موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:07 دقيقة • June 17th, 2025
ابدأ بشريحة أنسجة الورم الأرومي الدبقي التي تم الحصول عليها من ورم تم استئصاله جراحيا.
الحفاظ على شريحة الأنسجة في وسط مزرعة لدعم بقاء الخلية.
تعبر الخلايا السرطانية داخل الشريحة عن بروتين فلوري أخضر ، أو GFP ، مما يسهل تصور الخلايا السرطانية أثناء هجرة الخلايا.
ضع لوحة الثقافة التي تحتوي على شرائح الأنسجة على مسرح المجهر متحد البؤر.
ضع حاضنة أعلى المسرح للحفاظ على درجة حرارة الوسط.
حدد هدفا وتصور ثقافات الشرائح تحت المجهر.
تستخدم المجاهر ضوء الليزر لإثارة البروتينات الفلورية في الخلايا.
الآن ، امسح العينة طبقة تلو الأخرى لالتقاط الصور على أعماق مختلفة.
قم بتكديس الصور لإنشاء تمثيل ثلاثي الأبعاد مفصل للخلايا.
بعد ذلك ، التقط صورا Z-stack على فترات منتظمة لتتبع حركة الخلايا واتجاهها ، مما يتيح دراسة هجرة الخلايا السرطانية بمرور الوقت.
ضع الطبق في حاضنة علوية من مجهر مغلق 37 درجة و 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 من مجهر متحد البؤر. استخدم مسافة عمل طويلة ، هدف هوائي 10x جنبا إلى جنب مع التصوير الفردي أو متعدد الفوتون لالتقاط صور ثلاثية الأبعاد وحلت زمنيا لهجرة الخلايا. تصور الشريحة بالمجهر ، وحدد مجالا مناسبا بكثافة كافية من الخلايا السرطانية المصنفة بالفلورسنت بين حافة الشريحة ومركز الأنسجة. ثم في وضع التحليل متعدد الأبعاد لبرنامج التصوير ، اضبط مركز z-stack بحيث تحتوي جميع المواضع المراد تصويرها على إشارة خلوية فلورية مرئية. وحدد وقتا مناسبا لكل عملية استحواذ على z-stack.