تطوير شبكة عصبية مهندسة الأنسجة الدقيقة باستخدام عمود دقيق قائم على الهيدروجيل

ابدأ بطبق يحتوي على عمود صغير. يحتوي العمود الصغير على غلاف خارجي هيدروجيل ومصفوفة خارج الخلية ، أو نواة ECM.

أضف قطرات من وسط الثقافة إلى نفس الطبق.

انقل مجاميع الخلايا العصبية إلى الطبق ، ثم ضعها في إحدى القطرات المتوسطة.

راقب تحت المجهر المجسم وأدخل مجاميع الخلايا على طرفي العمود الصغير.

بعد ذلك ، انقل العمود الصغير المصنف إلى الوسط من أجل البقاء الخلوي.

احتضان للسماح بربط الخلية بوحدة التحكم في المركز.

باستخدام المجهر المجسم، تأكد من ارتباط الخلية. ثم أضف وسط الثقافة لتغطية الطبق واحتضانه.

تبدأ الخلايا العصبية المرفقة في تمديد محاورها من خلال ECM.

استبدل نصف المتوسط بانتظام بوسط جديد للحفاظ على مستويات العناصر الغذائية.

بمرور الوقت ، تنمو المحاور وتمتد على طول العمود الصغير بالكامل ، وتشكل شبكات عصبية.

الشبكة العصبية المطورة للأنسجة الدقيقة جاهزة لإعادة بناء الدوائر العصبية التالفة.

انتقل إلى بذر الخلايا مباشرة بعد الحضانة. انقل ما يقرب من 10 إلى 20 ميكرولترا من وسط الاستزراع إلى منطقتين حرتين في أطباق بتري التي تحمل الأعمدة الصغيرة. استخدم ماصة دقيقة لجمع المجاميع العصبية بشكل فردي ، ونقلها إلى طبق بتري الذي يحتوي على البنيات. انقل الركام بالملقط إلى أحد التجمعات الصغيرة لوسط الاستزراع للحفاظ على صحة الخلية.

أثناء المراقبة تحت المجهر المجسم ، استخدم الملقط لإدخال ركام في أحد طرفي الأعمدة الدقيقة ل micro-TENNs أحادية الاتجاه أو في كل طرف للبنية ثنائية الاتجاه. بعد ذلك ، انقل العمود الصغير المصنف إلى المجموعة الصغيرة الأخرى من وسط الاستزراع لتجنب الجفاف والحفاظ على الصحة الإجمالية. عندما يتم تحميل جميع الأعمدة الدقيقة ، احتضنها عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 45 دقيقة للسماح للركام بالالتصاق ب ECM.

بعد الحضانة ، تحقق من بقاء الركام في نهايات الأعمدة الدقيقة ، باستخدام المجهر المجسم. أخيرا ، قم بإغراق أطباق بتري التي تحتوي على micro-TENNs بعناية بوسط الاستزراع باستخدام ماصة. ضع الأطباق في حاضنة على حرارة 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون للاستزراع على المدى الطويل.