May 9th, 2013
تقنية جديدة لإنشاء استنساخه في الجسم الحي نموذج من عنق الرحم الحبل الشوكي إصابة تمزق في الماوس. ويستند هذا الأسلوب على استقرار العمود الفقري عن طريق تثبيت للجوانب عنق الرحم وتهتك في النخاع الشوكي باستخدام شفرة تتأرجح مع دقة ± 0.01 ملم.
الهدف العام من التجربة هو توليد آفة تمزق قابلة للتكرار في الحبل الشوكي للفأر. يتم تحقيق ذلك عن طريق تعريض صفيحة عنق الرحم للخلف عندما يتم وضع في جهاز نظام إصابة لويزفيل. كخطوة ثانية ، يتم استخدام جهاز تثبيت مصمم خصيصا لتثبيت الفقرة المستهدفة للعمود الفقري للفأر.
بعد ذلك ، يتم تحديد الحبل الشوكي المستهدف بين الأقواس الصفيحية بعد إزالة الرباط الفلافوم في النهاية. تم إنشاء قسم النصف الظهري العنقي على عمق 0.75 ملم بدقة باستخدام شفرة متذبذبة وسائق صغير. الميزة الرئيسية للتقنية التي طورناها في المختبر هي إنشاء طريقة دقيقة للغاية لإنتاج إصابة تمزق في الحبل الشوكي.
هذا مهم لأن التقنيات التي تم استخدامها حتى الآن ، أي المقص أو المشرط ، خلقت مشاكل غير مكتملة وغير دقيقة لإصابة الحبل الشوكي. لدينا الآن طرق لتجنب كدمة الحبل الشوكي ، وإزاحة الحبل الشوكي بعيدا عن جهاز التمزق ، والنزيف المفرط الذي يحدث في إصابة الحبل الشوكي. باستخدام هذه التقنية ، نحن قادرون على إنشاء طريقة دقيقة للغاية تتجنب طريقة التقدير البصري لعمق إصابة الحبل الشوكي.
باستخدام هذه التقنية ، نشعر أنه يمكننا إحداث ثورة في طرق إصابة الحبل الشوكي التجريبية المستخدمة في نموذج التمزق ، والتي قد تكون مهمة بطبيعتها في تجديد المحور العصبي ، وكذلك في إنشاء إيجاد علاج لإصابة الحبل الشوكي. إثبات هذا الإجراء هو eing Jang ، جراح الأعصاب وهو عالم أبحاث جراحة الأعصاب في مختبرنا ، ابدأ هذا الإجراء عن طريق تعقيم الأدوات الجراحية التالية ، واثنين إلى ثلاثة أزواج من الملقط ، وثلاثة أزواج من المقص الدقيق ، وإبرة قياس 30 ، وخياطة URS الدقيقة ، ومشابك جلدية حامل إبرة ، وقضيب مشبك. ثم قم بتطهير مثبت العمود الفقري بعد ذلك ، قم بتخدير الفأر بمزيج من الكيتامين أو الزيلازين أو ثلاثي الإيثانول داخل الصفاق.
بعد ذلك ، احلق الشعر من رقبة الفأر. نظف البشرة بمحلول اليود بوفيدون و 70٪ كحول. ثم انقل الماوس إلى طاولة العمليات باستخدام وسادة تسخين مسبقة التدفئة.
ضع مرهم العين على العينين لمنع جفاف القرنية. بعد الحث المخدر ، قم بعمل شق جلدي خلفي في خط الوسط العنقي من الأذن إلى الأليفة الدهنية تحت الجلد في العمود الفقري العنقي السفلي. تحت المجهر ، قم بعمل شق جلدي في خط الوسط بين عضلات شبه المنحرف عند C اثنين وسحب عضلات الرأس في الدور نصف النهائي بشكل جانبي.
بعد ذلك ، قم بتمديد تشريح عضلات خط الوسط بشكل لطيف إلى عملية T الشائكة التي تعمل كمعلم موثوق. فصل العضلات عن T اثنين عملية شائكة. ثم قم بإزالة الجزء الغضروفي من العملية الشائكة T اثنين.
بعد ذلك ، قم بتشريح العضلات المجاورة للنخاع من الأقواس الصفيحية بشكل ثنائي من C أربعة إلى T اثنين باستخدام زوج من المقصات الدقيقة. يبدأ بجوار العمليات الشائكة ويمتد على كل من الأقواس الصفيحية إلى مفاصل الوجه. بعد انكشاف الجوانب الجانبية ، ضع الماوس على القناة على شكل حرف U لمثبت العمود الفقري للفأر.
ثم ضع أذرع الفولاذ المقاوم للصدأ لمثبت الماوس أسفل الجوانب المكشوفة بشكل ثنائي. بمجرد وضع الذراعين في مكانهما ، شد مسامير الإبهام للأذرع الفولاذية لتثبيت العمود الفقري تحت المجهر. قم بإزالة الرباط الضيق بين الأقواس الصفيحية C five و C ستة لفضح الجافية الأساسية بين الفضاء بين الرقائق.
استخدم إبرة قياس 30 لإنشاء استئصال الأذن الصغير ومقص صغير لتوسيع استئصال الأذن الدوراني. الحبل الشوكي جاهز الآن للخضوع لآفة التمزق الخاضعة للرقابة. في هذا الإجراء ، ضع مثبت العمود الفقري والفأر في مرحلة جهاز نظام الإصابة في لويزفيل حيث يتم توصيل الشفرة بموضعها الذي يتحكم فيه السائقون الصغيرون.
قادرة على ثلاثة نطاقات من الحركة لأداء آفة قسم HEMI الظهرية بين الصفيحة C من خمسة إلى ستة صفيحة مع شفرة مسطحة 2.3 ملم متصلة بالمذبذب. اضبط سعة الشفرة المتذبذبة على 0.5 ملم لأن السعات المنخفضة قد تقلل من سهولة تمزق الحبل السري بالكامل. ثم قم بتشغيل مفتاح هزاز الشفرة تحت المجهر ، ضع الحبل الشوكي للفأر مباشرة أسفل الشفرة الاهتزازية.
بعد ذلك ، ارفع المرحلة نحو الشفرة المتذبذبة باستخدام سجل التحكم في السائق الصغير. موضع الصفر عندما تلمس الشفرة بالكاد الوريد الظهري للحبل الشوكي ، يتم قياس عمق تمزق الحبل الشوكي بالنسبة إلى وضع الصفر. ثم ارفع موضع المسرح باستخدام التحكم في السائق الصغير.
يرفع دوران مقبض السائق الصغير بزاوية 360 درجة المسرح بمقدار 0.25 ملم. وبالتالي ، يتم إنشاء آفة الجزء الهيمي الظهري 0.75 ملم عن طريق تدوير مقبض المحرك الصغير ثلاث مرات عندما تبدأ الشفرة في تمزيق الحبل الشوكي ، وتليين المجال الجراحي بالري الملحي. بمجرد الوصول إلى العمق المحدد مسبقا ، قم بإيقاف تشغيل مفتاح الهزاز ، وقم بخفض المرحلة التي تدعم الماوس والمشبك من شفرة القطع.
إزالة الدم عن طريق الري بالمحلول الملحي فوق موقع الجراحة. ثم جفف المنطقة بأطراف قطنية Q لأن الإرقاء يحدث عادة في غضون دقيقة واحدة. في النهاية ، قم بإزالة الماوس من مثبت العمود الفقري وأغلق الجلد بالفولاذ المقاوم للصدأ.
مقاطع ميشيل. يتم تثبيت العمود الفقري العنقي عن طريق وضع الذراعين تحت الجوانب الجانبية ثم قفل مسامير الإبهام كما هو موضح في هذا الشكل ، يتم تعريض الجافية بين صفائح C خمسة إلى ستة C ، وستة إلى سبعة ، و C سبعة إلى T واحد دون أي إزالة للعظم. يوضح هنا المناظر السهمية لأربعة تمزقات في الحبل الشوكي الظهري على أعماق 0.5 و 0.8 و 1.1 و 1.4 ملم.
تشير إلى درجة عالية من الدقة باستخدام هذه التقنية. كانت إحدى المشكلات المتأصلة في إنشاء إصابات الحبل الشوكي هي عدم استقرار العمود الفقري العنقي. باستخدام مثبت العمود الفقري الذي طورته مجموعتنا ، أصبحنا الآن قادرين على إنشاء عمود فقري عنقي غير متحرك تماما.
سيسمح ذلك بتعزيز إصابة الحبل الشوكي باستخدام كدمة الحبل الشوكي ، وحقن الحبل الشوكي ، وكذلك زرع الخلايا في الحبل الشوكي لجميع طرق أبحاث الحبل الشوكي.
تصف هذه المقالة تقنية جديدة لإنشاء نموذج يمكن تكراره في الجسم الحي لإصابة تمزق الحبل الشوكي العنقي في الفئران. تعتمد الطريقة على تثبيت العمود الفقري وإجراء تمزق دقيق باستخدام شفرة متذبذبة، لتحقيق دقة عالية.
This technique addresses a critical bottleneck in preclinical spinal cord injury research by enabling reproducible, precise laceration lesions in mice. By eliminating variability from manual methods, it enhances target validation and mechanistic de-risking in axon regeneration studies. The improved lesion consistency supports predictive confidence in therapeutic candidate evaluation.
The method integrates into the discovery continuum from target validation through lead identification to preclinical efficacy testing in spinal cord injury models.