Name: ضعفت-الجمجمة وتقنيات النافذة القشرية لل في الجسم الحي البصرية بالاتساق التصوير المقطعي التصوير (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 28 s
Description: تعلم تقنية النافذة القشرية ذات الجمجمة الرقيقة لتصوير الدماغ بالتصوير المقطعي البصري في الفئران. تتيح هذه الطريقة غير الغازية الحصول على معلومات بنيوية ووظيفية دقيقة مع الحفاظ على حيوية الدماغ.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأيد هذا العمل من قبل والدليل على اكتشاف UC منحة مفهوم والمعاهد الوطنية للصحة (R00 EB007241). فإن الكتاب أود أن أشكر أيضا جاكلين هوبارد لمساعدتها في هذه التجربة.

1. إعداد الجراحية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> واستخدمت أنثى الفئران CD 1 تتراوح أعمارهم بين 6-8 أسابيع في تجاربنا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الماوس مع حقنة داخل الصفاق من مزيج الكيتامين وزيلازين (80 ملغ / كغ ketamine/10 ملغ / كغ زيلازين). ضع الماوس على لوحة homeothermic الأمثل لضمان درجة حرارة الجسم في ~ 37 درجة مئوية. رصد مستمر مستوى التخدير عن طريق اختبار ردود الفعل الحيوان (مثل معسر القدم مع ملقط حادة) وحقن التخدير أكثر عند الضرورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تليين كلتا العينين مع مرهم المسيل للدموع اصطناعية. إزالة الشعر على فروة الرأس باستخدام شفرة حلاقة وإزالة الشعر باستخدام 70٪ المتبقية منصات الإعدادية الكحول. تطبيق طبقة رقيقة من كريم إزالة الشعر ناير على فروة الرأس والانتظار 2 دقيقة من أجل أن تصبح نافذة المفعول. قم بمسح الشعر بعيدا ناير والمتبقي باستخدام قطعة قطن مبللة المالحة ومنصات الإعدادية الكحول. يجب أن تكون فروة الرأس أصلع تماما الآن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطهير فروة الرأس باستخدام عصا ممسحة تنظيف betadine ومع 70٪ منصات الإعدادية الإيثانول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التفاف بعناية الحيوان في الستائر الجراحية المثلى لضمان درجة حرارة الجسم من ~ 37 ° C وتركيب الحيوان إلى إطار التجسيمي لشل الجمجمة. بخفة الجمجمة لضمان استقرارها. وترد قائمة المواد المستخدمة في الجدول 1. </li></ol> 2. ضعفت-الجمجمة إعداد إطار القشرية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء شق عند نقطة المنتصف بين العينين. تواصل نحو caudally إلى نقطة المنتصف بين الأذنين. جزء الجلد بالملقط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد موقع المنطقة المراد ضعيفة تحت المجهر تشريح وإزالة بلطف باستخدام ملاقط اللفافة. تجفيف الجمجمة مع مسحات القطن المعقمة قبل إنشاء إطار ضعيفة القشرية. في تجاربنا، أنشأنا 4 × 4 مم ضعيفة نافذة الجمجمة ~ 1 مم الخلفي والجانبي للbregma. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تبدأ ترقق الجمجمة باستخدام جولة كربيد بر مع حجم مثقاب 0.75 مم في تدريبات اليد الجراحية باستخدام الضوء قل الحركة الكاسحذ. لا تنطبق الضغط المباشر على الجمجمة. وقف الحفر كل ثانية 20-30 لإزالة الغبار العظام باستخدام ملحي معقم ومسحات القطن وتجنب ارتفاع درجة الحرارة الجمجمة. فإن المالحة تساعد أيضا في تشتيت الحرارة في جميع أنحاء الجمجمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة تتم إزالة الطبقة الخارجية تماما من العظم المضغوط يجب منتصف طبقة العظم الإسفنجي يكون الآن مرئية. قد يكون هناك بعض نزيف طفيف كما الأوعية الدموية هي أكثر وضوحا في طبقة العظم الإسفنجي. التبديل إلى بر الحجر الأخضر ومواصلة الحفر باستخدام الحذر وطبقة إسفنجية هو أكثر حساسية. فإن بر الحجر الأخضر إزالة المواد أقل العظام أثناء إنشاء إطار التوزيع المتساوي في جميع أنحاء الجمجمة. وقف الحفر في بعض الأحيان لإزالة الغبار العظام والجمجمة لتبريد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وأخيرا، عندما الجمجمة أصبحت أكثر شفافية والأوعية الدموية على الدماغ مرئيا الآن، تبدأ تلميع الجمجمة باستخدام بر تلميع. وهذا سوف يسمح لترقق أكثر دقة حين تجانس أسفل الجمجمة. تحقق من ركاكة SKUليرة لبنانية عن طريق النقر عليها بلطف مع ملقط. وقف تلميع عندما يصبح الجمجمة مرنة قليلا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ينبغي أن يكون نافذة ضعيفة الجمجمة على نحو سلس تماما الآن وانعكاس وجاهزة للتصوير (الشكل 1). نظرا لطبيعة الأنسجة نثر عالية من الدماغ، ينبغي ضعيفة الجمجمة للا يقل عن 55 ميكرون لاختراق العمق الأمثل. وترد قائمة المواد المستخدمة في الجدول 1. </li></ol> 3. التصوير المقطعي التصوير الضوئي بالاتساق <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد اكتمال عملية جراحية، وتحقق معدل التنفس الحيوان وردود الفعل لضمان المستوى المناسب من التخدير وإدارة التخدير إضافية إذا لزم الأمر. إزالة الحيوان من الإطار التجسيمي، والحفاظ على الحيوانات ملفوفة في الستائر الجراحية، ونقل المواشي إلى محطة التصوير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل التصوير تحقق علامات لردود الفعل وتطبيق المسيل للدموع اصطناعية إضافية إذا لزم الأمر. تحميل الحيوان إلى الإطار التجسيمي لتأمين الجمجمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في ظل الحيوانأكتوبر الكاميرا وموقف TSCW تحت الشعاع الضوئي (الشكل 2). ويمكن لمشاهدة مستعرضة من الجمجمة والدماغ يكون الآن تصور (الشكل 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن الحصول على البيانات مرة واحدة تبدأ يقع مجال الاهتمام. لأغراض التصوير، ونحن نستخدم المرايا galvo على التوصل إلى إطار التصوير ويبلغ عرضه 4.0 ملم. تم الحصول على عمق التصوير من 2 ملم مع 6 ميجاوات من الكهرباء الحادث ونقطة محورية 1 ملم تحت الجمجمة ضعيفة. تتألف كل منطقة مستعرضة من 2048 بمسح المحوري بمعدل 0،14 اقتناء ثانية لكل صورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن أيضا مسح الحجمي من الدماغ يمكن الحصول عليها من خلال جمع مجموعة من الصور المقطعية 2D باستخدام مجموعتين من المرايا galvo لمسح XY مع مرآة galvo 1 مسح شعاع في الاتجاه السهمي والمرآة 2 galvo المسح في الاكليلية الاتجاه. </li></ol>

<ol><li>Bizheva, K., Unterhuber, A., Hermann, B., Povazay, B., Sattmann, H., Drexler, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+ex+vivo+and+in+vitro+brain+morphology+in+animal+models+with+ultrahigh+resolution+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Imaging ex vivo and in vitro brain morphology in animal models with ultrahigh resolution optical coherence tomography.</a> Journal of Biomedical Optics. 9, 719-724 (2004).</li>
<li>Fujimoto, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+for+ultrahigh+resolution+in+vivo+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography for ultrahigh resolution in vivo imaging.</a> Nature Biotechnology. 21, 1361-1367 (2003).</li>
<li>Wantanabe, H., Rajagopalan, U. M., Nakamichi, Y., Igarashi, K. M., Kadono, H., Tanifuji, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swept+source+optical+coherence+tomography+as+a+tool+for+real+time+visualization+and+localization+of+electrodes+used+in+electrophysiological+studies+of+brain+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Swept source optical coherence tomography as a tool for real time visualization and localization of electrodes used in electrophysiological studies of brain in vivo.</a> Biomedical Optics Express. 2, 3129-3134 (2011).</li>
<li>Huang, D., Swanson, E. A., Lin, C. P., Schuman, J. S., Stinson, W. G., Chang, W., Hee, M. R., Flottee, T., Gregory, K., Puliafito, C. A., Fujimoto, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography.</a> Science. 254, 1178-1181 (1991).</li>
<li>Mitsui, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+range+of+optical+reflectometry+with+spectral+interferometry%5BTitle%5D)+AND+%22Japanese+Journal+of+Applied+Physics%22%5BJournal%5D)">Dynamic range of optical reflectometry with spectral interferometry.</a> Japanese Journal of Applied Physics. 38, 6133-6137 (1999).</li>
<li>de Boer, J. F., Cense, B., Park, B. H., Pierce, M. C., Tearney, G. J., Bouma, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+signal-to-noise+ratio+in+spectral-domain+compared+with+time-domain+optical+coherence+tomograhy%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Letters%22%5BJournal%5D)">Improved signal-to-noise ratio in spectral-domain compared with time-domain optical coherence tomograhy.</a> Optics Letters. 28, 2067-2069 (2003).</li>
<li>de Boer, J. F. Ch. 5. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3ade+Boer%2C+JF+%22Optical+Coherence+Tomography%3A+Technology+and+Applications%22">Optical Coherence Tomography: Technology and Applications</a>. , Springer. (2008).</li>
<li>Choma, M. A., Sarunic, M. V., Yang, C., Izatt, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitivity+advantage+of+swept+source+and+fourier+domain+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Sensitivity advantage of swept source and fourier domain optical coherence tomography.</a> Optics Express. 11, 2183-2189 (2003).</li>
<li>Leitgeb, R. A., Drexler, W., Unterhuber, A., Hermann, B., Bajraszewski, T., Le, T., Stingl, A., Fercher, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrahigh+resolution+fourier+domain+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Ultrahigh resolution fourier domain optical coherence tomography.</a> Optics Express. 12, 2156-2165 (2004).</li>
<li>Drew, P. J., Shih, A. Y., Driscoll, J. D., Knutsen, P. M., Blinder, P., Davalos, D., Akassoglou, K., Tsai, P. S., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+optical+access+through+a+polished+and+reinforced+thinned+skull%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Chronic optical access through a polished and reinforced thinned skull.</a> Nature Methods. 7, 981-984 (2010).</li>
<li>Shih, A. Y., Mateo, C., Drew, P. J., Tsai, P. S., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Polished+and+Reinforced+Thinned-skull+Window+for+Long-term+Imaging+of+the+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A Polished and Reinforced Thinned-skull Window for Long-term Imaging of the Mouse.</a> J. Vis. Exp. 61, e3742(2012).</li>
<li>Yang, G., Pan, F., Parkhurst, C. N., Grutzendler, J., Gan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thinned-skull+cranial+window+technique+for+long-term+imaging+of+the+cortex+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Thinned-skull cranial window technique for long-term imaging of the cortex in live mice.</a> Nature Protocols. 5, (2010).</li>
<li>Lu, M., Majewska, S., K, A., Gelbard, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Thin-skull+Window+Technique+for+Chronic+Two-photon+In+vivo+Imaging+of+Murine+Microglia+in+Models+of+Neuroinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation.</a> J. Vis. Exp. (43), e2059(2010).</li>
<li>Wang, Y., Oh, C. M., Oliveira, M. C., Islam, M. S., Ortega, A., Park, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GPU+accelerated+real-time+multi-functional+spectral-domain+optical+coherence+tomography+system+at+1300nm%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">GPU accelerated real-time multi-functional spectral-domain optical coherence tomography system at 1300nm.</a> Optics Express. 20, 14797-14813 (2012).</li>
<li>Aguirre, A. D., Chen, Y., Fujimoto, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depth-resolved+imaging+of+functional+activation+in+the+rat+cerebral+cortex+using+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Opt.+Lett%22%5BJournal%5D)">Depth-resolved imaging of functional activation in the rat cerebral cortex using optical coherence tomography.</a> Opt. Lett. 31, 3459-3461 (2006).</li>
<li>Chen, Y., Aguirre, A. D., Ruvinskaya, L., Devor, A., Boas, D. A., Fujimoto, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+%28OCT%29+reveals+depth-resolved+dynamics+during+functional+brain+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography (OCT) reveals depth-resolved dynamics during functional brain activation.</a> Journal of Neuroscience Methods. 178, 162-173 (2009).</li>
<li>Liang, C., Wierwille, J., Moreira, T., Schwartzbauer, G., Jafri, M. S., Tang, C., Chen, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+forward-imaging+needle-type+OCT+probe+for+image+guided+stereotactic+procedures%5BTitle%5D)+AND+%22Opt+Express%22%5BJournal%5D)">A forward-imaging needle-type OCT probe for image guided stereotactic procedures.</a> Opt Express. 19, 26283-26294 (2011).</li>
<li>Srinivasan, V. J., Sakadzic, S., Gorczynska, I., Ruvinskaya, S., Wu, W., Fugimoto, J. G., Boas, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+cerebral+blood+flow+with+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Quantitative cerebral blood flow with optical coherence tomography.</a> Optics Express. 18, 2477-2494 (2010).</li>
<li>Galetta, K. M., Calabresi, P. A., Frohman, E. M., Balcer, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+Coherence+Tomography+%28OCT%29%3A+imaging+the+visual+pathway+as+a+model+for+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Society+for+Experimental+NeuroTherapeutics%22%5BJournal%5D)">Optical Coherence Tomography (OCT): imaging the visual pathway as a model for neurodegeneration.</a> The Journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. 8, 117-132 (2011).</li>
<li>Seigo, M. A., Sotirchos, E. S., Newsome, S., Babiarz, A., Eckstein, C., Ford, E., Oakley, J. D., Syc, S. B., Frohman, T. C., Ratchford, J. N., Balcer, L. J., Frohman, E. M., Calabresi, P. A., Saidha, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+assessment+of+retinal+neuronal+layers+in+multiple+sclerosis+with+maual+and+automated+optical+coherence+tomography+segementation+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurol%22%5BJournal%5D)">In vivo assessment of retinal neuronal layers in multiple sclerosis with maual and automated optical coherence tomography segementation techniques.</a> J. Neurol. , (2012).</li>
<li>Frohman, E. M., Fujimoto, J. G., Frohman, T. C., Calabresi, P. A., Cutter, G., Balcer, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography%3A+a+window+into+the+mechanisms+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Clinical+Practice%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography: a window into the mechanisms of multiple sclerosis.</a> Nature Clinical Practice. 4, 664-675 (2008).</li>
<li>Gill, A. S., Rajneesh, K. F., Owen, C. M., Yeh, J., Hsu, M., Binder, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+optical+detection+of+cerebral+edema+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Early optical detection of cerebral edema in vivo.</a> J. Neurosurg. 114, 470-477 (2011).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

التصوير مع وأكتوبر وضعفت الجمجمة، هي رواية للأعصاب التصوير تقنية فقط وقد تم التحقيق مؤخرا 15 و 16. في تجاربنا، أثبتنا جدوى SD-OCT التصوير من خلال TSCW في نموذج الفأر في الجسم الحي. من نتائجنا، وضعفت الجمجمة إلى حوالي 55 ميكرون ويتم الحصول على عمق الاختراق في حوالي 1 ملم مع دقة وضوح الصورة من 8 ميكرومتر ميكرومتر و20 في اتجاه محوري والجانبية، على التوالي. في إشارة كثافة الشخصي، OCT التصوير من خلال TSCW يزيد من شدة الإشارة واختراق العمق بالمقارنة مع جمجمة العادي <...

منذ بدء العمل به في أوائل عام 1990، وقد استخدم على نطاق واسع للتصوير أكتوبر البيولوجي للبنية الأنسجة وظيفة 2. أكتوبر يولد صور مقطعية عن طريق قياس صدى تأخير الوقت من 4 ضوء المرتدة عن طريق تنفيذ منخفضة مصدر الضوء الاتساق مع تداخل نيكلسون الألياف الضوئية 2،4. قدم للمرة الأولى SD-OCT، المعروف أيضا باسم فورييه مجال أكتوبر (FD-OCT)، في 1995 5 ويقدم طريقة التصوير متفوقة مقارنة مع التقليدية الوقت المجال أكتوبر (TD-OCT). في SD-OCT، يتم الاحتفاظ الذراع مرجع ثابتة مما أدى إلى سرعة عالية جدا وصورة عالية الدقة اقتناء 6-9. في الوقت الحاضر، وقد استخدمت نماذج TSCW إلى حد كبير عن الجسم الحي في تطبيقات تصوير الدماغ اثنين من الفوتون المجهري بدلا من حج القحف التقليدية. وقد استخدمت هذه TSCW بالتزامن مع لوحة الجمجمة مخصص أو زلة غطاء الزجاج 10-13 لتوفير IMA إضافيةجينج الاستقرار. في دراساتنا، لاحظنا أن الملحقات مثل هذه ليست ضرورية للتصوير أكتوبر عند استخدام TSCW. ولذلك، فإن عدم وجود لوحة أو الجمجمة تغطية زلات الزجاج يسمح لمجموعة واسعة من حجم الإطار التصوير لأنها قد تتداخل مع الشعاع الضوئي وتغيير الصور أكتوبر وقد ثبت A-ضعفت إعداد الجمجمة ليكون من المفيد في الدراسات التصويرية للدماغ باستخدام اثنين من الفوتون المجهري 10-13. في تجاربنا، ونحن الاستفادة من نظام SD-OCT لصورة القشرة في الجسم الحي من خلال TSCW. عادتنا الإعداد التصوير SD-OCT يحتوي على النطاق العريض، ومصدر الضوء المنخفض التماسك تتكون من اثنين من الثنائيات superluminescent (SLD) تركزت في 1295 نانومتر مع عرض النطاق الترددي من 97 نانومتر مما أدى إلى قرار محوري والجانبية من 8 ميكرومتر ميكرومتر و20، على التوالي 14 . مع جهاز التصوير الضوئي لدينا، ونحن نتصور أن التصوير من خلال TSCW لديها امكانات كبيرة في تحديد وتصور هياكل ووظائف في سالكثيفة ptically الدماغ الأنسجة.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> المواد </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> الكيتامين </td><td> طائر الفينيق الصيدلة </td><td> 57319-542-02 </td><td></td></tr><tr><td> زيلازين </td><td> Akorn، وشركة </td><td> 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> دموع اصطناعية مرهم </td><td> لعبة الركبي </td><td> 0536-6550-91 </td><td></td></tr><tr><td> ناير </td><td> الكنيسة وشركاه دوايت، وشركة </td><td> 4010130 </td><td></td></tr><tr><td> معقم الكحول الاعداديه منصة </td><td> كيندال الرعاية الصحية </td><td> 6818 </td><td></td></tr><tr><td> يميل القطن القضبان الرفيعة </td><td> Fisherbrand </td><td> 23-400-115 </td><td></td></tr><tr><td> Betadine الحل Swabstick </td><td> بوردو المنتجات &lt;/ TD&gt; <td> 67618-153-01 </td><td></td></tr><tr><td> محلول ملحي، .9٪ </td><td> طائر الفينيق الصيدلة </td><td> 57319-555-08 </td><td></td></tr><tr><td> المجسم الإطار </td><td> Stoelting </td><td></td><td></td></tr><tr><td> عالية السرعة حفر يدوية الجراحية </td><td> Foredom </td><td></td><td> 38000 دورة في الدقيقة </td></tr><tr><td> كربيد بر جولة </td><td> Stoelting </td><td></td><td> 0.75 مم </td></tr><tr><td> دورا والخضر الأحجار </td><td> Shofu </td><td></td><td> عرقوب: HP الشكل: BA1 </td></tr><tr><td> والملمع الخشن CompoMaster CompoMaster </td><td> Shofu </td><td></td><td> الشكل: ميني حزب العمال. </td></tr><tr><td> SpaceDrapes </td><td> برينتري العلمية، وشركة </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ضعفت-الجمجمة وتقنيات النافذة القشرية لل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; البصرية بالاتساق التصوير المقطعي التصوير

Thinned-skull Cortical Window Technique for In Vivo Optical Coherence Tomography Imaging

التصوير المقطعي التماسك البصري (أكتوبر) هي تقنية التصوير الطبية الحيوية للقرار المكانية والزمانية عالية. مع نهجها مينيملي وقد استخدم على نطاق واسع في أكتوبر العيون والأمراض الجلدية، أمراض الجهاز الهضمي و 1-3. باستخدام نافذة ضعيفة-الجمجمة القشرية (TSCW)، ونحن توظيف الطيفية المجال أكتوبر (SD-OCT) طريقة كأداة لصورة القشرة في الجسم الحي. عادة، وقد استخدم فتح الجمجمة، لتصوير الأعصاب، حيث أنه يوفر أكثر براعة، ومع ذلك، فإن اتباع نهج أقل الغازية TSCW وسيلة فعالة للتصوير المدى الطويل في الدراسات العصبية. هنا، نقدم طريقة لخلق TSCW في نموذج الفأر لفي الجسم الحي التصوير أكتوبر من القشرة المخية.

بعد إنشاء نافذة ضعفت خلال قشرة الدماغ يجب أن تكون الأوعية الدموية أكثر بروزا الآن بصريا (الشكل 1)، وسوف تسمح لعمق أعمق التصوير (تصل إلى 1 مم). وضعفت القشرة الحق في حوالي 55 ميكرون مقارنة جمجمة العادي بنحو 140 ميكرومتر قياس (الشكل 1)، ويوفر قدرا أكبر من الوضوح البصري. رقيق إلى 10-15 ميكرومتر مزيد من الممكن مع ذلك لا 11 لا تنفذ حسب الضرورة استخدام قسائم الغطاء الزجاجي وألواح الجمجمة في تجاربنا (الشكل 1 و 2). وقد سمحت هذه ...

نقدم وسيلة لخلق نافذة ضعيفة-الجمجمة القشرية (TSCW) في نموذج الفأر ل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; التصوير أكتوبر من القشرة المخية.

Optical coherence tomography (OCT) is a biomedical imaging technique  with high spatial-temporal resolution. With its minimally invasive approach OCT  has ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنشاء نافذة جمجمة رقيقة في نموذج فأر للتصوير المقطعي للدماغ بالتماسك البصري في الجسم الحي. يتم تحقيق ذلك عن طريق تخدير أولا وإعداده للجراحة. بعد ذلك ، قم بترقيق الجمجمة باستخدام نتوءات أسنان مختلفة.الخطوة الأخيرة هي الحصول على صور OCT للدماغ في الجسم الحي من خلال نافذة الجمجمة الرقيقة. في النهاية ، يمكن الحصول على المعلومات الهيكلية والوظيفية للدماغ من صور OCT الناتجة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل استئصال الكرانيكتيوم أو نوافذ الغطاء المنزلقة ، هي أن النافذة النهائية أقل توغلا ومن المرجح أن تحافظ على السلامة البيولوجية للدماغ وقابليته للحياة.تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية نحو تشخيص الاضطرابات العصبية لأن OCT يوفر دقة مكانية وزمانية عالية ويوفر اختراقا فائقا للعمق عند مقارنته بالفحص المجهري متحد البؤر والفوتونين. بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة لإنشاء سطح جمجمة رقيق بشكل موحد دون إدخال كسور في الجمجمة أو نزيف تحت الجافية. لبدء هذا الإجراء، قم بتخدير قرص مضغوط فأر واحد بين سن ستة إلى ثمانية أسابيع بحقن داخل الصفاق من مزيج الكيتامين والزيلازين.ثم ضع الماوس على وسادة أو بطانية هوميو لضمان درجة حرارة الجسم المثلى عند حوالي 37 درجة مئوية أثناء التحضير الجراحي ، ومراقبة مستوى التخدير باستمرار عن طريق اختبار ردود أفعال وحقن المزيد من التخدير عند الضرورة. بعد ذلك ، قم بتليين كلتا العينين بمرهم الدموع الاصطناعي. قم بإزالة الشعر من فروة الرأس باستخدام المقص.ثم قم بإزالة الشعر المقطوع المتبقي باستخدام وسادة أو مسحة. بعد ذلك ، ضعي طبقة رقيقة من كريم إزالة الشعر على فروة الرأس. بعد دقيقتين ، امسحي الكريم والشعر المتبقي برفق باستخدام المحلول الملحي ومسحات القطن المبللة وضمادات تحضير الكحول.الآن قم بتطهير فروة الرأس باستخدام عود مسحة البيتادين ونظفها باستخدام ضمادات تحضير الإيثانول بنسبة 70٪. ثم قم بتركيب على إطار تجسيمي لشل حركة الجمجمة. اضغط برفق على الجمجمة لضمان ثباتها.في هذا الإجراء ، ابدأ شق فروة الرأس عند نقطة خط الوسط بين العينين. استمر بشكل لطيف إلى نقطة خط الوسط بين جزء الأذنين ، والجلد يرفرف بالملقط. بعد ذلك ، حدد المنطقة المراد تخفيفها تحت مجهر تشريح.استخدم الملقط لكشط الجمجمة لإزالة أي لفافة متبقية. ثم جفف الجمجمة بمسحات قطنية معقمة قبل إنشاء نافذة قشرية رقيقة بأربعة ملليمترات بحوالي ملليمتر واحد من التوريما الخلفي والجانبي. استخدم مثقابا يدويا جراحيا مع نتوء دائري من الكربيد بحركة كاسحة خفيفة لتخفيف الجمجمة.لا تضغط مباشرة على الجمجمة. توقف عن الحفر كل 20 إلى 30 ثانية لإزالة غبار العظام باستخدام محلول ملحي معقم ومسحات قطنية ، ولتجنب ارتفاع درجة حرارة الجمجمة. سيساعد المحلول الملحي أيضا في تبديد الحرارة في جميع أنحاء الجمجمة.بمجرد إزالة الطبقة الخارجية من العظم المضغوط بالكامل ، يجب أن تكون طبقة العظم الإسفنجية الوسطى مرئية. قد يكون هناك نزيف طفيف لأن الأوعية الدموية تكون أكثر وضوحا في طبقة العظام الإسفنجية. قم بالتبديل إلى لدغ الحجر الأخضر واستمر في الحفر بحذر إضافي.نظرا لأن الطبقة الإسفنجية أكثر حساسية ، فإن نتوءات الحجر الأخضر ستزيل كمية أقل من المواد العظمية مع ضمان التكافؤ في جميع أنحاء نافذة الجمجمة. توقف عن الحفر من حين لآخر لإزالة غبار العظام وتبريد الجمجمة. أخيرا ، عندما تصبح الجمجمة أكثر شفافية وتكون الأوعية الدموية على الدماغ مرئية ، ابدأ في تلميع الجمجمة باستخدام بور تلميع ، وتحقق من سمك الجمجمة عن طريق النقر عليها برفق باستخدام ملقط توقف عن التلميع.عندما تصبح الجمجمة مرنة قليلا ، يجب أن تكون نافذة الجمجمة الرقيقة الآن ناعمة تماما وعاكسة وجاهزة للتصوير. نظرا لطبيعة أنسجة الدماغ شديدة التشتت ، يجب تخفيف الجمجمة إلى 55 ميكرون على الأقل لاختراق العمق الأمثل. بعد اكتمال الجراحة ، تحقق من معدل تنفس عن طريق الفحص البصري وردود الفعل لضمان المستوى المناسب من التخدير وإعطاء تخدير إضافي إذا لزم الأمر ، ضع تحت كاميرا OCT ، ثم ضع نافذة الجمجمة الرقيقة تحت الشعاع البصري.يمكن الآن تصور عرض مقطعي للجمجمة والدماغ. يمكن أن يبدأ الحصول على البيانات. بمجرد تحديد موقع منطقة الاهتمام لأغراض التصوير ، قمنا بمسح شعاع OCT فوق نافذة قشرية تصوير بعرض 4.0 ملم وحصلنا على عمق تصوير يبلغ ملليمترين مع ستة ملليواط من الطاقة الساقطة وبؤري 0.1 ملم أسفل الجمجمة الرقيقة.تتكون كل منطقة مقطعية من 2048 مسحا محوريا بمعدل اكتساب 0.14 ثانية لكل صورة. سمحت لنا هذه الطريقة بالذات بتحديد هياكل محددة في صور OCT المقطعية. يظهر هذا الشكل صورة OCT شبه السهمية للقشرة تحت جمجمة طبيعية ، وهنا يظهر صورة OCT شبه السهمية تحت جمجمة رقيقة.تكون هياكل الدماغ أكثر وضوحا تحت نافذة جمجمة رقيقة بدلا من الجمجمة العادية. بالإضافة إلى ذلك ، يتم أيضا الحصول على صورة OCT مقطعية إكليلية لتسهيل تحديد هياكل خط الوسط. يمكن أيضا الحصول على عمليات المسح الحجمي للدماغ من خلال جمع سلسلة من الصور المقطعية ثنائية الأبعاد باستخدام مجموعتين من مرايا gal O للمسح الضوئي XY مع مرآة gal O الأولى التي تقوم بمسح الشعاع في الاتجاه السهمي ، ومرآة gal الثانية تمسح الاتجاه الإكليلي.بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال هذه التقنية في 10 دقائق إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. في حين أن محاولة هذا الإجراء من المهم لتخفيف الجمجمة بشكل موحد لضمان اختراق إشارة كافية أثناء التصوير OCT, بعد مشاهدة هذا الفيديو, يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إعداد نافذة قشرية رقيقة للجمجمة لأغراض التصوير OCT.

thinned-skull-cortical-window-technique-for-vivo-optical-coherence

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

نحن تصف طريقة لتصور مرارا الفئران الخلايا الدبقية الصغيرة وتعميم...

تقنية نافذة رقيقة الجمجمة لالمزمنة ثنائي الفوتون في الجسم الحي التصوير من الخلايا الدبقية الصغيرة في الفئران نماذج من Neuroinflammation

في هذا الفيديو والمواد التكميلية ، وتبين لنا بروتوكول...

مزمنة التصوير ماوس القشرة البصرية باستخدام إعداد ضعفت - الجمجمة

نقدم وسيلة لتشكيل نافذة التصوير في جمجمة الفأر الذي يمتد ملليمتر وغير مستقرة لشهور دون التهاب في الدماغ. هي مناسبة تماما هذه الطريقة لدراسات طولية من تدفق الدم، وديناميات الخلوية، وخلية / بنية الأوعية الدموية باستخدام ثنائي الفوتون المجهري.

مصقول وعززت ضعيفة، جمجمة نافذة على المدى الطويل التصوير من مخ الفأر

من خلال الجمع بين ومصقول المقوى رقيقة الجمجمة (منافذ) الجمجمة وورم أرومي دبقي إطار حقن الخلايا (GBM)، يمكننا أن نلاحظ بدء دبقي والنمو من خلايا GBM حقن في دماغ فأر حي طوليا.

بدء تصوير دبقي<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; من خلال نافذة رقيقة الجمجمة ملمع وعززت القحف

يوفر التصوير بفاصل زمني &lt; p class = 'jove_content'&gt; في الحي معلومات قيمة عن إعادة التنظيم الهيكلي في الدماغ السليم. هنا ، نقدم مستحضر جمجمة رقيق يسمح بالتصوير عبر الجمجمة للهياكل المشبكية المصنفة بالفلورسنت في قشرة الفأر الحي عن طريق الفحص المجهري ثنائي الفوتون.

ثنائي الفوتون<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; التصوير من العمود الفقري شجيري في اللحاء باستخدام الماوس الجمجمة ضعفت إعداد

هنا ، نصف نهج الفحص المجهري البصري شبه الغازي لتحريض جلطة ضوئية من Rose Bengal في القشرة الحسية الجسدية للفأر في الجسم الحي.  يتم وصف الجوانب الفنية لإجراء التصوير من تحريض حدث التخثر الضوئي إلى التطبيق وجمع البيانات.

روز البنغال Photothrombosis بواسطة التصوير الضوئي متحد البؤر<em&gt; في فيفو</em&gt;: نموذج لسفينة واحدة السكتة الدماغية

توضح هذه المخطوطة إجراء لتتبع إعادة تشكيل cerebrovasculature خلال تراكم ترسبات الأميلويد في الجسم الحي باستخدام طولية اثنين من الفوتون المجهري. وإعداد ضعفت الجمجمة يمكن تصور الأصباغ الفلورية لتقييم تطور الضرر الدماغية في نموذج الفأر من مرض الزهايمر.

طولي<em&gt; في فيفو</em&gt; التصوير من Cerebrovasculature: الأقرب للأمراض الجهاز العصبي المركزي

يصف لنا إجراء تجريبي لقياس نشاط الخلايا العصبية من خلال النوافذ الضوئية المزدوجة أعلاه الثنائية كورتيسيس الأولية somatosensory (S1) في Thy1-GCaMP6s الفئران المعدلة وراثيا باستخدام 2-فوتون (ف 2) الفحص المجهري في فيفو.

التصوير النشاط العصبي في القشرة الأولية Somatosensory باستخدام Thy1-GCaMP6s الفئران المحورة وراثيا

يظهر هنا بروتوكول لزرع نافذة جمجمة مزمنة للتصوير الطولي لخلايا الدماغ في الفئران المستيقظة المقيدة الرأس.

زرع نافذة جمجمية للتصوير المتكرر في الجسم الحي في الفئران المستيقظة

قدمنا تقنية تصوير جديدة تسمى التصوير المقطعي متعدد الطبقات البصري (OMLIT)، والتي تتيح التصوير غير المتحيز لجميع الخلايا في عينات الدماغ على المستوى المتوسط ويمكن دمجها بسلاسة في سير عمل التصوير الخاص بالمجهر الإلكتروني الماسح التسلسلي المعتمد على الشريط على نفس العينة.

طريقة تصوير بصري متوافقة مع المجهر الإلكتروني الماسح لرسم خرائط الدماغ لجميع الخلايا بالمنظار

تعلم تقنية النافذة القشرية ذات الجمجمة الرقيقة لتصوير الدماغ بالتصوير المقطعي البصري في الفئران. تتيح هذه الطريقة غير الغازية الحصول على معلومات بنيوية ووظيفية دقيقة مع الحفاظ على حيوية الدماغ.

ضعفت-الجمجمة وتقنيات النافذة القشرية لل

استكشف المزيد من الفيديوهات