بروتوكول لجمع البنكرياس الإنسان

الهدف العام من هذا الإجراء هو تشريح البنكرياس البشري بطريقة تحافظ على الاتجاه التشريحي. يتم تحقيق ذلك عن طريق إزالة الاثني عشر والطحال من البنكرياس ، ثم إزالة الدهون والأوعية الزائدة من البنكرياس. الخطوة الثانية هي طلاء السطح الأمامي بالحبر الأزرق والسطح الخلفي بالحبر الأسود.

بعد ذلك ، ينقسم البنكرياس إلى ثلاث مناطق. ثم يتم تقطيع كل منطقة بالعرض إلى ألواح متساوية ووضعها على أشرطة البارافين أو قوالب OCT أو فرمها أكثر ووضعها في قوارير. في النهاية ، يتم جمع العينات من جميع المناطق الثلاث للبنكرياس ، بينما يتم الحفاظ على الاتجاه التشريحي الصحيح للتحليل المستقبلي.

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في معالجة الأسئلة الرئيسية في أبحاث مرض السكري من النوع الأول ، مثل الآليات الكامنة وراء فقدان كتلة خلايا بيتا أو وظيفتها ، وطبيعة هجوم الخلايا المناعية. يعد العرض المرئي لطريقة معالجة البنكرياس أمرا بالغ الأهمية لأن الحفاظ على اتجاه البنكرياس في الجسم الحي يتطلب الاهتمام بالتفاصيل. ستظهر الإجراء ليندا سنايدر ، تقنية الهيستو وإميلي مونتغمري ، عالمة علم الأحياء في مختبري.

ابدأ بإعداد جميع المواد اللازمة لهذا الإجراء. أولا ، قم بتسمية الكاسيت التي ستحتوي على كتل البارافين بمعرف المتبرع ونوع العينة ورقم الاقتباس وأي معلومات إضافية. بعد ذلك ، قم بتسمية قوالب OCT بنفس الطريقة.

قم بقص قطع كافية من رقائق الألومنيوم لتغليف كل كتلة OCT ووضعها جانبا لاستخدامها لاحقا. قم بإعداد جميع القوارير اللازمة لتخزين العينات الطازجة والمجمدة. أضف RNA لاحقا ووسائط RPMI عند الاقتضاء.

بعد ذلك ، قم بإعداد مناطق العمل ، ووضع ألواح التشريح ، والأدوات المعقمة ، وجميع المستلزمات الأخرى اللازمة للإجراء في كل من غطاء السلامة الحيوية وعلى سطح العمل. قم بترتيب جميع الكاسيتات وقوالب OCT بترتيب الاستخدام. القريبه. قم بإنشاء حمام تجميد عن طريق إضافة ما يكفي من البنتان isop لتغطية الثلج الجاف في قاع صندوق الستايروفوم.

لبدء التشريح ، قم بإزالة الاثني عشر والطحال. ابدأ بفصل الاثني عشر والبنكرياس من أحد طرفيه ، واستمر حتى ينفصل تماما. الطحال متصل بشكل فضفاض ويمكن إزالته بسهولة من الدهون والبنكرياس.

بعد ذلك ، قم بتنظيف البنكرياس من الأوعية والأعصاب الدهنية الدخيلة باستخدام مزيج من التشريح الحاد والحاد. توضع جانبا الدهون والغدد الليمفاوية لتتم معالجتها لاحقا. بمجرد التنظيف ، ضع البنكرياس على لوح تشريح مغطى بمناشف ورقية.

الحفاظ على الاتجاه الصحيح للبنكرياس هو أصعب جانب في هذا الإجراء. لضمان النجاح ، يتم طلاء الأسطح الأمامية والخلفية بأحبار ملونة مختلفة. اغمس قضيب قطني مائل بالحبر الأزرق ، وانشر الحبر على السطح الأمامي للبنكرياس وامسح الفائض.

بعد ذلك ، اغمس قضيبا جديدا في الحبر الأسود وانشره على السطح الخلفي للبنكرياس. أعد البنكرياس إلى اتجاهه الطبيعي. مع توجيه السطح الأمامي لأعلى ، أصبح البنكرياس جاهزا الآن للتقطيع إلى ثلاثة أقسام.

أولا ، قم بقطع التقاطع بين الرأس والجسم. بعد ذلك ، قسم الجزء المتبقي إلى أجزاء متساوية تقريبا لفصل الجسم والذيل ، وتسجيل وزن كل منطقة من البنكرياس. بدءا من قسم الرأس.

قسم كل منطقة إلى أقسام يبلغ طولها حوالي 0.5 سم عن طريق التقطيع بطريقة عرضية ، على غرار تقطيع رغيف الخبز. بمجرد تقطيع كل منطقة من البنكرياس إلى شرائح ، قم بإزالة الجزء الأخير من منطقة الرأس ، وهو قسم تقاطع جسم الرأس ، وضعه على لوح تشريح منفصل. افرم هذا القسم إلى قطع صغيرة وقسم القطع بالتساوي بين قوارير التبريد ذات العلامات المكتوبة مع وبدون الحمض النووي الريبي.

في وقت لاحق ، يتم تجميد القوارير. اتباع الإجراءات القياسية. كرر هذا الإجراء لقسم تقاطع ذيل الجسم.

بمجرد جمع العينات المفرومة ، قم بإمالة جميع المقاطع العرضية إلى اليمين. ستتم إزالة الأقسام المتناوبة من كل منطقة. بالنسبة لكتل البارافين و OCT ، قم بإزالة القسم الأول لحجب البارافين.

إذا كان القسم كبيرا جدا ، فقم بقصه إلى نصفين. قم بتسمية الكاسيت على أنها A و B.إذا كانت القطعة لا تزال كبيرة جدا ، فقم بقص كل قسم بشكل عمودي على القطع السابق ، ثم قم بتسمية الكاسيت من A إلى D بطريقة في اتجاه عقارب الساعة. كما هو موضح هنا، ضع الدرج بحيث يكون الملصق على اليسار.

بعد ذلك ، ضع المنديل في الكاسيت وأغلق الغطاء. انقل الكاسيت إلى حاوية تحتوي على فورمين مخزن مؤقت محايد. قم بترقيم الكتلة بالتتابع داخل كل منطقة ، بدءا من القسم الأكثر وسطا لكتل OCT.

صب طبقة رقيقة من وسائط OCT في قالب مسمى مسبقا قبل إدخال الأنسجة ، قم بتغطية الأنسجة بوسائط OCT وقم بتجميد العينة بسرعة لاستخدامها لاحقا للعودة إلى الأنسجة التي تم وضعها جانبا سابقا. عزل الغدد الليمفاوية البنكرياسية عن طريق تقليم الدهون والأنسجة الضامة المحيطة بكبسولة العقدة. ضع العقد في طبق معقم يحتوي على DMEF ، وقم بفرم العقد الكبيرة إلى قطع لا يزيد حجمها عن 0.5 سم.

بمجرد عزل الغدد الليمفاوية البنكرياسية ، قسم الأنسجة بين القوارير والأشرطة المحضرة لمزيد من المعالجة. بعد الانتهاء من الغدد الليمفاوية ، يتم فرم الطحال وتخزينه بطريقة مماثلة. لمعالجة الاثني عشر ، استخدم وسادة شاش مبللة لمسح الغشاء المخاطي نظيفا من المخاط ، وقص الغشاء المخاطي ، ثم قم بتقطيعه إلى أقسام.

قسم عينات الغشاء المخاطي كما هو موضح سابقا. باستخدام هذا الإجراء ، يتم جمع عينات تمثيلية لكل منطقة من البنكرياس كما هو موضح هنا. كانت أوزان منطقة الرأس والجسم والذيل متساوية تقريبا.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية معالجة البنكرياس البشري إلى أنواع عينات مختلفة ، وتحديدا القدرة على الحفاظ على الاتجاه ، وكذلك كيفية عزل الغدد الليمفاوية عن الدهون المحيطة بالبنكرياس.