رصد اليوبيكويتين-proteasome نشاط في الخلايا الحية باستخدام Degron (DGN)-زعزعة استقرار الأخضر نيون البروتين البروتين مراسل (GFP) على أساس

16.1K مشاهدة

استشهد بها 14

10:25 دقيقة

نوفمبر 10, 2012

10.3791/3327-v

نوفمبر 10, 2012

16.1K مشاهدة

Ruth Greussing¹ , Hermann Unterluggauer¹ , Rafal Koziel¹ , Andrea B. Maier² , Pidder Jansen-Dürr¹

¹Molecular and Cell Biology, Institute for Biomedical Aging Research, ²Department of Gerontology and Geriatrics, Netherlands Consortium for Healthy Aging, Leiden University Medical Center

يوصف أسلوب لمراقبة اليوبيكويتين-proteasome النشاط في الخلايا الحية. يتم إنشاء A-degron مزعزعة الاستقرار GFP-(GFP-DGN) ومستقرة انصهار بروتين GFP-dgnFS وtransduced في الخلية باستخدام ناقلات lentiviral التعبير. هذا الأسلوب يسمح لإنشاء خط خلية مستقرة GFP-dgn/GFP-dgnFS معربا عن الذي يمكن اليوبيكويتين-proteasome النشاط المقررة بسهولة باستخدام epifluorescence أو التدفق الخلوي.