موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:33 دقيقة • June 17th, 2025
خذ غطاء مغلفا بالبوليمر يحتوي على ثقافة مختلطة للخلايا العصبية والخلايا النجمية في غرفة التسجيل.
تعبر هذه الخلايا المنقولة عن البروتينات الحساسة للكالسيوم على أغشية البلازما والطاقة الكهربائية ، وتتألق عند ارتباط الكالسيوم لتتبع ديناميكيات الكالسيوم تحت الخلوية.
أضف الوسائط التي تحتوي على أيونات الكالسيوم وقم بتغطية الغرفة لمنع التبخر.
ضع الغرفة تحت المجهر الفلوري.
ترتبط أيونات الكالسيوم بالبروتينات الحساسة للكالسيوم. عند التشعيع بالضوء الأزرق ، تتألق البروتينات الحساسة للكالسيوم على الغشاء الخارجي للكهرباء باللون الأخضر. استخدم هذا التألق الأخضر لتحديد موقع الخلايا النجمية.
بعد ذلك ، قم بالإشعاع بالضوء الأخضر. تتألق البروتينات الحساسة للكالسيوم على غشاء البلازما باللون الأحمر. تأكد من وجود مضان أحمر في نفس الخلايا النجمية التي تظهر التألق الأخضر.
سجل صور الفاصل الزمني للبروتينات الحساسة للكالسيوم على غشاء البلازما، متبوعة بالبروتينات الحساسة للكالسيوم على الغشاء الخارجي للطوارئ.
قم بتحليل الصور لمراقبة نشاط الكالسيوم التلقائي الخاص بالمقصورة في الخلايا النجمية المحددة.
قم بتركيب الغطاء الذي يحتوي على الخلايا المنقولة باستخدام Lck-RCaMP2 و OER-GCaMP6f في غرفة التسجيل في المجهر. أضف 400 ميكرولتر من وسط التصوير ، وضع غطاء فوق الغرفة. اختر مجموعة المرشح ل GCaMP6f ومصدر الضوء. حدد موقع الخلاي
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية