JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 3:29 د • August 7th, 2025
ابدأ بفأر مخدر يوضع على جانبه مع ذيله مكشوف.
حدد موقع الوريد الذيل الجانبي ، وحدد موقع الحقن على طوله ، وقم بتطهير المنطقة.
ضع ضغطا طفيفا فوق موقع الحقن لتوسيع الوريد.
خذ حقنة تحتوي على الفيروس المؤتلف المرتبط بالغدة أو ناقل AAV الذي يحمل الجين المستهدف.
قم بمحاذاة الإبرة مع الوريد واثقب جلد الذيل.
حرر الضغط على الوريد لاستعادة تدفق الدم الطبيعي.
أدخل الإبرة في وريد الذيل وحقن الفيروس ببطء.
بعد الحقن ، اسحب الإبرة ، واضغط لوقف أي نزيف ، وراقب تعافي الفئران.
يقوم وريد الذيل الجانبي بتوصيل الفيروس إلى مجرى الدم ، حيث يدور عبر القلب ويدخل الدماغ ، ويصل إلى الخلايا العصبية.
داخل الخلايا العصبية ، يدخل الفيروس إلى النواة ، ويطلق مادته الوراثية ، ويسهل إنتاج البروتينات المستهدفة لتطبيقات العلاج العصبي.
تخدير الفئران بشكل صحيح باستخدام نظام التخدير. تأكد من مستوى تخدير مناسب من خلال عدم وجود رد فعل على قرصة إصبع القدم. ثم ضع الجرذ في منطقة العمل على جانبه وحافظ على التخدير باستخدام مخروط الأنف. مع استلقاء الجرذ على جانبه ، يجب أن يكون أحد وريد الذيل الجانبي متجها لأعلى.
موقع الحقن هو الثلثين أسفل طول الذيل. امسح موضع الحقن بفوسادة تحضير الكحول. أمسك الذيل بإحكام فوق منطقة الحقن بإصبع واحد مباشرة فوق وريد الذيل الجانبي. سيؤدي ذلك إلى توسيع الوريد. مع توجيه الشطبة لأعلى ، قم بمحاذاة الإبرة مع وريد الذيل المرئي في نفس الاتجاه.
اخترق الجلد فوق وريد الذيل مع الحرص الشديد على تجنب إمساك اليد الأخرى بالذيل والضغط على وريد الذيل. حرر الضغط من وريد الذيل للسماح بتدفق الدم الطبيعي. ثم حرك الإبرة في الوريد. للتأكد من أن الإبرة قد ثقبت الوريد الذيل ، اسحب قليلا على المكبس. إذا كانت الإبرة في الوريد ، فسوف يتدفق الدم إلى الإبرة.
بعد إعادة وضع الإبرة ، إذا لزم الأمر ، قم بتثبيت الإبرة عن طريق تثبيت نهاية المحقنة على الذيل. قم بحقن الناقل ببطء في الذيل بحوالي 20 ميكرولتر في الثانية.
في حالة الحقن السيئ ، سيتم نقل جزئيا فقط وربما لن تكون النتائج مفيدة. ومع ذلك ، مع الممارسة ، فإن الحقن الجيد قابلة للتكرار وموثوق بها.
إذا تم إعطاء الناقل ، فقم بإزالة الإبرة من الذيل ، واضغط على وسادة شاش على موقع الحقن للمساعدة في وقف النزيف لمدة 30 إلى 60 ثانية. قم بإيقاف تشغيل تخدير الأيزوفلوران والأكسجين. راقب الجرذ حتى يستعيد وعيه ثم أعده إلى قفصه. تخلص من المواد التي قد تكون ملوثة ب AAV في حاوية مناسبة للمخاطر البيولوجية ، ونظف محطة العمل بنسبة 70٪ من الإيثانول.