Name: ورم في المثانة Orthotopic النموذجي وتقييم المعالجة سارنا داخل المثانة (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: تعلم إنشاء نموذج ورم مثانة أورثوتوبي في الفئران المثبطة مناعياً وتقييم علاج saRNA داخل المثانة باستخدام الموجات فوق الصوتية والتصوير البيولوميني.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ويتم تمويل هذا البحث من قبل المثانة AACR شيبرد هنري جرانت أبحاث السرطان (09-60-30-LI).

وقد تمت الموافقة على الاجراءات التي تجرى على الحيوانات من قبل رعاية الحيوانات المؤسسية واللجنة الاستخدام (IACUC) في جامعة كاليفورنيا في سان فرانسيسكو. 1. خلية التحضير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويزرع في سرطان المثانة خط الخلية البشرية KU-7-luc2-GFP (الفرجار العلوم الحياتية، Hopkinton، MA) في وسائل الاعلام-1640 RPMI تستكمل مع مصل بقري جنيني 10٪ و 50 جنتاميسين ميكروغرام / مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتم المحافظة على الثقافات على 37 درجة مئوية، و 5٪ CO 2 مع وسائل الاعلام يتغير كل يومين أو ثلاثة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كانت تحصد الخلايا عن طريق الهضم التربسين وعدها باستخدام عدادة الكريات. وأعدت وتعليق خلية واحدة من 2 الخلايا X 6 10 في 50 ميكرولتر في الفوسفات مخزنة المالحة ويحرص على الجليد. </li></ol> 2. Orthotopic نموذج المثانة ورم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> واستخدمت النساء العاريات (نيو / نو) الفئران 8-10 أسابيع من العمر (سيمونسن مختبر، Gilory، كاليفورنيا). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الستارة معقم فوق وسادة التدفئة لخدمةSA منصة العمليات الجراحية. وتعد عقيمة هلام التشحيم، 24 guage القسطرة مع الإبر مرود، محلول نترات الفضة، والمياه المعقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هو فعل مخدر عام في الفئران مع isoflurane المستنشقة (3٪ لتحريض، 1-2٪ للصيانة) والحفاظ عليها من خلال الرؤوس. ويطبق مرهم معقم للعين للعيون الحيوان، ويتم استخدام الحرارة منصة للحفاظ على حرارة الجسم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في موقف ضعيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فهم بلطف الفرج الحيوان مع ملقط لتحقيق الاستقرار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام قسطرة 24 guage الوريد مع مرود إزالة الإبرة، ومقسطر مجرى البول الماوس. وينبغي استخدام تزييت وافرة. مع مستلق الماوس، ويقع على مجرى البول الخلفي على الفور إلى طيات الفرج والأمامي إلى المهبل. يؤخذ في البداية وبزاوية 45 درجة من أجل يقني؛ يدخل القنية مجرى البول ويمر تحت عظم العانة. ثم يتم أخذ زاوية أكثر الضحلة لتمرير من خلال مجرى البول في المثانة. الحوض بريه لطيفتأكد من تصويب مجرى البول يمكن أن يساعد في كثير من الأحيان. يجب توخي الحذر لتجنب دفع من الصعب جدا ضد المقاومة، وهذا يمكن ان يؤدي الى ثقب مجرى البول أو المثانة. البول ينظر داخل القسطرة يؤكد موقعه داخل تجويف المثانة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح البول من تجويف القسطرة والمثانة باستخدام إبرة مرود. يتم استخدام إبرة مرود لجميع تطلعات وحقن لاحقة، وترك القسطرة في مكانها. وهذا يسمح للحقن كميات دقيقة من خلال القضاء على الفضاء الميت داخل القسطرة، ويجعل القسطرة تكرار لا لزوم لها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتنال من طبقة جلايكان من الظهارة البولية المثانة، ويتم حقن 10 ميكرولتر من نترات الفضة 0.5 م وسمح ليسكن لمدة 10 ثانية. وهذا قد يشكل راسب أبيض مع البول المتبقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح وتجاهل محتويات راسب والمثانة باستخدام إبرة مرود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل المثانة عن طريق حقن الماء المعقم 100 ميكروليتر. نضح والتخلص من المياه. Repeفي الغسيل مع الماء المعقم 3 مرات ليصبح المجموع 4 يغسل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يضع ربطة عنق من الحرير 4-0 حول الصماخ مجرى البول إلى انسداد مجرى البول تمهيدا لإزالة القسطرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن معدة مسبقا 2 × 10 6 KU-7-luc2-GFP الخلايا في 50 ميكرولتر باستخدام إبرة مرود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة القسطرة في وقت واحد وإبرة مرود، وترك مجرى البول المغطي من الحرير التعادل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وسيتم الحفاظ الماوس تحت تخدير عام لمدة 2 ساعة قبل أن يتم إزالة ربطة عنق من الحرير وايقظ الحيوان. </li></ol> 3. الموجات فوق الصوتية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هو فعل تخدير عام مع isoflurane المتبخرة وحافظت عبر مخروط الأنف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وVEVO VisualSonics 770 في الجسم الحي عالية الدقة المتناهية الصغر نظام تصوير (VisualSonics المؤتمر الوطني العراقي، تورونتو، أونتاريو، كندا) مع التحقيق RMV-704 ميغاهيرتز 40 تم استخدامه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في موقف ضعيف على منصة الموجات فوق الصوتية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأمين أرجل الحيوان هندمع شريط لتجنب الحركة الزائدة خلال التلاعب في مسبار الموجات فوق الصوتية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق هلام الموجات فوق الصوتية لمنطقة الحوض الماوس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أدنى RMV-704 مسبار الموجات فوق الصوتية (40 ميغاهيرتز) على الحوض الماوس للحصول على صور عرضية أو طولية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا تم العثور على الورم، ويمكن حفظ الصور لقياس أبعاد الورم. </li></ol> 4. Bioluminescent التصوير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء حقن داخل الصفاق من 200 ميكروليتر (150 ملغ / كلغ) luciferin الركيزة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حث تخدير عام مع المتبخرة isoflurane والحفاظ على طريق مخروط الأنف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الفئران في موقف ضعيف في تصوير التألق الحيوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد خمس دقائق من حقن luciferin، قياس التألق الحيوي من هذا الحيوان في الفوتونات في الثانية الواحدة. </li></ol> 5. سارنا التحضير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توليف الجيش الملكي النيبالي [أليغنوكليوتيد] على مقياس من 50-100 μmol. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يصلب تكميلية واحدة [أليغنوكليوتيد] الذين تقطعت بهم السبل أناn لsaRNAs المزدوجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مستعدون للدهون، جسيمات متناهية الصغر (الشرطة الوطنية الليبيرية)-سارنا مع دهن ionizable 1،2-dilinoleyl-4-(2 - dimethylaminoethyl) - [1،3]-dioxolane (DLinKC2-DMA)، disteroylphosphatidyl الكولين، والكولسترول، وPEG-DMG باستخدام تشكيل حويصلة عفوية إجراء صياغة كما هو موضح سابقا. 1 </li></ol> 6. داخل المثانة الإدارة وضعت من سارنا <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تأسيس ورم المثانة orthotopic نموذج، يتم التعامل مع الفئران داخل المثانة RNA تفعيل صغيرة (سارنا) التي صيغت في جزيئات الدهون (LNPs) (الجدول 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تم تأسيس تخدير عام والمحافظة عليها مع المتبخرة isoflurane، ويتم تطبيقها العقيمة تشحيم العيون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الحيوان في موقف ضعيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء قسطرة مجرى البول كما هو موضح سابقا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يضع ربطة عنق من الحرير 4-0 حول مجرى البول والقسطرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح كل البول من القسطرة والمثانة باستخدام حقنة فارغة وإبرة مرود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن الشرطة الوطنية الليبيرية، سارنا intravesically لجرعة ما مجموعه 50 ميكرولتر (3 ملغ / كلغ). إزالة القسطرة في وقت واحد وإبرة مرود، وترك مجرى البول المغطي من الحرير التعادل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وسوف تظل الماوس تخدير مع مجرى البول المغطي لمدة 2 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدأ العلاج داخل المثانة مع الشرطة الوطنية الليبيرية، سارنا في يوم 4 بعد زرع ورم. عولجت فئران متسلسل، كل 3 أيام، على ما مجموعه 14 العلاجات. </li></ol> 7. ممثل النتائج يمكن رصد أورام المثانة الناجمة عن KU-7-luc2-GFP الخلايا عن طريق التصوير bioluminescent luciferase المراسل (الشكل 1A وجيم) والموجات فوق الصوتية المثانة (الشكل 1B و D). الأورام غالبا ما تكون قابلة للكشف في غضون 3-5 أيام بعد تلقيح الخلية. وجدنا نجاح زرع المثانة ورم في أكثر من 90٪ من الفئران. كما المعاملة مع الرنا المزدوج الجديلة داخل المثانة تستتبعه، ويمكن رصد تطور ورم وايعشر هذه الطرائق. بعد أن تتم التضحية الحيوانية، ويمكن أيضا نمو الورم وأكد أن استخدام GFP مضان. بشكل عام، تعني التألق الحيوي يرتبط الأبعاد بالموجات فوق الصوتية سيلة لأورام المثانة، كما يرى بصريا في أرقام 1C و 1D. ومع ذلك، بعد أن تم التضحية بالحيوانات وتأكدت الورم عن طريق GFP، وجدنا أن التألق الحيوي يرتبط بشكل وثيق مع وجود ورم قابلة للحياة من فعل قياسات بالموجات فوق الصوتية. وكان هذا واضح بشكل خاص بين الفئران التي عولجت مع سارنا (على العكس من الضوابط) لأن المتبقي ندبا في الفئران التي عولجت في كثير من الأحيان تصور بواسطة الموجات فوق الصوتية ولكن لا يمكن تفريقها عن ورم الحية. <img src="/files/ftp_upload/4207/4207fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. حركية نمو الورم من أورام المثانة. (A) التصوير ضوء بارد يقيس luciferase النشاط ضمن أورام المثانة لتأكيد مكان ونموها. (ب) في ultrasoun المثانة فيفود باستخدام مسبار 40MHz تنتج صورا ورم أبعادها يمكن قياسها بدقة. (ج) الرسوم البيانية التي توضح زيادة الورم التقدمية في أبعاد التألق الحيوي والموجات فوق الصوتية. تمثل القيم يعني (+ / - الانحراف المعياري) في الفترة من 6 قياسات الحيوانات. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4207/4207fig1large.jpg" target="_blank">انقر هنا لعرض أكبر شخصية</a> .

<ol><li>Semple, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rational+design+of+cationic+lipids+for+siRNA+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Rational design of cationic lipids for siRNA delivery.</a> Nature. 28, 172-176 (2010).</li>
<li>Li, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+dsRNAs+induce+transcriptional+activation+in+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Small dsRNAs induce transcriptional activation in human cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 17337-17342 (2006).</li>
<li>Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antitumor+effect+of+dsRNA-induced+p21%28WAF1%2FCIP1%29+gene+activation+in+human+bladder+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+cancer+therapeutics%22%5BJournal%5D)">Antitumor effect of dsRNA-induced p21(WAF1/CIP1) gene activation in human bladder cancer cells.</a> Molecular cancer therapeutics. 7, 698-703 (2008).</li>
<li>Chancellor, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+results+of+myoblast+injection+into+the+urethra+and+bladder+wall%3A+a+possible+method+for+the+treatment+of+stress+urinary+incontinence+and+impaired+detrusor+contractility%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourology+and+urodynamics%22%5BJournal%5D)">Preliminary results of myoblast injection into the urethra and bladder wall: a possible method for the treatment of stress urinary incontinence and impaired detrusor contractility.</a> Neurourology and urodynamics. 19, 279-287 (2000).</li>
<li>Hadaschik, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+mouse+model+for+orthotopic+bladder+cancer+using+transurethral+tumour+inoculation+and+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+international%22%5BJournal%5D)">A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumour inoculation and bioluminescence imaging.</a> BJU international. 100, 1377-1384 (2007).</li>
<li>Fu, C., Apelo, C. A., Torres, B., Thai, K. H., Hsieh, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Bladder+Wall+Injection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Mouse Bladder Wall Injection.</a> J. Vis. Exp. (53), e2523(2011).</li>
<li>Dobek, G. L., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Orthotopic+Model+of+Murine+Bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer.+J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">An Orthotopic Model of Murine Bladder.</a> Cancer. J. Vis. Exp. (48), 2535(2011).</li>
<li>Dinney, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+metastatic+variants+from+human+transitional+cell+carcinoma+passaged+by+orthotopic+implantation+in+athymic+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+urology%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of metastatic variants from human transitional cell carcinoma passaged by orthotopic implantation in athymic nude mice.</a> The Journal of urology. 154, 1532-1538 (1995).</li>
</ol>

LCL هو المخترع في انتظار طلبات براءات الاختراع المتعلقة سارنا التي تم رفعها من قبل جامعة كاليفورنيا في سان فرانسيسكو ورخص للأدوية Alnylam.

نقدم لبروتوكول لإنشاء نموذج الفأر طعم أجنبي orthotopic ورم المثانة يليها العلاج داخل المثانة من الأورام مع سارنا الشرطة الوطنية الليبيرية وضعت والتي تستهدف مروجي P21 CIP1/WAF1 (P21) لتفعيل النسخي. 2، 3 والاورام الناتجة يمكن أن تكون وأكد ورصدها مع التصوير بالموجات فوق الصوتية وbioluminescent المثانة. نماذج قد تكون متفوقة على Orthotopic داخل الصفاق، تحت الجلد، أو نماذج عن طريق الوريد من خلال توفير بيئة البول والظهارة البولية الذي يقترب على نحو أوثق الذاتية سرطا...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليق (اختياري) </td></tr><tr><td> KU-7-لوك-GFP الخلايا </td><td> الفرجار </td><td> 128091 </td><td></td></tr><tr><td> عارية الفئران الغدة الصعترية (نيو / نو) </td><td> سيمونسن مختبرات </td><td> 6-7 أسابيع من العمر </td><td> سيم: (NCR) نيو / نو fisol </td></tr><tr><td> الموجات فوق الصوتية وحدة </td><td> Visualsonics </td><td> VEVO 770 </td><td> RMV-704 مسبار </td></tr><tr><td> تلألؤ بيولوجي وحدة </td><td> الفرجار </td><td> IVIS الطيف </td><td></td></tr><tr><td> إكسل safelet القسطرة </td><td> الصياد </td><td> 14-841-21 </td><td> 24G X ¾ &quot; </td></tr><tr><td> نترات الفضة </td><td> سيغما </td><td> S8157 </td><td></td></tr><tr><td> هاميلتون محقنة </td><td> هاميلتون المشتركMPANY </td><td> 80301 </td><td></td></tr><tr><td> الشرطة الوطنية الليبيرية، سارنا </td><td> Alnylam صيدلة </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> الجدول رقم 1. كواشف ومعدات معينة.

ورم في المثانة orthotopic النموذجي وتقييم المعالجة سارنا داخل المثانة

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

نحن نقدم طريقة جديدة لعلاج سرطان المثانة مع تسليم intravesically RNA تفعيل صغيرة (سارنا) في الفأر طعم أجنبي orthotopic نموذج ورم المثانة. يتم تأسيس نموذج الفأر بواسطة قسطرة الإحليل تحت التخدير العام بالاستنشاق. ومن ثم قدم حرق كيميائي على الغشاء المخاطي المثانة داخل المثانة باستخدام محلول نترات الفضة لعرقلة طبقة جلايكان المثانة وتمكن خلايا لنعلق. بعد عدة يغسل بماء معقم، الإنسان سرطان المثانة KU-7-luc2-GFP الخلايا تغرس من خلال قسطرة في المثانة ليسكن لمدة 2 ساعة. ويؤكد نمو لاحق من أورام المثانة ورصدها بواسطة الموجات فوق الصوتية في الجسم الحي المثانة والتصوير bioluminescent. ثم يتم التعامل مع الأورام intravesically مع سارنا صيغت في جزيئات الدهون (LNPs). ويتم رصد نمو الورم مع الموجات فوق الصوتية والتألق الحيوي. وأظهرت جميع خطوات من هذا الإجراء في شريط الفيديو المرافق له.

إنشاء ورم المثانة orthotopic نموذج لتقييم آثار antitumor من سارنا تسليم intravesically ونمو الورم الرصد بواسطة الموجات فوق الصوتية والتصوير bioluminescent.

ورم في المثانة Orthotopic النموذجي وتقييم المعالجة سارنا داخل المثانة

نقدم طريقة مستحدثة لعلاج سرطان المثانة باستخدام الحمض النووي الريبي الصغير المنشط (saRNA) الذي يُعطى عن طريق الحقن داخل المثانة في نموذج فأر مصاب بزيغ مثانة منغرس في موضعه الأصلي...

نقدم طريقة لإنشاء نموذج لورم مثانة في الموضع الأصلي في فئران تعاني من نقص المناعة. ويتم ذلك من خلال معالجة هذه الأورام بجزيئات صغيرة من الحمض الريبي النووي RNA مزدوج الشريط يتم توصيله داخل الأوعية الدموية، ومراقبة الأورام باستخدام كل من الموجات فوق الصوتية للمثانة والتصوير بالتلألؤ البيولوجي. يتم تحفيز التخدير العام باستخدام الإيزوفلوران المتبخر، مع وضع مرهم عيني معقم.يتم بعد ذلك وضع الفأر في وضعية الاستلقاء على الظهر، ويتم الحفاظ على التخدير باستخدام isof fluorine عبر القمع الأنفي. بعد ذلك، يجب تركيب قسطرة للفأر. نستخدم قسطرة وريدية عيار 24 gauge مع إزالة المِثقاب الإبري.غالبًا ما تكون عملية القسطرة الخطوة الأكثر صعوبة وغير متوقعة في البروتوكول. ويعد التشحيم الكافي باستخدام KY jelly واتباع التقنية الصحيحة من الركائز الأساسية لنجاح عملية القسطرة. تظهر هنا منطقة فرج الفأرة.تقع الإحليل أسفل طيات الفرج مباشرةً. بعد التشحيم، تُستخدم ملاقط القسطرة للإمساك بالفرج والإحليل وتثبيتهما برفق. في البداية، يتم استخدام زاوية أكثر حدة تبلغ 45 درجة لإدخال القسطرة في الإحليل، ولكن بمجرد الدخول في الإحليل، تُتخذ زاوية أكثر تسطحاً للمرور بسلاسة إلى المثانة.سنوضح هذه العملية هنا. ومرة أخرى، يمكن أن يساعد الضغط اللطيف على الحوض لتسوية الإحليل في كثير من الأحيان، ويجب توخي الحذر لتجنب الضغط بقوة مفرطة ضد المقاومة، لأن ذلك قد يؤدي إلى ثقب الإحليل أو المثانة. ويؤكد ظهور البول هنا داخل القسطرة هذا الموقع ضمن تجويف المثانة.يتم بعد ذلك سحب البول الموجود داخل القسطرة باستخدام إبرة المسبار، وتُترك القسطرة في مكانها. يجب أن يظل حوالي خمسة مليمترات من القسطرة مرئية خارج الإحليل لضمان بقاء طرف القسطرة في تجويف المثانة وعدم التصاقه بجدارها. فإذا تم إدخال القسطرة بعمق زائد، قد ينغرس الطرف في جدار المثانة مما يمنع عمليات الحقن.بالنسبة لجميع عمليات الحقن اللاحقة، يتم وضع سرنجة محملة على إبرة المرود عبر القسطرة. يتيح ذلك حقن أحجام دقيقة من خلال التخلص من المساحة الميتة داخل القسطرة، كما يجعل عمليات القسطرة المتكررة غير ضرورية لتجنب إحداث إصابة حرقية في جدار المثانة.يتم حقن 10 µL من نترات الفضة بتركيز 0.5 molar وتترك لمدة 10 ثوانٍ. يمكن لنترات الفضة أن تشكل راسباً أبيض مع البول المتبقي داخل المثانة. يتم إزالة هذا الراسب وأي محلول متبقٍ من القسطرة.ننتقل بعد ذلك إلى غسل المثانة بـ 100 µL من الماء المعقم أربع مرات، مع سحب السوائل من تجويف القسطرة في كل مرة. بعد عملية الغسل الأولى هذه، لا يزال الراسب الأبيض مرئياً داخل القسطرة، ولكن مع كل غسلة، يصبح السائل أكثر صفاءً. نستخدم خيطاً حريرياً بمقاس 4-0 لسد الإحليل، وبذلك نصبح مستعدين الآن لحقن الخلايا السرطانية.يتم تحميل الخلايا في محقنة متصلة بإبرة المسبار، ثم تُحقن الخلايا في المثانة. يُزال القسطر ويظل الإحليل مربوطاً مع بقاء الفأر تحت التخدير لمدة ساعتين. ويتم رصد تطور الورم في فترات زمنية محددة مسبقاً.باستخدام التصوير بالتلألؤ البيولوجي في الجسم الحي، يتم حقن الفئران أولاً بـ Lucifer والركيزة عن طريق الحقن داخل الصفاق. وبعد إحداث التخدير العام باستخدام الإيزوفلورين المتبخر، توضع الفئران في وضعية الاستلقاء الظهري داخل جهاز ivus. ويُقاس التلألؤ البيولوجي بوحدات فوتون في الثانية.يظهر وجود خلايا KU7 بوضوح داخل مثانات الفئران، ويمكن تتبع شدة التلألؤ البيولوجي بمرور الوقت. كما يمكن مراقبة وجود وأورام المثانة وتطورها باستخدام التصوير بالموجات فوق الصوتية. بعد تحفيز التخدير العام باستخدام isofluorane المتبخر، يتم وضع مرهم رمد معقم.يُوضع الفأر في وضعية الاستلقاء الظهري على طاولة الموجات فوق الصوتية. ويتم الحفاظ على التخدير باستخدام isof fluorine عبر القمع الأنفي. ويمكن تثبيت الأطراف الخلفية للفأر على الطاولة لتجنب الحركة المفرطة للجسم أثناء تحريك مسبار الموجات فوق الصوتية.بمجرد اكتمال ذلك، يتم وضع هلام الموجات فوق الصوتية على الجزء المتوسط من حوض الحيوان. وبعد وضع الهلام، يتم تثبيت مسبار بتردد 40 megahertz في جهاز التثبيت ثم خفضه ببطء فوق جسم الحيوان. وتظهر المثانة بوضوح كبنية مستديرة ناقصة الصدى في خط المنتصف.إذا لم يتعرض الحيوان لتهيج ملحوظ قبل التخدير، فإن المثانة عادةً ما تكون متمددة بالفعل، وقد وجدنا أنه ليس من الضروري تركيب قسطرة للفأر لتحقيق تمدد المثانة. يمكن هنا الحصول على صور مستعرضة وطولية على حد سواء، ويمكن رؤية الورم بسهولة داخل تجويف المثانة.في حال العثور على ورم، يمكن حفظ الصور لقياس أبعاد الورم. وبعد تكوين ورم في المثانة، تُعالج الفئرى عن طريق الحقن داخل المثانة بجزيئات RNA صغيرة مزدوجة السلسلة مُصاغة في جسيمات نانوية دهنية. يتم إعطاء تخدير عام، ويُطبق مرهم العين مرة أخرى.يتم بعد ذلك وضع الفأر في وضعية الاستلقاء الظهري وإجراء القسطرة الإحليلية. وكما وصفنا سابقاً، يُستخدم خيط جراحي من الحرير قياس 4-0 لسد الإحليل حول القسطرة. وعادةً ما يتم ربط عقدتين كما هو موضح هنا.تُستخدم حقنة فارغة مُحمّلة بإبرة مسبار لتفريغ المثانة تماماً. يتم غرس 50 µL من RNA قصير مزدوج السلسلة داخل المثانة بجرعة إجمالية قدرها 3 mg/kg. بعد ذلك، يتم إزالة الإبرة والقسطرة.سيبقى الفأر تحت تأثير التخدير مع إغلاق الإحليل لمدة إجمالية تبلغ ساعتين. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن تكتسب فهماً جيداً لطريقة إنشاء نموذج لورم مثانة فأر في موضعه الأصلي، مع مراقبة الورم باستخدام التصوير بالتلألؤ البيولوجي والموجات فوق الصوتية، ومعالجة الورم باستخدام حمض ريبوزي نووي صغير يتم إيصاله عن طريق التوصيل داخل المثانة. هناك بعض التفاصيل الدقيقة في هذه التقنية والتي تتطلب بعض التدريب، خاصة فيما يتعلق بالقسطرة، ولكن بشكل عام، يعد هذا البروتوكول قابلاً للتكرار بسهولة.لقد حققنا نجاحاً جيداً في زراعة أورام المثانة في الفئران، وكانت تأثيرات العلاج باستخدام الـ small RNA واعدة للغاية. ومع ذلك، فإن الأمر الأكثر إثارة في هذا البروتوكول هو أنه بينما قمنا بعلاج الفئران باستخدام الـ small RNA، يمكن استخدام التقنية نفسها لاختبار أي علاج داخل المثانة لسرطان المثانة.I.

an-orthotopic-bladder-tumor-model-evaluation-intravesical-sarna

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

تنشأ أورام المثانة في إناث الفئران بطريقة مينيملي من خلال قسطرة ، الكي المحلية ، والتصاق الخلايا السرطانية لاحقا الى مواقع الحرق.

نموذج مثلي من سرطان المثانة الفئران

في هذا الفيديو ، نصف عملية زرع تقويم العضيات لورم المثانة المزروعة في مثانة الفئران لدراسة دور بيئة الأعضاء في تطوير الأورام.

النموذج العضوي لورم المثانة: طريقة لزرع عضيات المثانة في مثانة الفئران المتلقية

في هذا الفيديو ، نصف الإجراء داخل المثانة لتوصيل الخلايا السرطانية إلى مثانة نموذج الفأر. يساعد هذا الإجراء في إنشاء نموذج ورم المثانة التقويمي الذي يمكن استخدامه لتطوير استراتيجيات علاجية.

نمذجة ورم المثانة التقويمي في نموذج الفأر: إجراء للإعطاء داخل المثانة للخلايا السرطانية في مثانة الفئران

يمكن أن يكون زرع الخلايا السرطانية في العضو الأصلي بمثابة نموذج ما قبل السريري المفيد لتقييم العلاجات الجديدة. يمكن زراعة خلايا سرطان المثانة MB49 داخل المثانة بعد التقطير داخل المثانة. يوضح هذا البروتوكول قسطرة مثانة الفأر لغرض زرع الورم وتوصيل الفيروسات الغدية.

وسرطان المثانة نموذج مثلي للدراسات توصيل الجينات

تقنية أنشئت لتطعيم الغازية مثلي xenografts سرطان المثانة الأولية يتطلب فتح البطن وتعبئة المثانة. هذا الإجراء يلحق قسط كبير من المراضة على الفئران، هي صعبة وتستغرق وقتا طويلا من الناحية الفنية. لذا قمنا بتطوير الدقة العالية، عن طريق الجلد باستخدام نهج توجيه الموجات فوق الصوتية.

مؤسسة المناظير الفئران مثلي المثانة Xenografts

هنا يتم وصف طريقة إنشاء نموذج فأر متجانس لورم المثانة التقويمي لتقييم الفعالية المضادة للورم للبروتين البكتيري HP-NAP.

تقييم فعالية<em&gt; H. بيلوري</em&gt; البروتين HP-NAP كأداة علاجية لعلاج سرطان المثانة في مثلي فأري موديل

يصف هذا البروتوكول جيل من الفئران أورام المثانة مثلي في الإناث C57BL / 6J الفئران ورصد نمو الورم.

والفئران مثلي المثانة نموذج ورم والورم نظام لكشف

هي الناجمة عن أورام المثانة مورين مع مسرطن النيتروسامين N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) (BBN). يتم توليد ورم المثانة غير المتجانسة؛ ولذلك يلزم إجراء تقييم دقيق لعبء الورم قبل التعشيه للعلاج التجريبي. نقدم هنا بروتوكولا التصوير بالرنين المغناطيسي سريعة وموثوق بها لتقييم حجم الورم والمرحلة.

تقييم التصوير بالرنين المغناطيسي لاورام المثانة مورين المستحثة مسرطن

يصف هذا البروتوكول توليد نماذج xenograft المتقوّدة من قبل المريض من خلال غرس خلايا سرطان الخلايا البولية عالية الجودة أو خلايا سرطان القولون والمستقيم داخل المستقيم في مرض السكري غير البدين / شديد مجتمعة الفئران نقص المناعة (NOD / SCID) لنمو الورم الأولي والانبثاث التلقائي تحت تأثير الخلايا اللمفية سترومال العقدة، والتي تحاكي تطور الأمراض النقيلية البشرية.

نماذج Xenograft المتوارثية المستمدة من المريض لسرطان الخلايا البولية البشرية ونمو ورم سرطان القولون والمستقيم وورم الانبثاث العفوي

ويقدم لمحة شاملة من التقنيات المستخدمة في توليد نموذج الفأر من سرطان الفم والرصد الكمي لغزو الورم داخل اللسان من خلال متعدد الفوتون المجهري للخلايا المسمى. هذا النظام يمكن أن تكون بمثابة منبرا مفيدا لتقييم نجاعة الأدوية الجزيئية والمضادة للمركبات الغازية.

متعدد الفوتون التصوير من غزو خلايا الورم في الفأر نموذج مثلي الفم سرطان الخلايا الحرشفية

تعلم إنشاء نموذج ورم مثانة أورثوتوبي في الفئران المثبطة مناعياً وتقييم علاج saRNA داخل المثانة باستخدام الموجات فوق الصوتية والتصوير البيولوميني.

ورم في المثانة Orthotopic النموذجي وتقييم المعالجة سارنا داخل المثانة

استكشف المزيد من الفيديوهات