الزرع عبر الأنف للخلايا الدبقية البشرية المستحثة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات المشتقة من الخلايا الدبقية الصغيرة في دماغ الفأر

خذ فأرا مخدرا تم تغذيته بنظام غذائي يحتوي على مثبطات.

في أنسجة المخ ، يزيل هذا المثبط بشكل انتقائي.

ضع محلول الهيالورونيداز على كل من فتحتي الأنف.

ضع الماوس لفترة وجيزة في وضع ضعيف لمنع تصريف المحلول.

يكسر الهيالورونيداز المصفوفة خارج الخلية للغشاء المخاطي للأنف ، مما يؤدي إلى إرخاء الخلايا وتعزيز اختراق الأنسجة.

قم بإعطاء الخلايا الدبقية البشرية المستحثة متعددة القدرات المشتقة من الخلايا الجذعية أو معلق الخلايا iPSMG في فتحة أنف واحدة.

ضع الماوس في وضع ضعيف. ثم قم بإدارة التعليق في فتحة الأنف الأخرى.

كرر الإدارة عدة مرات.

تخترق خلايا iPSMG الغشاء المخاطي للأنف وتتبع المسار الشمي للوصول إلى الدماغ ، وبالتالي تجاوز الحاجز الدموي الدماغي.

اسمح للماوس بالتعافي.

تخدير الفأر وإدارة وسائط الزرع داخل الأنف على فترات منتظمة.

تدعم عوامل النمو في وسائل الإعلام نمو وبقاء خلايا iPSMG المزروعة في دماغ الفأر.

لتحضير الفئران للزرع عبر الأنف ، قم بإطعام ذكور الفئران بنظام غذائي يحتوي على PLX لمدة سبعة أيام. في نهاية اليوم السابع ، استفد من نظام PLX الغذائي وأطعم الفئران بنظام غذائي طبيعي. قبل ساعة واحدة من زرع iPSMG عبر الأنف ، قم بإعطاء 2.5 ميكرولتر من الهيالورونيداز في PBS لكل فتحة أنف مرتين ، باستخدام طرف ماصة 10 ميكرولتر لزيادة نفاذية الغشاء المخاطي للأنف.

ضع الفئران في وضع ضعيف بعد تطبيق الهيالورونيداز. يجب إعطاء 2.5 ميكرولتر من الهيالورونيداز قبل 10 دقائق من زراعة iPSMG عبر الأنف. ضع 2.5 ميكرولتر من تعليق الخلية في فتحة أنف واحدة من الماوس باستخدام طرف ماصة سعة 10 ميكرولتر. ضع الفأر في وضع ضعيف لمدة خمس دقائق قبل إعطاء تعليق الخلية على فتحة الأنف الأخرى.

قم بإدارة تعليق الخلية أربع مرات ، مع تطبيق حجم إجمالي قدره 20 ميكرولتر لكل. بعد 48 ساعة من التوقف عن تغذية PLX ، كرر إعطاء الهيالورونيداز وتعليق الخلية على نفس الفئران. لإعطاء السيتوكينات ، ضع 2.5 ميكرولتر من وسط الزرع في فتحة أنف واحدة من الفأر باستخدام طرف ماصة سعة 10 ميكرولتر.