يعيش التصوير من الاستجابة للأدوية الأورام المكروية في في نماذج الماوس من سرطان الثدي

الهدف العام من هذا الإجراء هو تتبع اختراق الدواء في الوقت الفعلي والاستجابة العلاجية لإعطاء الدواء العلاجي. يتم تحقيق ذلك عن طريق علاج أولا بالدواء. بعد ذلك ، يتم الكشف عن الغدة الثديية الأربية التي تحتوي على الورم عن طريق إنشاء سديلة جلدية.

ثم يتم نقل الفأر إلى المرحلة المجهرية ويتم قياس تشبع الأكسجين في الدم ومعدلات النبض ويتم إدخال خط سكني للسوائل والأدوية أو إعطاء الصبغة. أخيرا ، يتم الحصول على صور الفاصل الزمني لتحليلات لاحقة. في النهاية ، يمكن الحصول على نتائج تظهر تغيرات في موت الخلايا أو تفاعلات سدى الورم استجابة للدواء من خلال الفحص المجهري متحد البؤر للقرص الدوار الحي لأورام الثدي في الفئران.

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال البيئة المكروية للورم ، مثل كيفية تأثير مكونات السدى المختلفة للورم على الاستجابة للعلاج. قبل البدء ، راجع البروتوكول المكتوب للجداول الزمنية النموذجية لإدارة الأدوية والتصوير. قم بتشغيل معقم الخرز الساخن واتركه يصل إلى 200 درجة مئوية على الأقل.

بعد غسل الأدوات الجراحية بالماء والصابون ، بما في ذلك زوج من الملقط بالأسنان ، وزوج من الملقط المسنن ، وزوجين من المقصات ، استخدم معقم الخرز الساخن لتعقيمها لمدة 30 ثانية على الأقل. ثم دعهم. برد. ضع معتاد على الثمالة في المختبر فوق غطاء الستايروفوم الذي سيتم استخدامه كمنصة جراحية.

استخدم شريطا مختبري لتثبيت مخروط الأنف بخط على نظام التخدير على معتاد على الثمالة في المختبر وبعض القياس 18 بإبرة بمقدار بوصة ونصف من خلال الشريط في غطاء الستايروفوم على جانبي مخروط الأنف للحفاظ على مخروط الأنف مثبتا في مكانه. توضع جانبا شاش البيتادين المعقم. مناديل 70٪ من الأيزوبروبانول شريحة مجهر وغراء فائق وأربع قطع من شريط المختبر بعرض نصف بوصة.

بعد تخدير في غرفة الحث ، عندما يتنفس بعمق وببطء ، انقل الفأر إلى المنصة الجراحية ، بحيث يكون الجانب البطني متجها لأعلى. لتجنب الضغط المرتفع ، افتح خط التخدير على المنصة الجراحية ثم أغلق خط التخدير في غرفة الحث. تقليل تركيز الأيزوفلوران من 4٪ إلى 2.5٪ تأكد من أن عمق التخدير كاف للجراحة عن طريق إجراء قرصة وسادة القدم.

إذا لم يتفاعل ، فاستخدم أربع قطع من شريط المختبر لتثبيت أطرافه بالمنصة الجراحية واستخدم ماكينة حلاقة كهربائية لإزالة الشعر من السطح البطني. استخدم مناديل الأيزوبروبانول المبللة بنسبة 70٪ ، متبوعة بتطبيق البيتادين على شاش معقم لتطهير السطح البطني للحيوان باستخدام المقص والملقط بالأسنان. قم بعمل شق خط الوسط البطني تحت الجلد من حوالي ثلاثة ملليمترات فوق مجرى البول إلى عملية الخنجري.

احرص على تجنب ثقب أو قطع الصفاق بالمقص والملقط المسنن. فصل الجلد برفق عن التجويف البريتوني مع الغدة الثديية الأربية التي تحتوي على الورم المراد تصويره لا يزال متصلا. ضع شريحة مجهر زجاجي على سديلة الجلد بحيث يجلس الجزء الأكبر من الورم بشكل مسطح بمجرد وضع الفأر على المسرح ، وحتى لا تعيقه الأطراف الخلفية.

بمجرد وضع شريحة المجهر بشكل صحيح ، استخدم الغراء الفائق لربط الشريحة بالسطح الخارجي للجلد. قم بإزالة شريط المختبر الذي يثبت أطراف. افتح خط التخدير إلى مرحلة المجهر، ثم أغلق خط التخدير على المنصة الجراحية.

انقل بسرعة إلى مرحلة المجهر بمجرد نقل ، ضع خط التخدير ومخروط الأنف وقم بتثبيته لضمان بقاء الفأر مخدرا وفي وضع مريح. تقليل تركيز الأيزوفلوران إلى 1.5٪ كشف الورم بحيث يتم وضعه في أعلى ووسط أحد منافذ التصوير المغطاة بالزجاج على مرحلة المجهر. أدخل الخط داخل الصفاق الساكن مع مجموعة التسريب المجنح المرفقة بحقنة المليلتر الواحدة التي تحتوي على محلول ملحي معقم PBS أو محلول ملحي مع يوديد البروبيديوم.

عند إدخال الخط داخل الصفاق ، قم بحقن بمحلول ملحي 100 ميكرولتر مع يوديد البروبيديوم واستمر في حقن 50 ميكرولتر من المحلول الملحي مع يوديد البروبيديوم كل ساعة حتى تكتمل جلسة التصوير. باستخدام قطع العين ، تحقق من وضع الورم بشكل صحيح وتسجيله برفق أسفل شريحة المجهر والخط داخل الصفاق. يجب تأمين الشريحة بشكل فضفاض بما يكفي بحيث لا يتم إعاقة تدفق الدم إلى الأنسجة.

يساعد ضبط شريحة المجهر على تقليل القطع الأثرية للتصوير التي يدخلها تنفس للحصول على صور بفاصل زمني. استخدم المدير الجزئي للبرنامج مفتوح المصدر ، وقم بتجميع وتحليل البيانات الأولية باستخدام IRIS أو أي برنامج آخر لتحليل الصور. يمكن استخدام خيوط DExT المترافقة بالفلورسنت كعلامة بديلة لتوصيل الدواء إلى الأنسجة.

يظهر هنا وصول اثنين من ميجادالتون ديكستران IV مترافق fitzy يتم حقنهما في فأر يعبر عن بروتين الفلورسنت الأزرق في خلايا سرطان الثدي. بعد وصول الدواء إلى الورم ، يمكن تصوير التسرب والانتشار لتحديد عمر النصف داخل الأوعية الدموية وتوزيع الدواء. هنا ، يظهر تسرب وتوزيع LOR المترافق 10 كيلودالتون ديكستران IV المحقون في فأر يعبر عن بروتين الفلورسنت الأزرق في خلايا سرطان الثدي والبروتين الفلوري الأخضر في الخلايا النخاعية.

يمكن أن يوفر التصوير معلومات تتعلق بنوع موت الخلايا التي تمر بها الخلايا السرطانية. هنا ، لوحظت التغيرات النووية الهيكلية التي تدل على النخر أو موت الخلايا المبرمج في فأر يعبر عن بروتين الفلورسنت الأخضر المترافق مع هيسون اثنين ب. بعد العلاج بالدوكسوروبيسين ، غالبا ما يؤدي موت الخلايا السرطانية الناجم عن العلاج الكيميائي إلى تجنيد تفاعلي للخلايا المناعية في الأورام.

فيما يلي مثال على هذه الاستجابة اللحمية للعلاج الحاد بالدوكسوروبيسين في فأر يعبر عن بروتينات الفلورسنت الزرقاء والخضراء في سرطان الثدي والخلايا النخاعية على التوالي. بالإضافة إلى تصور الاستجابة اللحمية الكلية للعلاج الكيميائي ، يمكن أيضا تصور الاستجابات اللحمية المتخصصة هنا. يظهر البلعمة لمادة الخلية الميتة بواسطة خلية مجاورة بمجرد إتقانها.

يمكن إجراء هذه التقنية في 30 إلى 60 دقيقة ويمكن تصوير لمدة 12 إلى 40 ساعة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح.