تصوير الأنسجة العميقة لدماغ سمكة الزرد باستخدام مجهر مضان ثلاثي الفوتون

ضع طبق بتري يحتوي على سمكة زرد مخدرة مع إدخال أنبوب في فمه لتوصيل الماء المؤكسج تحت العدسة الموضوعية منخفضة التكبير للمجهر ثلاثي الفوتونات.

يحتوي

دماغ السمكة الزردية على خلايا عصبية معدلة وراثيا تعبر عن بروتينات مصنفة فلورسنت لتصور الأنسجة العميقة أثناء التصوير.

قم

بإضاءة الطبق باستخدام مصدر ضوء LED ، واضبط معلمات التصور لوضوح الصورة.

اخفض العدسة الموضوعية حتى تصبح السمكة الزردية مرئية ، مع توسيط رأسها في مجال الرؤية.

استبدل العدسة منخفضة التكبير بهدف عالي الدقة للتصوير ثلاثي الفوتونات.

اخفض الهدف بعناية حتى يصبح الرأس مرئيا دون اتصال جسدي ، واضبط قيم المحور على الصفر.

قم بإيقاف تشغيل مصدر ضوء LED وأغلق الستارة الداكنة لتقليل ضوضاء الخلفية.

اضبط معلمات التصوير وقم بإجراء تصوير ثلاثي الفوتونات ، حيث تتيح الأطوال الموجية الأطول إثارة ثلاثة فوتونات في الأنسجة العميقة.

عند الإثارة ، تنبعث الفلوروفورات العصبية من التألق ، مما يتيح التصور في الوقت الفعلي للخلايا العصبية على أعماق مختلفة.

للتصوير ، ضع هدف تكبير منخفض على مجهر الفوتون الثلاثة. ثم ضع طبق بتري الذي يحتوي على السمك والأنابيب تحت المجهر ، واستخدم مصدر ضوء LED لإضاءة طبق بتري. من برنامج الحصول على الصور ، افتح وضع الكاميرا. انقر على مباشر. اختر القناة A على الجانب الأيمن من الشاشة واضبط إعدادات الرسم البياني لرؤية الصورة بوضوح.

بعد ضبط