطواني لتسطيح الألياف.
ابدأ التصوير باستخدام مجهر CONFOCAL STED.
عند إضاءة الليزر ، تتألق البروتينات المسماة.
يفشل الفحص المجهري متحد البؤر في حل هياكل NMJ الدقيقة بوضوح بسبب دقته المحدودة وانتشاره الفلوري.
في المقابل ، يستخدم الفحص المجهري STED ليزر النضوب لقمع انتشار التألق ، مما يسمح بتصور NMJ واضح.
بعد القتل الرحيم ، ابدأ في مضايقة عضلات الظنبوب الأمامية في حزم ألياف صغيرة يبلغ عرضها حوالي 1 ملم باستخدام ملقطين مسنن دقيقين. ثم انقل حزم العضلات هذه إلى صفيحة مكونة من 24 بئرا تحتوي على 1٪ Triton X-100 محضرة في PBS ، واتركها تتحرك برفق لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة ، أو خمس ساعات عند 4
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية