Name: تجميد الخلايا البشرية ES (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-10-12T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: تعلم بروتوكول تجميد فعال لخلايا HuES الجنينية البشرية باستخدام مبردات حماية وتقنيات التبريد المتحكم به. تحافظ هذه الطريقة على قابلية الخلايا للتمايز وتطبيقاتها في الطب التجددي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم غسلها وصحية ، والثقافة ، بشكل كبير ، مع التوسع في برنامج تلفزيوني لإزالة بقايا وسائل الاعلام التي يمكن أن يشفي إلا رد فعل التربسين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم إضافة تحسنت 0.05 ٪ التربسين - EDTA لتغطية الخلايا ، وسمح لوحة لاحتضان لمدة تصل إلى 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ويمكن خلال هذا الوقت لوحظ أن الخلايا التقريب ، ومستعمرات رفع قبالة سطح اللوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وسوف تتكرر لطيف pipetting إزالة الخلايا والمستعمرات من سطح اللوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتوضع الخلايا في Trypsinized أنبوب مخروطي القياسية التي تتضمن وسائل الاعلام قبل تحسنت الخلية HES لإرواء التربسين المتبقية ، ونسج ذلك الحين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معلق الخلايا هي وسائط النمو في تركيز حوالي مليون الخلايا في واحد مل من وسائل الإعلام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد بشكل كاف معلق الخلايا ، يتم إضافة وسائل الإعلام تجمد الجليد الباردة في حجم متساوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تختلط الايقاف الخلية بدقة ، aliquoted الى تجميد قارورة ، وسمح لتجميد ببطء إلى 80C على مدى 24 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن تجميد الخلايا ثم انتقلت إلى مرحلة بخار النيتروجين السائل للتخزين على المدى الطويل ، أو البقاء في -80 لنحو ستة أشهر. </li></ol><p style=";text-align:right;direction:rtl"> ملاحظة : هذه قسامة المجمدة عند تركيز من 106 خلية / مل يكفي لإحياء ثقافة على طبق من 10cm. </p>

<ol>
	<li>Cowan, C. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+Embryonic+Stem+Cells+from+Human+Blastocysts.">Derivation of Embryonic Stem Cells from Human Blastocysts.</a> , 1650-1656 (2004).</li></ol>

<p style=";text-align:right;direction:rtl"> تقنية وصفنا لتجميد خطوط الخلايا الأشكال يعمل بشكل جيد لتخزين بكفاءة وإحياء خطوط الخلايا الأشكال وأيضا أي خلايا الثدييات في المصالح. تجميد نسبة صغيرة من الخلايا في كل مرور اعتبار مهم عند العمل مع خطوط الخلايا HES ، وشذوذ النمط النووي يمكن أن تنشأ خلايا غير طبيعية ويمكن أن تتخذ بسرعة أكثر من خط. وهكذا ، بعد أن جمدت انشقاقات في كل مرور بالإضافة إلى المصارف الكبيرة في بعض المقاطع غير مرغوب فيه للغاية. </p>

<table><tbody><tr><td>وسط HuES</td><td>وسط</td><td></td><td></td><td>لتحضير إجمالي 651.5 mL، أضف: 500 mL من KO-DMEM + 6.5 mL من PenStrep + 6.5 mL من L-Glut + 6.5 mL من NEAA + 0.6 &amp;micro;L من beta-mercapt&amp;#8211;thanol (مخزون بتركيز 14.3 M) + 65 mL من Serum Replacement + 65 mL من Plasmanate + 0.65 mL من bFGF2 (بتركيز نهائي ~10 ng/mL)</td></tr><tr><td>وسط التجميد</td><td>وسط</td><td></td><td></td><td>80% FCS (مصل عجل جنيني) + 20% DMSO (ثنائي ميثيل سلفوكسيد). يحفظ في درجة حرارة 4 &amp;deg;C.</td></tr></tbody></table>

تجميد الخلايا البشرية es

Freezing Human ES Cells

<p class="jove_content">نحن هنا لشرح كيفية مختبرنا يتجمد الأشكال الجذعية الجنينية خطوط الخلايا البشرية. يتم غسلها وصحية ، والثقافة ، بشكل كبير ، مع التوسع في برنامج تلفزيوني لإزالة بقايا وسائل الاعلام التي يمكن أن يشفي إلا رد فعل التربسين. ثم يتم إضافة تحسنت 0.05 ٪ التربسين - EDTA لتغطية الخلايا ، وسمح لوحة لاحتضان لمدة تصل إلى 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ويمكن خلال هذا الوقت لوحظ أن الخلايا التقريب ، ومستعمرات رفع قبالة سطح اللوحة. وسوف تتكرر لطيف pipetting إزالة الخلايا والمستعمرات من سطح اللوحة. وتوضع الخلايا في Trypsinized أنبوب مخروطي القياسية التي تتضمن وسائل الاعلام قبل تحسنت الخلية HES لإرواء التربسين المتبقية ، ونسج ذلك الحين. معلق الخلايا هي وسائط النمو في تركيز حوالي مليون الخلايا في واحد مل من وسائل الإعلام ، والتركيز مثل أن أحد قسامة المجمدة تكفي لإحياء ثقافة على طبق من 10cm. بعد بشكل كاف معلق الخلايا ، يتم إضافة وسائل الاعلام الجليد تجميد الباردة في حجم متساوية. تختلط الايقاف الخلية بدقة ، aliquoted الى تجميد قارورة ، وسمح لتجميد ببطء إلى 80C على مدى 24 ساعة. يمكن تجميد الخلايا ثم انتقلت إلى مرحلة بخار النيتروجين السائل للتخزين على المدى الطويل ، أو البقاء في -80 لنحو ستة أشهر.</p>

<p class="jove_content">نحن هنا لشرح كيفية مختبرنا يتجمد الأشكال الجذعية الجنينية خطوط الخلايا البشرية.</p>

تجميد الخلايا البشرية ES

نوضح هنا كيفية تجميد خطوط خلايا HuES الجذعية الجنينية البشرية في مختبرنا. يتم غسل مستنبت صحي في مرحلة التوسع الأسي باستخدام المحلول الملحي المبطن بالفوسفات (PBS) لإزالة...

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

نحن هنا لشرح كيفية مختبرنا يبدأ الأشكال الجذعية الجنينية البشرية خلية ثقافة سطر من الأسهم المجمدة.

ES خلايا الإنسان : ثقافة ابتداء من خلايا مجمدة

وتستخدم خلايا الثدييات تربيتها على نطاق واسع في دراسات بيولوجيا الخلية. هذا الفيديو يصف المهارات الأساسية اللازمة لتجميد وتخزين الخلايا وكيفية استرداد الأرصدة المجمدة.

تجميد والذوبان ، وخلايا تغليف للنقل

التفريق بين ESC يتزامن مع خلية من نوع تغييرات معينة في بنية وتركيبة لونين. الكشف عن هذه التغييرات يقدم أفكارا قيمة حول الآليات التي تحدد stemcellness وتمايز الخلايا. مناعي لونين (CHIP) يمثل قيمة لأسلوب تشريح الآليات الجزيئية الكامنة وراء تمايز الخلايا الجذعية.

مناعي لونين من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية

منذ جيمس طومسون وآخرون تطوير تقنية في عام 1998 لعزل وتنمو HES في الثقافة ، وتصبح خلايا لاستخدامها لاحقا تجميد والذوبان ، وتوسيع الخلايا من الأوراق المالية المجمدة الاجراءات الهامة التي أجريت في خلية ثقافة HES الروتينية. منذ HES خلايا حساسة للغاية لتؤكد للتجميد والذوبان ، يجب توخي الحذر خاصة. نحن هنا لشرح الطريقة المناسبة لإذابة الخلايا بسرعة HES من المخزونات النيتروجين السائل ، والطلاء لهم على الخلايا الجنينية الماوس المغذية ، وتجميد ببطء لهم على المدى الطويل التخزين.

تجميد والذوبان الخلايا الجذعية الجنينية البشرية

نصف بروتوكولا لعزل واستزراع الخلايا الظهارية للسلى البشري (hAECs) باستخدام الكواشف الخالية من المنتجات الحيوانية وفقا لإرشادات ممارسات التصنيع الجيدة الحالية (cGMP).

العزلة، والحفظ بالتبريد والثقافة من الخلايا الظهارية البشرية السلى للتطبيقات السريرية

يمكن إجراء  تحرير الجينوم للخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات (hPSCs) بسرعة وكفاءة. يتم تقديم إجراء تجريبي قوي للهندسة الوراثية لمركبات السلاسيوم العليا كما يتضح من تحرير موضع الملاذ الآمن AAVS1 للتعبير عن EGFP وإدخال مقاومة المضادات الحيوية.

إنشاء الجينوم تحريره المحفزة الإنسان خطوط الخلايا الجذعية: من استهداف لعزل

التوسع في خلايا المريء للأطفال الإنسان الظهارية باستخدام برمجة مشروطة يوفر المحققين ويبلغ عدد سكانها المريض محددة من الخلايا التي يمكن استخدامها لهندسة البنى المريء لزرع ذاتي لعلاج العيوب أو الإصابات وتكون بمثابة خزان لفحوصات الكشف العلاجية.

إعادة برمجة خلايا المشروطة للأطفال الإنسان المريء طلائي للاستخدام في هندسة الأنسجة وأمراض التحقيق

ويرد على بروتوكول تحضير البولي فينيل الكحول-co-إيتاكونيك الهلاميات المائية الحمضية بصلابة متفاوتة، التي كانت المطعمة مع أو بدون أوليجوبيبتيديس، للتحقيق في تأثير صلابة الحيوية على التفرقة وانتشار الخلايا الجذعية. وتسيطر صلابة من الهلاميات المائية الوقت كروسلينكينج.

ثقافة الخلايا الجذعية Pluripotent البشرية على حمض البولي فينيل الكحول-Co-إيتاكونيك الهلاميات المائية مع صلابة متفاوتة تحت ظروف خالية من كرة

هذا البروتوكول تفاصيل طريقة مكيفة لاشتقاق, توسيع, و cryopreserve خلايا البطانية الأوعية الدموية المجهرية التي تم الحصول عليها عن طريق التمييز بين الخلايا الجذعية متعددة القدرات الناجمة عن النشاط البشري, ودراسة خصائص حاجز الدم في الدماغ في نموذج الجسم الحي السابق.

اشتقاق، توسعة، المحافظة على التبريد وتوصيف خلايا الدماغ البطانية الدقيقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة من الإنسان

هنا نعرض كيفية استخدام جهاز تجميد شطيرة للتجميد السريع للعينات البيولوجية، بما في ذلك البكتيريا والخميرة والخلايا المستزرعة والخلايا المعزولة والأنسجة الحيوانية والبشرية، والفيروسات. كما نعرض كيفية إعداد العينات للقسمة فائقة بعد التجميد السريع.

التجميد السريع باستخدام جهاز تجميد ساندويتش للحفاظ على البنية الفائقة جيدة من العينات البيولوجية في المجهر الإلكترون

توفر هذه الدراسة بروتوكولا مفصلا للحفظ بالتبريد الفعال للخلايا الظهارية الصبغية الشبكية المشتقة من الخلايا الجذعية البشرية.

الحفظ بالتبريد للخلايا الظهارية الصبغية الشبكية المشتقة من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية في المرحلة المثلى

تعلم بروتوكول تجميد فعال لخلايا HuES الجنينية البشرية باستخدام مبردات حماية وتقنيات التبريد المتحكم به. تحافظ هذه الطريقة على قابلية الخلايا للتمايز وتطبيقاتها في الطب التجددي.

تجميد الخلايا البشرية ES

استكشف المزيد من الفيديوهات