ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

الكتاب ترغب في الاعتراف الدعم ذات الصلة لهذه المخطوطة من المفوضية الأوروبية البرنامج الإطاري السابع (PIOF-GA-2009-255466) والايرلندي مجلس البحوث الصحية (HRA_POR/2010/138). وكس الموسومة E. كان القولونية النوع هدية من الدكتور جيهان كورماك، كلية جامعة كورك.

1. ورم الحث <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحريض الورم روتينية، تم حقن الجرعة مكون للأورام من الخلايا علقت الحد الأدنى في 200 ميكرولتر من مستنبت المصل خالية تحت الجلد (SC) في الجناح الإصابة مجانا 6-8 الاسبوع القديمة الإناث BALB / C أو athymic الفئران MF1-nu/nu ن = 6 (هارلان، أكسفورد، المملكة المتحدة) (1 × 10 6 خلايا 4T1) باستخدام إبرة حقنة 21-قياس. وكان جدوى من الخلايا المستخدمة في التلقيح أكبر من 95٪ كما هو محدد من قبل عدد البصرية باستخدام haemocytometer والتريبان الأزرق استبعاد صبغ (Gibco). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد إنشاء الورم، وسمح أورام لتنمو وتتطور وتم رصدها مرتين أسبوعيا. تم حساب حجم الورم وفقا لصيغة V = (AB 2) Π / 6، حيث هو أطول قطر الورم وب عمودي هو أطول قطر إلى قطر واسع. </li></ol> 2. إعداد البكتيرية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سلالة بكتيرية المستخدمة في هذا protocoكان ل E. القولونية K-12 MG1655، غير البروتين السم، معربا عن سلالة أو إيواء البلازميد luxABCDE ترميز التي تمكن ليتم الكشف عن البكتيريا عن طريق BLI. E. كانت تزرع القولونية MG1655 التي تحتوي على luxABCDE المتكاملة هوائيا في 37 درجة مئوية في المتوسط ​​LB (سيغما الدريخ، أيرلندا) تستكمل مع 300 ميكروغرام / مل الاريثروميسين (EM). تم إنشاء مشتقة من bioluminescent MG1655 باستخدام بلازميد p16S لوكس الذي يحتوي على HELP P التأسيسي luxABCDE OPERON 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاستعداد للإدارة على الفئران، وحضنت الثقافات في المتوسط ​​LB C ° 37 في في في 200 دورة في الدقيقة شاكر إلى مرحلة منتصف سجل (الكثافة البصرية في 600 نانومتر). تم حصادها البكتيريا عن طريق الطرد المركزي (6،000 × ز لمدة 5 دقائق)، وغسلها مع برنامج تلفزيوني (سيغما)، ومخففة في PBS 1 × 7 10 وحدة مستعمرة تشكيل (كفو) / مل لإدارة IV، أو 1 × 10 10 للتسمين. </li></ol> 3. البكتيرية اإلداريةنشوئها <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تم تقسيم الفئران عشوائيا إلى مجموعات تجريبية عندما وصلت الأورام حوالي 100 مم 3 في وحدة التخزين. للإعطاء في الوريد، تلقت الفئران ضبط النفس كل 10 6 خلايا في 100 ميكرولتر، حقن في الوريد مباشرة الذيل الأفقي باستخدام إبرة حقنة 28G. تم تحديد عدد قابلة للحياة من كل من اللقاح الطلاء بأثر رجعي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للدراسات الاستعمار GIT، كانت تدار شفويا 10 9 الخلايا البكتيرية في 100 ميكرولتر في الماوس بالتزقيم، على ثلاثة أيام متتالية. وانخفضت مستويات الموجودة من قبل البكتيريا المتعايشة قبل تغذية من إضافة الستربتومايسين ملغ / 5 مل في مياه الشرب الماوس لمدة 7 أيام قبل بدء بالتزقيم عن طريق الفم 1. </li></ol> 4. تلألؤ بيولوجي التصوير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تم إجراء 2D التصوير في الجسم الحي باستخدام BLI IVIS100 (الفرجار). في تعريف إدارة الوقت آخر نقطة البكتيرية، كانت الفئران تخدير باستخدام الفرجار في XGI-8 غاز التخديرتم تنفيذ النظام مع Isofluorane 3٪، وكامل الجسم تحليل الصور في نظام 100 لمدة 2-5 دقيقة IVIS في حساسية عالية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للتصوير 3D، وضعت الفئران في تخدير ماوس المكوك التصوير داخل نظام التصوير الضوئي لتصوير الظهرية (IVIS الطيف، الفرجار). للحصول على الصور من إشارة وسيفيراز البكتيرية للإنشاء البصرية 3D، استخدمت موجات الانبعاثات مرشح تتراوح 500 حتي 580 نانومتر مع أوقات بن اقتناء 16 من دقيقة 3-4 في تصفية لتحقيق أقصى قدر من إشارة إلى نسبة الضوضاء. كجزء من هذه الصورة تسلسل الاستحواذ، تم الحصول على صورة ضوء منظم لتحديد خريطة الارتفاع. كان إدخال هذه الخريطة منتشر ضوء التصوير المقطعي (DLIT) اعادة البناء الخوارزميات التي تم استخدامها لتكوين صورة 3D البصرية باستخدام غير سالب الأمثل المربعات الصغرى 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وجرى تحديد المناطق ذات الأهمية وكميا باستخدام برنامج السكن صورة (الفرجار): تحليل الصور. </li></ol> 5. ممثلالنتائج في هذه الدراسة، والبكتيريا المسببة للأمراض غير المتعايشة القولونية K-12 MG1655 معربا عن OPERON luxABCDE كان IV تدار على فئران تحمل الاورام SC طعم أجنبي 4T1. تم الكشف عن بكتيريا لوكس إشارة تحديدا في أورام الفئران آخر IV-الإدارة (الشكل 2). انتعاش ثقافة البكتيريا من الفئران عينة بالتحقق من صحة وجود علاقة خطية بين الأعداد البكتيرية قابلة للحياة وكمية ضوء الكشف عن (الشكل 3). في الجسم الحي التصوير شفويا يديرها البكتيريا المتعايشة في GIT ويتحقق أيضا باستخدام 3D BLI. <img src="/files/ftp_upload/4318/4318fig1.jpg" alt="الشكل 1" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/4318/4318fig1highres.jpg"/> الشكل 1. بروتوكول الجدول الزمني. هي التي يسببها الأورام تحت الجلد في الفئران، والبكتيريا تدار على التنمية الورم (100 مم 3). الفئران الحية هي BLI ايمالذين تتراوح أعمارهم بين الإدارة في مختلف آخر مرة نقاط البكتيرية (الأسهم مرات عرض نموذجي). <img src="/files/ftp_upload/4318/4318fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> الشكل 2. إدارة E. وقد حثت القولونية MG1655 luxABCDE على الفئران الحاملة للورم. تحت الجلد الأورام 4T1 في MF1 نو / نو الفئران وE. القولونية MG1655 luxABCDE تدار على التنمية الورم. تلقى كل حيوان 10 6 خلايا حقن في الوريد مباشرة الذيل الأفقي. تم تصوير الفئران في غضون أربع نقاط خلال الدراسة (نقط سوداء Z-المحور والصور) مع الانتعاش اللاحقة من البكتيريا قادرة على البقاء (كفو) من أورام الفئران عينة ضحى (الرسم البياني بار). زيادة في أعداد البكتيريا والبلازميد التعبير الجيني في الأورام على وجه التحديد لوحظ على مر الزمن (الماوس ممثل يتضح في نقطة زمنية). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4318/4318fig2large.jpg" target="_blank">اضغط هنا لمشاهدتها بشكل اكبر شخصية</a> .<img src="/files/ftp_upload/4318/4318fig3.jpg" alt="الشكل 3" /> الشكل 3. والعلاقة بين تعداد أرقام الجرثومي Intratumoral وضوء بارد. البكتيريا قادرة على البقاء في الجسم الحي من قبل الثقافة الأورام البكتيرية السابقين من الأورام بعد BLI في مختلف نقاط الساعة الرابعة بعد الإدارة. تسجيل قيم أعداد البكتيريا (كفو) نسبة إلى وحدات في الجسم الحي ورسوم بيانية bioluminesce. ويلاحظ وجود علاقة قوية بين البكتريا وإشارات تلألؤ بيولوجي البكتيرية R 2 = 0.9717 1. <img src="/files/ftp_upload/4318/4318fig4.jpg" alt="الشكل 4" /> الشكل 4. المستعمر 3D IVIS صورة الجهاز الهضمي المسالك الفئران بواسطة E. MG1655 القولونية. واستعمر GIT من الفئران عن طريق الفم من كفو 9 10 من E. كولاي لمدة ثلاثة أيام متتالية. يظهر صورة العينة المعزولة من التصوير المقطعي 3D من الفأرة المستعمر.الصور تظهر 3D أطلس الماوس الرقمية من الهيكل العظمي لتوفير تسجيل التشريحية. E. القولونية MG1655 تلألؤ بيولوجي واضح باللون الأخضر في انخفاض، والأرجواني على مستويات أعلى.

<ol><li>Cronin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+in+vivo+bioluminescent+imaging+for+the+study+of+bacterial+tumour+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">High resolution in vivo bioluminescent imaging for the study of bacterial tumour targeting.</a> PLoS One. 7, e30940(2012).</li>
<li>Kuo, C., Coquoz, O., Troy, T. L., Xu, H., Rice, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+reconstruction+of+in+vivo+bioluminescent+sources+based+on+multispectral+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Opt%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional reconstruction of in vivo bioluminescent sources based on multispectral imaging.</a> J. Biomed. Opt. 12, 024007(2007).</li>
<li>Tangney, M., Ahmad, S., Collins, S. A., O'Sullivan, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+for+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Postgrad+Med%22%5BJournal%5D)">Gene therapy for prostate cancer.</a> Postgrad Med. 122, 166-180 (2010).</li>
<li>Morrissey, D., O'Sullivan, G. C., Tangney, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour+targeting+with+systemically+administered+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Tumour targeting with systemically administered bacteria.</a> Curr. Gene Ther. 10, 3-14 (2010).</li>
<li>Collins, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+vectors+in+cancer+immunotherapy%3A+which+vector+for+which+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Viral vectors in cancer immunotherapy: which vector for which strategy.</a> Curr. Gene Ther. 8, 66-78 (2008).</li>
<li>Yu, Y. A., Zhang, Q., Szalay, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+characterization+of+conditions+required+for+tumor+colonization+by+intravenously+delivered+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Establishment and characterization of conditions required for tumor colonization by intravenously delivered bacteria.</a> Biotechnol. Bioeng. 100, 567-578 (2008).</li>
<li>Baban, C. K., Cronin, M., O'Hanlon, D., O'Sullivan, G. C., Tangney, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacteria+as+vectors+for+gene+therapy+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Bioeng.+Bugs%22%5BJournal%5D)">Bacteria as vectors for gene therapy of cancer.</a> Bioeng. Bugs. 1, 385-394 (2010).</li>
<li>Cronin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orally+administered+bifidobacteria+as+vehicles+for+delivery+of+agents+to+systemic+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Orally administered bifidobacteria as vehicles for delivery of agents to systemic tumors.</a> Mol. Ther. 18, 1397-1407 (2010).</li>
<li>van Pijkeren, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+Listeria+monocytogenes-based+DNA+delivery+system+for+cancer+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">A novel Listeria monocytogenes-based DNA delivery system for cancer gene therapy.</a> Hum. Gene Ther. 21, 405-416 (2010).</li>
<li>Ahmad, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+effective+antitumor+response+after+mucosal+bacterial+vector+mediated+DNA+vaccination+with+endogenous+prostate+cancer+specific+antigen%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Induction of effective antitumor response after mucosal bacterial vector mediated DNA vaccination with endogenous prostate cancer specific antigen.</a> J. Urol. 186, 687-693 (2011).</li>
<li>Riedel, C. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+luciferase+tagging+system+for+Listeria+monocytogenes+allows+real-time+monitoring+in+vivo+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Improved luciferase tagging system for Listeria monocytogenes allows real-time monitoring in vivo and in vitro.</a> Appl Environ Microbiol. 73, 3091-3094 (2007).</li>
<li>Cheng, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-targeting+prodrug-activating+bacteria+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Tumor-targeting prodrug-activating bacteria for cancer therapy.</a> Cancer Gene Ther. 15, 393-401 (2008).</li>
<li>Foucault, M. L., Thomas, L., Goussard, S., Branchini, B. R., Grillot-Courvalin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+bioluminescence+imaging+for+the+study+of+intestinal+colonization+by+Escherichia+coli+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">In vivo bioluminescence imaging for the study of intestinal colonization by Escherichia coli in mice.</a> Appl. Environ. Microbiol. 76, 264-274 (2010).</li>
<li>Collins, S. A., Hiraoka, K., Inagaki, A., Kasahara, N., Tangney, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PET+Imaging+For+Gene+%26+Cell+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">PET Imaging For Gene & Cell Therapy.</a> Curr. Gene Ther. , (2012).</li>
<li>Tangney, M., Francis, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Optical+Imaging+in+Gene+%26+Cell+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">In vivo Optical Imaging in Gene & Cell Therapy.</a> Curr. Gene Ther. , (2012).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

في سياق العلاج الجيني، أظهرت استخدام العوامل البيولوجية لتسليم الجينات العلاجية للمرضى وعدا كبيرا 3-5. مثل الفيروسات، والخصائص البيولوجية الفطرية من البكتيريا تسمح الكفاءة في تنفيذ DNA إلى الخلايا أو الأنسجة، وخاصة في سياق السرطان. وقد تبين أن البكتيريا قادرة طبيعيا من صاروخ موجه للأورام عندما تدار بشكل منتظم مما أدى إلى مستويات عالية من النسخ المتماثل محليا والخارجية إما (غير الغازية الأنواع) أو داخل الخلايا السرطانية (مسببات الأمراض). ويعزى السرطان في البداية محددة ال...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> 4T1 خلية خط </td><td> ATCC </td><td> CRL-2539 </td><td> مسانج نموذج سرطان الثدي المستمدة من ورم BALB / ج الناشئة بصورة عفوية الثديية </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> سيغما الدريخ </td><td> D6429 </td><td> Dulbecco في معدلة النسر متوسطة </td></tr><tr><td> PBS </td><td> سيغما الدريخ </td><td> D8537 </td><td> التخزين المؤقت المالحة الفوسفات </td></tr><tr><td> Xenogen IVIS </td><td> الفرجار العلوم الحياتية </td><td></td><td> IVIS 100 ل2D التصوير؛ IVIS الطيف ل3D. </td></tr><tr><td> لوريا مرق ميلر (LB) </td><td> سيغما الدريخ </td><td> L2542 </td><td> متوسطة النمو لE. القولونية </td></TR&gt; <tr><td> الاريثروميسين </td><td> سيغما الدريخ </td><td> E5389 </td><td> مضاد حيوي </td></tr><tr><td> الستربتومايسين عقار طبي </td><td> سيغما الدريخ </td><td> S9137 </td><td> مضاد حيوي </td></tr><tr><td> الفئران MF1nu/nu </td><td> هارلان (UK) </td><td> 069 (نو) / 070 (نو / +) </td><td> HSD: Athymic عاري-Foxn1nu </td></tr><tr><td> BALB / ج الفئران </td><td> هارلان (UK) </td><td> 066 </td><td> النمط الفرداني: H-2 د </td></tr><tr><td> بالتزقيم إبرة </td><td> التعليم والتدريب المهني الحلول التقنية (UK) </td><td> DE009 </td><td> 22G X 38mm إبرة بالتزقيم على التوالي </td></tr><tr><td> حقنة للحقن IV </td><td> BD العلوم البيولوجية </td><td> 309309 حتي 1 مل </td><td> حقنة الأنسولين مع 28 بوصة ½ G X الإبرة الدقيقة الرابعة بشكل جيد. </td></tr><tr><td> حقنة التطعيم للورم </td><td> براون </td><td> 9161376V </td><td> Omnifix 26 G &amp; Xfrac12؛ إبرة بوصة </td></tr></tbody></table>

البكتيرية التصوير bioluminescent<em&gt; في الجسم الحي</em

Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo

هذا الفيديو يصف استخدام كامل الجسم bioluminesce التصوير (BLI) لدراسة الاتجار البكتيرية في الفئران الحية، مع التركيز على استخدام البكتيريا في الجينات والعلاج بالخلايا لمرض السرطان. البكتيريا تقديم فئة جذابة من ناقلات لعلاج السرطان، وحيازة القدرة الطبيعية على النمو داخل الأورام بعد تفضيلي الإدارة النظامية. بكتيريا مهندسة للتعبير عن الجينات لوكس راديو كاسيت تصريح BLI الكشف عن البكتيريا ومواقع الورم في نفس الوقت. ويمكن تصور موقع ومستويات البكتيريا داخل الأورام مع مرور الوقت درست بسهولة، في اثنين أو ثلاثة أبعاد. هذه الطريقة تنطبق على مجموعة واسعة من الأنواع البكتيرية وأنواع طعم أجنبي الورم. توضح هذه المقالة بروتوكول لتحليل البكتيريا داخل الفئران bioluminescent تحت الجلد تحمل الورم. يوصف أيضا من البكتيريا المتعايشة التصور في القناة الهضمية (GIT) من BLI. هذه قوية، ورخيصة، واستراتيجية في الوقت الحقيقي التصوير تمثيلاTS وسيلة مثالية لدراسة البكتيريا في الجسم الحي في سياق أبحاث السرطان، العلاج الجيني في وجه الخصوص، والأمراض المعدية. هذا الفيديو يوضح الإجراء لدراسة لوكس الموسومة E. القولونية في الفئران الحية، مما يدل على قراءات المكاني والزماني للتحقيق BLI استخدام مع نظام IVIS.

توضح هذه المقالة إدارة<em&gt; لوكس الموسومة</em&gt; البكتيريا على الفئران واللاحقة<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; التحليل باستخدام التصوير تلألؤ بيولوجي IVIS.

البكتيرية التصوير Bioluminescent<em&gt; في الجسم الحي</em

يصف هذا الفيديو استخدام التصوير بالتلألؤ البيولوجي للجسم كاملاً (BLI) لدراسة انتقال البكتيريا في الفئران الحية، مع التركيز على استخدام...

يصف هذا الفيديو استخدام التصوير bioluminescent للجسم بالكامل لدراسة انتقال البكتيريا في الفئران الحية، مع التركيز على الكشف عن النمو البكتيري داخل الطعوم الورمية xenografts؛ حيث تمثل البكتيريا فئة جذابة من النواقل لعلاج السرطان، لامتلاكها قدرة طبيعية على النمو بشكل تفضيلي داخل الأورام بعد الإعطاء عن طريق الوريد، سواء نمت خارج الخلايا الورمية أو بداخلها. وتسهل السلالات البكتيرية المعدلة هندسياً للتعبير عن كاسيت جين lux عملية الكشف عن البكتيريا والأورام في آن واحد. وتعد قيمة المراقبة الطولية غير الباضعة للسلالات البكتيرية in vivo مقبولة جيداً، حيث تساهم في تقليل استخدام الحيوانات وتوليد بيانات أكثر صلة إحصائياً مقارنة بالمقايسات النهائية.تتضمن هذه العملية تحفيز تكوين أورام تحت الجلد في الفئران. تُترك الأورام لتنمو ويتم مراقبتها بمرور الوقت. يتم إعطاء البكتيريا وتخضع الفئران للتصوير بالتلألؤ البيولوجي في نقاط زمنية محددة للتجارب الموصوفة هنا.يتم تحفيز نمو أورام تحت الجلد في فئران ذات خلفية مناعية كفؤة أو ناقصة التيموس. وبناءً على اختيار الطعم الغريب، تُزرع بكتيريا من نوع Lux من الأنواع المطلوبة مثل e coli في مزارع ليلية. تُغسل الخلايا البكتيرية ثم تُعلق من جديد بالتركيز المطلوب للإعطاء عن طريق الوريد.10⁶. يتم استخدام الخلايا البكتيرية في حجم حقن يبلغ 100 µL بشكل روتيني. ويتم تحضير الفئران التي تحمل أوراماً تحت الجلد، والتي يبلغ حجمها روتينياً 100 mm³، للعلاج.باستخدام إبرة حقن عيار 29، يتم حقن المعلق البكتيري في الوريد الذيل الجانبي. وتتكاثر البكتيريا تفضيلياً داخل الكتلة الورمية بمرور الوقت. وتستمر البكتيريا داخل الورم في التكاثر لعدة أسابيع، ويمكن اكتشافها بواسطة تصوير IVUS بين اليوم الثالث والسادس.بعد الإعطاء، وفيما يخص التصوير بالتلألؤ البيولوجي، يتم وضع الفئران الحية والمخدرة داخل غرفة ivus عند درجة حرارة 37 درجة. وإذا رغب المستخدم، يمكن تصوير عدة فئران في وقت واحد. يتم جمع الصور الفوتوغرافية وصور الضوء التلألؤي باستخدام كاميرا CCD مبردة وفقاً لإعدادات البرنامج المطلوبة.بناءً على جهاز التصوير المستخدم، يمكن إجراء تحليل ثنائي أو ثلاثي الأبعاد. يتم تحقيق علاقة قوية وخطية بين أعداد البكتيريا داخل الورم ومستويات الضوء المنبعث، مما يسمح بتقدير موثوق لأعداد البكتيريا في الجسم الحي. كما يمكن الكشف عن البكتيريا التي تعبر عن LX من أعماق الجسم.تم تصور البكتيريا المتعايشة التي تستعمر الأمعاء والتي تعبر عن نظام Lux لعدة أسابيع. كما تم إثبات فائدة التصوير بالتلألؤ البيولوجي لتحليل البكتيريا التي تعبر عن نظام lux داخل حيوانات التجارب بعد إعطائها عن طريق الغسيل المعوي (cavage).

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

علم المناعة والعدوى

يتم وصف أساليب التصوير تلألؤ بيولوجي من الالتهابات البكتيرية في الحيوانات الحية. يتم تعديل في التعبير عن مسببات الأمراض luciferase التصوير الضوئي السماح الجسم كله من الإصابات في الحيوانات الحية. يمكن أن يصاب النماذج الحيوانية مع التعبير عن مسببات الأمراض luciferase وبطبيعة الحال ينجم عن ذلك من تصور المرض في الوقت الحقيقي من خلال التصوير تلألؤ بيولوجي.

Luciferase به لالتهابات جرثومية في صورة الفئران

نحن هنا وصف الطرق لبناء والتخيل وقياس ردود الفعل bioluminescent كل من اليراع والإنزيمات وسيفيراز renilla أعرب في خلايا سرطان الثدي النقيلي خلال نموها...

في الجسم الحي التصوير المزدوج الركيزة Bioluminescent

المصدر: دي فريس، سي. آر. وآخرون، نموذج تطعيم متأخر لعدوى جرح زائف الزائفة المزمنة . J. Vis. Exp. (2020).يعرض هذا الفيديو تقنية تصوير متوهج حيويا لمراقبة تقدم العدوى البكتيرية في نموذج فأر حي. البكتيريا الممرضة التي تم هندستها باستخدام نظام الإبلاغ luxABCDE تصدر ضوءا في موقع العدوى، مما يسمح برؤية البكتيريا النشطة أيضيا. من خلال تصوير الفأر على مر الزمن، يمكن للباحثين تتبع ديناميكيات العدوى بشكل غير جراحي وقياس شدة الإشارات المضيئة الحيوية.

تصوير التوهج الحيوي للعدوى البكتيرية في الفئران

المصدر: فالنتاين، م. إ.، وآخرون، توليد طفرات حذف الجينات داخل الإطار في سودوموناس aeruginosa واختبار تخفيف الضراوة في نموذج فأر بسيط للعدوى. J. Vis. Exp. (2020)يوضح هذا الفيديو استخدام نهج تصوير قائم على التلألؤ الحيوي لمراقبة العدوى البكتيرية في نموذج فأر حي. يتيح التصوير المتوهج البيولوجي والأشعة السينية التصوير في الوقت الحقيقي وتحديد مواقع تشريحية للعدوى المنتشرة في جميع أنحاء المضيف.

التصوير اللحظي للعدوى البكتيرية في نموذج الفأر باستخدام التلألؤ الحيوي

المصدر: وانغ، ي.، وآخرون. في الحياة دراسة العلاج بالضوء الأزرق المضاد للميكروبات لعدوى الحروق المقاومة للأدوية متعددة Acinetobacter baumannii باستخدام التصوير التوهجي الحيوي. J. Vis. Exp. (2017)يوضح هذا الفيديو إجراء تصوير التهابات جروح الحروق في الفئران الملقحة بمادة Acinetobacter baumannii التي تحمل أوبيرونا مضيء حيويا. يوضح كيف ينتج أكسدة الركيزة المحفزة باللوسيفيراز ضوءا يتناسب مع الحمل البكتيري، مما يمكن من مراقبة تقدم العدوى في الوقت الحقيقي باستخدام نظام تصوير التلألؤ الحيوي.

تصوير التلألؤ الحيوي لجروح الحروق المصابة ب Acinetobacter baumannii في الفئران

الجمع بين التصوير الضوئي وμCT في نموذج الفأر العدوى زرع العظام، وذلك باستخدام إضاءة الحيوية سلالة هندسيا من المكورات العنقودية الذهبية، شريطة القدرة على noninvasively طوليا ومراقبة ديناميات عدوى بكتيرية، فضلا عن الاستجابة الالتهابية المقابلة والتغيرات التشريحية في العظام.

جنبا إلى جنب<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; بصري وμCT التصوير لرصد العدوى، التهاب، وتشريح العظام في العدوى زراعة العظام في الفئران

برزت العدوى التي تسببها السلالات البكتيرية المقاومة للأدوية المتعددة (MDR) كتهديد خطير للصحة العامة ، مما يستلزم تطوير علاجات بديلة. نقدم بروتوكولا لتقييم فعالية العلاج بالضوء الأزرق المضاد للميكروبات (aBL) لعدوى Acinetobacter baumannii MDR في حروق الفئران باستخدام التصوير الحيوي.

في فيفو التحقيق من مضادات الميكروبات العلاج الضوء الأزرق للمقاومة للأدوية المتعددة baumannii الراكدة حرق العدوى عن طريق تلألؤ بيولوجي التصوير

ويقدم بروتوكول مفصلاً نموذج الماوس ل enterohemorrhagic الاستعمار كولاي (الإشريكيّة) باستخدام البكتيريا المسماة الإضاءة الحيوية. يمكن المضي قدما الكشف عن هذه البكتيريا طرحه غير الغازية في فيفو التصوير النظام في الحيوانات الحية فهمنا الحالي لاستعمار القولونية.

الكشف عن استعمار الإشريكيّة القولونية Enterohemorrhagic موريني واستضافة بنظام الإضاءة الحيوية غير الغازية في فيفو

البكتيريا طرحه تنظيم إنتاج الضوء من خلال مجموعة متنوعة من الآليات مثل الاستشعار من النصاب القانوني. يسمح هذا الأسلوب رواية التحقيق في عين المكان للإضاءة الحيوية والترابط بين الانبعاثات الخفيفة لكثافة الخلية. طرحه اصطناعية الإشريكيّة القولونية يسمح نظام توصيف تجتمع لوكس والبروتينات لوكس وتفاعلها.

في الموقع القياس والعلاقة بين كثافة الخلية وانبعاث الضوء من البكتيريا طرحه

يصف هذا البروتوكول إنشاء نموذج ماوس يحمل الورم لمراقبة تطور الورم وتكوين الأوعية الدموية في الوقت الحقيقي عن طريق التصوير الغمر الحيوي المزدوج.

التصوير الإنارة الحيوية المزدوجة لتقدم الورم وتكوين الأوعية الدموية

يصف البروتوكول المقدم هنا الخطوات التفصيلية لإجراء دراسات فعالية الدواء في نموذج التوهج الحيوي لعدوى المثقبية الكروزية ، مع التركيز على الحصول على البيانات وتحليلها وتفسيرها. كما يتم توفير إجراءات استكشاف الأخطاء وإصلاحها ومراقبة الجودة لتقليل المشكلات الفنية.

إزالة الغموض عن تصوير التلألؤ الحيوي في الجسم الحي لنموذج فأر مرض شاغاس لدراسات فعالية الأدوية

اكتشف التصوير البيولومينيسنت للجسم الكامل لدراسة حركة البكتيريا في الفئران الحية ورصد نموها داخل الأورام. تُظهر هذه الطريقة قدرة البكتيريا المهندسة على النمو بشكل انتقائي داخل الأورام، مما يدعم استخدامها كوسائل علاجية مبتكرة لعلاج السرطان.

البكتيرية التصوير Bioluminescent

استكشف المزيد من الفيديوهات