Name: العزلة وتحليل الدماغ المعزول من الكريات البيضاء المتصورة berghei ANKA الفئران المصابة (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 48 s
Description: تعلم عزل الخلايا البيضاء الالتهابية من أوعية دماغ الفئران المصابة بـPlasmodium berghei ANKA باستخدام التدفق الخلوي متعدد الألوان. تتيح هذه الطريقة تحديد النمط الظاهري للخلايا المهاجرة للدماغ.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

فإن الكتاب أود أن أشكر الآنسة ليانا Mackiewicz للمساعدة التقنية. وقدم هذا العمل ممكنا من خلال دعم حكومة الولاية الفيكتوري البنية التحتية التشغيلية والحكومة الأسترالية الوطنية للصحة والبحوث الطبية IRIISS المجلس ومشروع منح 1031212.

1. إصابة الفئران مع P. berghei-ANKA <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقسامة من تذويب P. cryopreserved berghei ANKA pRBC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كبح الدماغيه الملاريا المقاومة للالماوس المانحة BALB / ج (8-12 أسابيع من العمر) باستخدام تقنية ضبط النفس باليدين. حقن الماوس مع 100-200 ميكرولتر من استخدام الأنسولين pRBC 1 مل حقنة (إبرة 28G). بشكل روتيني، يتم حقن الفئران المانحة 1-2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على بعد 4-5 أيام العدوى (PI) إزالة الماوس المانحة من القفص ووضعه على محطة عمل أو لوحة المتاح العمل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كبح بلطف الماوس في نهاية الذيل وباستخدام مقص صغير قطع رأس الذيل (حوالي 1 ملم). وبدلا من ذلك، يمكن أن يقوم ثقب صغير الذيل باستخدام إبرة G 25. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع قطرة من الدم من الوريد ذيل الماوس بالقرب من نهاية شريحة المجهر بلوري النهائي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع شريحة الثانية (رش) على زاوية 45 درجة ودعمه في قطرة من الدم. مرة واحدة في الدم ينتشر على طول الحافة، ودفع عشية رش الشريحةنلي عبر المجهر الشريحة لجعل مسحة الدم. السماح للتشويه للهواء الجاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إصلاح مسحات الدم في الميثانول بنسبة 100٪ لمدة 30 ثانية ثم وصمة عار في بالغيمزا الشرائح الطازجة لمدة 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف مع مسحة الدم المياه الجارية لمدة 1 دقيقة، السماح ليجف في الهواء وفحص الشريحة تحت المجهر (الغمر النفط 100X،). تعداد الكريات الحمراء pRBC داخل 1000 وحساب تطفلن الدم في المئة. يجب أن تصل إلى مستويات الفئران المانحة تطفلن الدم بين 2،5-5٪ قبل أن يتم نزف للإصابة حيوانات التجارب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الدم من الجهات المانحة عن طريق الماوس الرجعية المدارية النزيف باستخدام heparinized الدقيقة الهيماتوكريت أنبوب شعري. يتم تنفيذ جميع التجارب في الامتثال لوالتر وإليزا هول معهد متطلبات الحيوان جنة الأخلاقيات. قد اعتمادا على المتطلبات المحلية الحيوان جنة الأخلاق أن تستخدم الإجراءات الدموية الأخرى. حل الكمية المطلوبة من الدم في المتوسط ​​RPMI في تركيز النهائي من مل 6 pRBC/0.2 1X10. نعتبر أنوالهيماتوكريت الماوس العادي ~ 6x10 9 خلايا الدم الحمراء / 1 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصيب C57BL التجريبية / 6 الفئران (8-12 أسابيع من العمر) عن طريق حقن الغشاء البريتونى (IP) 1x10 6 pRBC/0.2 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطفلن الدم لرصد مستويات من الفئران المصابة اتبع الخطوات من 1،3-1،8. وينبغي أن تحدد كل 2-3 أيام تطفلن الدم بدءا من اليوم 2 أو 3 بي </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطوقية بداية الملاريا الحادة في C57BL / 6 الفئران قد تظهر كما مظهر التقوس والفراء وقليلة النشاط. قد يكون بعض الفئران استرداد في هذه المرحلة، ولكن التقدم إلى فقدان الذات المنعكس التقويمي يشير المرض لا رجعة فيه، ويجب أن يتم التخلص الحيوانات. </li></ol> 2. Intracardial الإرواء من الفئران واستخراج الدماغ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجميع نضح خطورة دليل النظام من خلال تأمين خزان 500 مل إلى صاحب عمود تعلق على الجزء العلوي من العمود موقفا 60 سم. الاتصال أنابيب بلاستيكية إلى نهاية الجزء السفلي من الخزان وتأمين أنابيب المشبك للتحكم في تدفق العازلة. نعلق أنابيب إلى إبرة G 23. فيلل يصل الخزان مع PBS (C ° الاحتفاظ بها في 22)، افتح المشبك والسماح لتشغيل المخزن المؤقت من خلال أنابيب لإزالة جميع فقاعات الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء P. berghei ANKA المصابين الماوس عن طريق الاستنشاق 2 CO. تأكيد وفاة بسبب غياب دواسة، المدارية والردود في الجهاز التنفسي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دبوس الماوس الموت الرحيم من قبل الكفوف هند وأمام ظهريا على لوحة تشريح الستايروفوم الواردة في علبة من البلاستيك. يمكن اعتمادا على تخدير موضعي الأخلاق الحيوانية متطلبات اللجنة أن تدار بدء مسبقة من pefusion intracardial. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح الجانب البطني مع الايثانول 70٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مقص وملقط كبير لفتح الجلد على طول خط الوسط لفضح تجويف الصدر. أضعاف، ودبوس الجلد على الجانبين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد القص مع ملقط الغرامة وخفض الحجاب الحاجز وعلى طول جانبي القص قطع الأضلاع. والحرص على عدم إتلاف أي الأوعية الدموية الكبيرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دبوس القفص الصدري بواسطة القص المقبل فضفاضة في الرأس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد البطينين الطرافةح ملقط غرامة والأذين الأيمن شق بعناية مع مقص غرامة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج إبرة 23G تعلق على نظام نضح جاذبية في البطين الأيسر والشريان الأورطي نحو تصاعدي في حين PBS قيد التشغيل. إدراج 0.5 سم فقط من طرف الإبرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يروي الماوس لمدة 5 دقائق أو حتى النفايات السائلة واضح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بفصل الماوس ووضع على البطن. مسح الرأس مع الايثانول 70٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مقص كبير، وجعل قطع فقط فوق منطقة النخاع الشوكي عنق الرحم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مقص غرامة لجعل متوسط ​​الذيلية-منقاري قطع ابتداء من قاعدة الجمجمة وقشر الجلد بعيدا لفضح الجمجمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد رئيس، ضع شفرات مقص صغير لفي كل جوف الحجاج وتقديم قطع بين المدارات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل خفض طولية على طول الدرز السهمي وقشر بعناية الجمجمة على كل نصف الكرة المخ الخارج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملعقة، ورفع بلطف الدماغ ووضعه في أنبوب الطرد المركزي 10 مل تحتوي على RPMI المتوسط. </li></ol>3. عزل الدماغ المعزول الكريات البيضاء (BSL) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العمل في مجلس الوزراء السلامة، والمكان المقطوع حديثا الدماغ على رأس مصفاة الفولاذ المقاوم للصدأ الخلية (40-60 حجم فتحات الشباك) في طبق بتري تحتوي على 3-5 مل من الأنسجة RPMI متوسطة الثقافة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع أنسجة المخ إلى أجزاء صغيرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دفع قطع صغيرة من أنسجة المخ من خلال مصفاة الخلية باستخدام المكبس وضوح الشمس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل جناسة الدماغ إلى أنبوب الطرد المركزي 10 مل وعند 250 x ج لمدة 10 دقيقة في 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل بيليه في 3 مل من المتوسط ​​RPMI، تحتوي على 0.05٪ كولاجيناز D و2U/ml I. الدناز </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدوير الخليط لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. إزالة الحطام الخلية عن طريق دفع الخليط من خلال مصفاة الخلية 70 ميكرومتر النايلون و / أو عن طريق احتضان على الجليد لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع جناسة الدماغ على وسادة مل 7 Percoll 30٪ وأجهزة الطرد المركزي في 400 x ج (بلا فرامل) لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعادة تعليق بيليه في 1 مل من الدم الحمراء الخلية تحلل العازلة واحتضان على الجليد لمدة 5 دقائق إلىليز pRBC تمسكا، والتي لا يمكن إزالتها من الدماغ عن طريق نضح intracardial. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أضف 9 مل من المتوسط ​​RPMI، وغسل الخلايا وأجهزة الطرد المركزي في 250 x ج لمدة 10 دقيقة في C. ° 4 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعادة تعليق BSL التي تحتوي على بيليه في 50-100 ميكرولتر من الخلايا المتوسطة RPMI ونقل إلى أنبوب إيبندورف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قسامة تخفيف من 5-10 ميكرولتر من العينة خلية باللون الأزرق التريبان 01:02 لتحديد خلايا قابلة للحياة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عد خلايا قابلة للحياة تحت المجهر باستخدام عدادة الكريات. ابتداء من اليوم بي 6، عندما P. berghei ANKA الفئران المصابة عرض علامات العصبية، يمكن استرداد 20،000-100،000 BSLs. </li></ol> 4. المناعي الظاهري من BSL من قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي في 250 XG الخلايا لمدة 10 دقيقة في 4 درجات مئوية، ونضح طاف بيليه و resuspend في 50 ميكرولتر من العازلة تلطيخ (PBS، 1٪ مصل العجل الجنين (FCS)، 2 مم EDTA). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة ميكرولتر 1 من تنقية anti-CD16/32 الأجسام المضادة (Fcblock). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان خلايا لمدة 10 دقيقة على الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الخلايا مع 1 مل من الاحتياطي تلطيخ. أجهزة الطرد المركزي في 250 XG الخلايا لمدة 10 دقيقة في C ° 4 و نضح طاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعادة تعليق الخلايا في 50 ميكرولتر من العازلة التي تحتوي على تلطيخ محددة مسبقا التخفيفات الأمثل من الأجسام المضادة المطلوبة الفلورسنت، أي المضادة للCD4، ومكافحة CD8، ومكافحة TCR ومكافحة NK1.1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لمدة 1 ساعة على الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الخلايا مع 1 مل من الاحتياطي تلطيخ. أجهزة الطرد المركزي في 250 XG الخلايا لمدة 10 دقيقة في C ° 4 و نضح طاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعادة تعليق الخلايا في 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الخلايا إلى أنبوب تدفق البلاستيك الخلوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام قياس التدفق الخلوي، والحصول على ما لا يقل عن 5،000-10،000 الأحداث. وينبغي أن تدرج الضوابط المناسبة الخلية غير ملوثين وعينات التعويض ملون تألقي كما هو مطلوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل النتائج باستخدام البرمجيات المناسبة التدفق الخلوي. </li></ol>

<ol><li>Brian de Souza, J., Riley, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+malaria%3A+the+contribution+of+studies+in+animal+models+to+our+understanding+of+immunopathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+and+Infection%22%5BJournal%5D)">Cerebral malaria: the contribution of studies in animal models to our understanding of immunopathogenesis.</a> Microbes and Infection. 4, 291-300 (2002).</li>
<li>Schofield, L., Grau, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+processes+in+malaria+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Immunological processes in malaria pathogenesis.</a> Nature. 5, 722-735 (2005).</li>
<li>Miller, L. H., Baruch, D. I., Marsh, K., Doumbo, O. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathogenic+basis+of+malaria%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The pathogenic basis of malaria.</a> Nature. 415, 673-679 (2002).</li>
<li>Howe, C. L., Lafrance-Corey, R. G., Sundsbak, R. S., Lafrance, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+monocytes+damage+the+hippocampus+during+acute+picornavirus+infection+of+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Inflammatory monocytes damage the hippocampus during acute picornavirus infection of the brain.</a> Journal of neuroinflammation. 9, 50(2012).</li>
<li>LaFrance-Corey, R. G., Howe, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Brain-infiltrating+Leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of Brain-infiltrating Leukocytes.</a> J. Vis. Exp. (52), e2747(2011).</li>
<li>Lim, S. M., Koraka, P., Osterhaus, A. D., Martina, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((West+Nile+virus%3A+immunity+and+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">West Nile virus: immunity and pathogenesis.</a> Viruses. 3, 811-828 (2011).</li>
<li>Belnoue, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+pathogenic+role+of+brain-sequestered+alphabeta+CD8%2B+T+cells+in+experimental+cerebral+malaria%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">On the pathogenic role of brain-sequestered alphabeta CD8+ T cells in experimental cerebral malaria.</a> Journal of Immunology. 169, 6369-6375 (2002).</li>
<li>Campanella, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokine+receptor+CXCR3+and+its+ligands+CXCL9+and+CXCL10+are+required+for+the+development+of+murine+cerebral+malaria%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Science+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Chemokine receptor CXCR3 and its ligands CXCL9 and CXCL10 are required for the development of murine cerebral malaria.</a> Proceedings of the National Academy of Science U S A. 105, 4814-4819 (2008).</li>
<li>Hansen, D. S., Bernard, N. J., Nie, C. Q., Schofield, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NK+cells+stimulate+recruitment+of+CXCR3%2B+T+cells+to+the+brain+during+Plasmodium+berghei-mediated+cerebral+malaria%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">NK cells stimulate recruitment of CXCR3+ T cells to the brain during Plasmodium berghei-mediated cerebral malaria.</a> Journal of Immunology. 178, 5779-5788 (2007).</li>
<li>Amante, F. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+natural+regulatory+T+cells+in+the+pathogenesis+of+experimental+cerebral+malaria%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+journal+of+pathology%22%5BJournal%5D)">A role for natural regulatory T cells in the pathogenesis of experimental cerebral malaria.</a> The American journal of pathology. 171, 548-559 (2007).</li>
<li>Nie, C. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IP-10-mediated+T+cell+homing+promotes+cerebral+inflammation+over+splenic+immunity+to+malaria+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+pathogens%22%5BJournal%5D)">IP-10-mediated T cell homing promotes cerebral inflammation over splenic immunity to malaria infection.</a> PLoS pathogens. 5, e1000369(2009).</li>
<li>Franke-Fayard, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+malaria+parasite+sequestration%3A+CD36+is+the+major+receptor%2C+but+cerebral+pathology+is+unlinked+to+sequestration%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Science+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Murine malaria parasite sequestration: CD36 is the major receptor, but cerebral pathology is unlinked to sequestration.</a> Proceedings of the National Academy of Science U S A. 102, 11468-11473 (2005).</li>
<li>Nitcheu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perforin-dependent+brain-infiltrating+cytotoxic+CD8%2B+T+lymphocytes+mediate+experimental+cerebral+malaria+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunololgy%22%5BJournal%5D)">Perforin-dependent brain-infiltrating cytotoxic CD8+ T lymphocytes mediate experimental cerebral malaria pathogenesis.</a> Journal of Immunololgy. 170, 2221-2228 (2003).</li>
<li>Lundie, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-stage+Plasmodium+infection+induces+CD8%2B+T+lymphocytes+to+parasite-expressed+antigens%2C+largely+regulated+by+CD8alpha%2B+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceeding+of+the+National+Academy+of+Science+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Blood-stage Plasmodium infection induces CD8+ T lymphocytes to parasite-expressed antigens, largely regulated by CD8alpha+ dendritic cells.</a> Proceeding of the National Academy of Science U S A. 105, 14509-14514 (2008).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

عزل وتحليل BSL هو وسيلة تسمح توصيف وتقدير من الخلايا الالتهابية الهجرة إلى الدماغ استجابة لإصابة الأنسجة أو العدوى في نماذج الماوس التجريبية. إدخال خطوة نضح intracardial لإزالة المقصورة الدم قبل استخراج الجهاز والعزلة اللاحقة خلية مفيد لمنع التلوث من الخلايا الالتهابية مع المنظمات غير التهابات الكريات البيض الجائلة. قد لا يكون هذا شرطا أساسيا في الأمراض مثل فيروس موجه للعصب التهاب الدماغ و النخاع الفئران في الخلايا الالتهابية التي تخترق الدماغ حمة 5، ولكن له أهمية خاصة ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> التعليقات (اختياري) </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> حلول ومخازن </td></tr><tr><td> بالغيمزا في الميثيلين الأزرق حل يوزين دازور </td><td> ميرك ميليبور </td><td> 1.09204.0500 </td><td> 1:10 التخفيف في الماء المقطر </td></tr><tr><td> RPMI متوسطة </td><td></td><td></td><td> الماوس تحظرب </td></tr><tr><td> الماوس تحظرب PBS </td><td></td><td></td><td> 20 ملي فوسفات الصوديوم، كلوريد الصوديوم 0،149، ودرجة الحموضة 7.3 </td></tr><tr><td> التريبان الأزرق 0.4٪ </td><td> سيغما الدريتش </td><td> T-8154 </td><td> 01:02 التخفيف </td></tr><tr><td> كولاجيناز D </td><td> الكيمياء الحيوية ورثينجتون </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Deoxyribonuclease (الدناز) I </td><td> سيغما الدريتش </td><td> D4263-5VL </td><td> من البنكرياس البقري </td></tr><tr><td> Percoll </td><td> GE للرعاية الصحية </td><td> 17-0891-01 </td><td> حل 30٪ في برنامج تلفزيوني </td></tr><tr><td> عالى النقاء تريس </td><td> إينفيتروجن </td><td> 15505-020 </td><td></td></tr><tr><td> كلوريد الأمونيوم (NH 4 CL) </td><td> AnalaR </td><td> 10017 </td><td></td></tr><tr><td> الاحتياطي انحلال الخلايا الحمراء </td><td></td><td></td><td> 17 ملم تريس، 14nM NH 4 الكلورين، ودرجة الحموضة 7.2 </td></tr><tr><td> FCS </td><td> Gibco </td><td> 1009 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA ثنائي الصوديوم الملح </td><td> ميرك </td><td> 10093.5V </td><td> 0.1M، ودرجة الحموضة 7.2 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> الأجسام المضادة وتقارن </td></tr><tr><td> مكافحة الماوس CD16/CD32 (FC بلوك)، استنساخ 2.4G2 </td><td> BD Pharmingen </td> &lt;TD&gt; 553142 </td><td> 1 ميكرولتر العازلة في 50 ميكرولتر تلطيخ (0.5mg/50 مل) </td></tr><tr><td> FITC مكافحة الماوس CD4، استنساخ H129.19 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 553651 </td><td></td></tr><tr><td> PE-الماوس المضادة للNK1.1، استنساخ PK136 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 553165 </td><td></td></tr><tr><td> PerCPCy5.5 مكافحة الماوس CD8، استنساخ 53-6-7 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 551162 </td><td></td></tr><tr><td> APC-الماوس المضادة للTCR-β، استنساخ H57-597 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 553174 </td><td></td></tr><tr><td> PE-الماوس المضادة للCXCR3، استنساخ 220803 </td><td> R &amp; D أنظمة </td><td> FAB1685P </td><td></td></tr><tr><td> المعقدة البيروكسيديز مكافحة الماوس CCR5، استنساخ C34-3448 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 559922 </td><td></td></tr><tr><td> Steptavidin-PerCP-Cy5.5 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 551419 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> المعدات والمواد </td></tr><tr><td> SuperFrost المجهر الشريحة </td><td> ومب منزل-جلاسر </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ملقط تشريح، مقص </td><td> REDA INSTRUMENTE </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 500 مل PBS الخزان </td><td> Nalgene </td><td></td><td></td></tr><tr><td> المطاط أنابيب </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 23G إبرة </td><td> BD PrecisionGlide </td><td> 302008 </td><td></td></tr><tr><td> الخلية التي تحتوي على المعادن التفكك عدة غربال </td><td> سيغما الدريتش </td><td> CD-1 </td><td></td></tr><tr><td> 70 ميكرومتر مصفاة الخلية النايلون </td><td> BD الصقر </td><td> 352350 </td><td></td></tr><tr><td> عدادة الكريات </td><td> شركة محدودة نويباور </td><td> 717810 </td><td></td></tr><tr><td> أنابيب تدفق الخلوي </td><td> BD الصقر </td><td> 352008 </td><td></td></tr></tbody></table>

العزلة وتحليل الدماغ المعزول من الكريات البيضاء<em&gt; المتصورة berghei</em&gt; anka الفئران المصابة

Isolation and Analysis of Brain-sequestered Leukocytes from Plasmodium berghei ANKA-infected Mice

وصفنا طريقة لعزل وتوصيف الخلايا الالتهابية تمسكا من الأوعية الدموية في الدماغ من P. berghei ANKA المصابين الفئران. إصابة السلالات الحساسة الفأر مع هذه النتائج سلالة الطفيلي في استحثاث الملاريا الدماغية التجريبية، وهي متلازمة عصبية أن يجمل جوانب هامة معينة من الملاريا المنجلية المتصورة بوساطة شديد في 1،2 البشر. أشكال ناضجة من الدم في مرحلة التعبير عن الملاريا الطفيلية البروتينات على سطح كرات الدم الحمراء للمصاب، مما يسمح لهم لربط الخلايا البطانية في الأوعية الدموية. هذه العملية يدفع عوائق في تدفق الدم، مما يؤدي إلى نقص الأكسجة والنزيف 3 و يحفز أيضا تجنيد الكريات البيض الالتهابية إلى موقع تنحية الطفيليات. على عكس غيره من الأمراض والفيروسات neutrotopic أي 4-6، على حد سواء الملاريا الطفيلي خلايا الدم الحمراء (pRBC) وكذلك يرتبط بها من inflammالكريات البيض atory تبقى المحتبسة داخل الأوعية الدموية بدلا من التسلل لحمة الدماغ. وبالتالي لتجنب التلوث من الكريات البيض مع المنظمات غير المعزول للالتهابات الخلايا المنتشرة، نضح intracardial واسعة من الفئران المصابة قبل استخراج الجهاز ومعالجة الأنسجة هو مطلوب في هذا الإجراء لإزالة الدم المقصورة. بعد نضح، ويتم حصاد العقول وتشريح في قطع صغيرة. وتعطلت كذلك بناء الأنسجة عن طريق العلاج الأنزيمية مع collagenase وI. D الدناز يتم طرد جناسة الدماغ ثم الناتجة عن الانحدار الذي يسمح Percoll الفصل بين الدماغ المعزول الكريات البيض (BSL) من المايلين وغيرها من الحطام الأنسجة. عد الخلايا ثم تغسل المعزولة، وذلك باستخدام عدادة الكريات والملون مع الأجسام المضادة للتحليل الفلورسنت اللاحقة التي التدفق الخلوي. هذا الإجراء يسمح توصيف المظهري شاملة من الكريات البيض الالتهابية الهجرة إلى الدماغ في إعادةاالستجابة للمؤثرات المختلفة، بما في ذلك السكتة الدماغية وكذلك العدوى الفيروسية أو الطفيلية. الأسلوب يوفر أيضا أداة مفيدة لتقييم العلاجات المضادة للالتهابات رواية في النماذج الحيوانية ما قبل السريرية.

النتائج في الشكل. عرض النسب المئوية (2) والأعداد المطلقة للسكان BSL مختلفة تعافى من أدمغة الفئران perfused أو unperfused مكافحة الملاريا المصابين والسذاجة. كانت ملطخة معزولة BSL مع PE-المضادة للNK1.1 والأجسام المضادة APC-المضادة للTCR-β كما هو مشار إليه في نص البروتوكول. تتألف خلايا T + αβTCR تتفق مع النتائج السابقة 7-9، نسبة عالية من تجمع BSL في أدمغة الفئران المصابة بالملاريا perfused (يوم 6 بي). ظهرت هذه الفئة من السكان لتكون ممثلة تمثيلا ناقصا بشكل كبير ف...

وهناك طريقة لعزل الكريات البيض التهابات الأوعية الدموية الملتصقة من الدماغ من<em&gt; المتصورة berghei</emيوصف&gt; ANKA الفئران المصابة. الأسلوب الكمي يسمح كذلك توصيف المظهري من الكريات البيض المعزولة بعد تلطيخ مع الأجسام المضادة وتحليل الفلورسنت اللاحقة التي التدفق الخلوي.

العزلة وتحليل الدماغ المعزول من الكريات البيضاء<em&gt; المتصورة berghei</em&gt; ANKA الفئران المصابة

We describe a method for isolation and  characterization of adherent inflammatory cells from brain blood vessels of P. berghei ANKA-infected mice. ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو عزل الكريات البيض الالتهابية الملتصقة من الأوعية الدموية في الدماغ للفئران المصابة بالمتصورة للإصابة بالمتصورة للإصابة بالملاريا الدماغية التجريبية. تصاب الفئران بالمتصورة بيرج العين anca خلايا الدم الحمراء المتطفلة عن طريق الحقن. بعد أن تبدأ الفئران في إظهار علامات المرض ، تتم إزالة الخلايا المنتشرة للفئران المصابة بالملاريا عن طريق التروية داخل الفم.ثم يتم حصاد الأدمغة وهضم الأنسجة بالإنزيمات للسماح بعزل الكريات البيض الالتهابية. ثم يتم إجراء قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان للنمط الظاهري المناعي. يكشف تحليل الكريات البيض المعزولة في الدماغ للبيانات الناتجة عن النسبة المئوية والأعداد المطلقة للكريات البيض المهاجرة إلى دماغ الفئران المصابة بالملاريا.يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال التسبب في الملاريا ، مثل نوع الخلايا الالتهابية التي تهاجر إلى موقع عزل الطفيليات في دماغ المصابة في ظل ظروف تجريبية مختلفة. العرض المرئي لهذه الطريقة أمر بالغ الأهمية. يصعب تعلم خطوات التروية لأنها تتطلب السرعة والعناية بعدم إتلاف أي أوعية دموية مهمة ، وسيتم توضيح بعض أجزاء هذا الإجراء ليانا ميسيك ، وهي فنية ، والسيدة فيكتوريا ، وريك ، طالبة دكتوراه ، والدكتورة ليزا آيز ، باحثة ما بعد الدكتوراه من مختبري.ابدأ هذا البروتوكول عن طريق إصابة الفئران ب p berge eye anca defrost aliopreserved of P berge eye anca تتطفل خلايا الدم الحمراء أو pbcs عن طريق السماح لها بالوصول إلى درجة حرارة الغرفة. قم بإزالة فأر متبرع عمره من ثمانية إلى 12 أسبوعا من قفصه وضعه على محطة عمل. أمسك قفظاظ الرقبة بين السبابة والإبهام.اقلب الماوس وحقن 100 إلى 200 ميكرولتر من عين المتصورة في التجويف البريتوني. بشكل روتيني يتم حقن اثنين من الفئران المانحة ب pbcs. بعد الحقن ، ضع الفئران في قفصها بعد أربعة إلى خمسة أيام من الإصابة.قم بإزالة الفأر المتبرع من قفصه وضعه على محطة عمل. ضع قطرة دم من وريد ذيل الفأر بالقرب من نهاية شريحة المجهر النهائي. ضع شريحة ثانية بزاوية 45 درجة وأعدها إلى قطرة الدم.بمجرد أن ينتشر الدم على طول الحافة ، ادفع الموزعة بالتساوي عبر شريحة المجهر لجعل مسحة الدم. اترك اللطاخة تجف في الهواء لإصلاح مسحات الدم. اغمر الشرائح في 100٪ ميثانول لمدة 30 ثانية.ثم قم بتلطيخ الشرائح في GIM ZA المحضر حديثا لمدة 10 دقائق بعد تلطيخه ب gim za ، اشطف الشريحة بالماء الجاري لمدة 30 ثانية. اترك الشريحة تجف في الهواء ، ثم افحصها تحت المجهر باستخدام عدسة غمر الزيت 100 ×. تعداد كرات الدم الكريهة الكريات الحمراء ضمن ألف كريات الدم الحمراء وحساب النسبة المئوية إذا وصل الفأر المتبرع إلى المستويات المطلوبة من 2.5 إلى 5٪ بارسيت جمع الدم من الفأر المتبرع عن طريق ثقب القلب تحت التخدير أو النزيف خلف الحجاج باستخدام أنبوب شعري هيماتوكريت دقيق هبارين.قم بإذابة الدم في وسط RPMI بتركيز نهائي واحد في 10 إلى ستة PRBC لكل 0.2 ملليلتر لكل فأر. ضع في اعتبارك أن الهيماتوكريت الطبيعي للفأر هو حوالي ستة أضعاف 10 إلى تسعة خلايا الدم الحمراء لكل مليلتر. في الواقع ، من ثمانية إلى 12 أسبوعا ، تم اختبار C 57 ستة فئران سوداء عن طريق حقن مرة واحدة في 10 إلى سادس PRBC في 0.2 مل داخل الصفاق كما كان من قبل.لمراقبة المستويات شبه المستويات للفئران المصابة ، قم بإعداد مسحة دم كما كان من قبل. يجب تحديد الفقرة كل يومين إلى ثلاثة أيام بدءا من اليوم الثاني أو الثالث بعد الإصابة من اليوم الخامس. بعد العدوى فصاعدا.تتم مراقبة الفئران يوميا بحثا عن علامات الملاريا الشديدة بمجرد أن تزيد مستويات para عن 5٪ وتظهر على الفئران أعراضا عصبية في حوالي اليوم السادس بعد الإصابة. يتم قتل الفئران المصابة بالقتل الرحيم عن طريق استنشاق ثاني أكسيد الكربون ويتم إغراقها على الفور ب PBS كما هو موضح في المستند المصاحب. أصعب جانب في هذا الإجراء هو التروية داخل القلب.يتم توضيح سلسلة من نصائح استكشاف الأخطاء وإصلاحها هنا مع تثبيت الماوس على لوحة تشريح الستايروفوم. داخل درج التشريح. امسح الجانب البطني بنسبة 70٪ من الإيثانول ، ثم استخدم مقصا كبيرا وملقطا لفتح الجلد على طول خط الوسط لكشف التجويف الصدري ، وطي الجلد ودبوسه على الجانبين.امسك القص بالملقط الناعم وقطع الحجاب الحاجز وعلى جانبي القص ، وقطع الأضلاع. احرص على عدم إتلاف أي أوعية دموية كبيرة. قم بتثبيت القفص الصدري من القص بشكل فضفاض بجوار الرأس.امسك البطينين بالملقط الدقيق وقم بشق الأذين الأيمن بعناية بمقص ناعم. أدخل إبرة قياس 23 متصلة بنظام نضح الجاذبية في البطين الأيسر باتجاه الشريان الأورطي الصاعد. أثناء تشغيل PBS ، أدخل 0.5 سم فقط من طرف الإبرة لاختراق الماوس لمدة خمس دقائق أو حتى تصبح النفايات السائلة صافية.بعد التروية الداخلية، قم بتشريح الدماغ ووضعه في أنبوب طرد مركزي سعة 10 ملليلتر يحتوي على RPMI. متوسط. ضع الدماغ الذي تم حصاده حديثا فوق مصفاة خلايا من الفولاذ المقاوم للصدأ بحجم 40 إلى 60 في طبق بتري يحتوي على ثلاثة إلى خمسة ملليلتر من وسط زراعة أنسجة RPMI. قطع أنسجة المخ إلى قطع صغيرة.ثم باستخدام مكبس بلوري ، ادفع قطعا صغيرة من أنسجة المخ عبر مصفاة الخلية. انقل الدماغ المتجانس إلى أنبوب سعة 10 مليلتر وقم بطرده عند 250 مرة جم لمدة 10 دقائق عند أربع درجات مئوية. بعد الدوران ، تخلص من المادة الطافية وقم بإذابة الحبيبات في ثلاثة ملليلتر من RPMI.وسط يحتوي على الكولاجيناز D وبجعة الحمض النووي. قم بتدوير الخليط لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. قم بإزالة أي بقايا خلية عن طريق دفع الخليط عبر مصفاة خلايا نايلون 70 ميكرون.ثم احتضن على الجليد لمدة خمس دقائق بعد الحضانة في أنبوب سعة 10 ملليلتر. قم بتراكب الدماغ بعناية على جهاز طرد مركزي بنسبة سبعة ملليلتر 30٪ لكل وسادة مكالمة عند 400 مرة G لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة مع الانقطاع. بعد التخلص من المادة الطافية ، قم بتعليق الحبيبات في مليلتر واحد من تحلل خلايا الدم الحمراء ، واحتضانها على الجليد لمدة خمس دقائق.لتحلل ثنائي الفينيل متعدد الكلور الملتصقة ، والتي لا تتم إزالتها من الدماغ عن طريق التروية داخل الفم. أضف تسعة ملليلتر من خلايا الغسيل المتوسطة RPMI وأجهزة الطرد المركزي عند 250 مرة جم لمدة 10 دقائق عند أربع درجات مئوية. يقوم Resus بتعليق الكريات البيض المعزولة في الدماغ أو الحبيبات BSL التي تحتوي على الحبيبات في 50 إلى 100 ميكرولتر من وسط RPMI ونقل الخلايا إلى أنبوب طرد مركزي دقيق تحسب الخلايا القابلة للحياة تحت المجهر باستخدام مقياس الخلوي الدموي واستبعاد ثلاثي الأزرق.بعد ستة أيام من الإصابة ، يمكن استرداد 20،000 إلى 100،000 BSLs بمجرد الحصول على عدد الخلايا القابلة للحياة. يتم تحضير الخلايا للتحليل عن طريق قياس التدفق الخلوي. وترد تفاصيل هذا الإجراء في الوثيقة المصاحبة، ولكن يتم تلخيصها هنا أولا.يتم طرد جميع الخلايا المعزولة من كل دماغ في أنبوب فوج دقيق سعة 1.5 مليلتر ويتم تعليقها في مخزن مؤقت للتلطيخ باستخدام الأجسام المضادة المضادة للقرص المضغوط 16 و CD 32. بعد حضانة لمدة 10 دقائق على الجليد ، يتم غسل الخلايا بالطرد المركزي للتلطيخ مرة أخرى وإعادة تعليقها في مخزن مؤقت يحتوي على الأجسام المضادة المضادة للقرص المضغوط الرابع ، ومضادة للقرص المضغوط ثمانية ، ومضادة ل TCR ، ومضادة للأجسام الفلورية NK 1.1. يتم تحضين الخلايا على الجليد لمدة ساعة واحدة وغسلها بالتلوين والمخزن المؤقت وأجهزة الطرد المركزي.بعد الدوران ، يتم إعادة تعليق الخلايا في PBS ويتم الحصول على ما لا يقل عن 5،000 إلى 10،000 حدث على مقياس التدفق الخلوي. يتم تحليل البيانات الناتجة باستخدام برنامج قياس التدفق الخلوي المناسب. تم استرداد مجموعات BSL من أدمغة الفئران المصابة بالملاريا والساذجة الملوثة بالملاريا والملطخة ب PE و NK 1.1 و PC الأجسام المضادة بيتا المضادة TCR.تصور هذه المخططات النقطية النسب المئوية للخلايا القاتلة الطبيعية والخلايا الليمفاوية التائية والخلايا الإيجابية TCR الإيجابية NK 1.1 والخلايا السالبة المزدوجة. NK 1.1 سلبي TCR سلبي في الفئران المضطربة أو غير المدمجة والمصابة بالملاريا والساذجة بما يتفق مع النتائج السابقة. شكلت الخلايا التائية الإيجابية ألفا بيتا TCR نسبة عالية من مجموعة BSL في أدمغة الفئران المصابة بالملاريا في اليوم السادس بعد الإصابة.يبدو أن هذه المجموعة الممثلة تمثيلا ناقصا بشكل كبير في أدمغة غير المنفوخة. ارتبط الانخفاض الواضح في ترددات الخلايا التائية في الأدمغة غير المنفوخة بنسبة أعلى بكثير وإجمالي عدد الخلايا السالبة المزدوجة في هذه. لم يتم اكتشاف نسبة عالية وأعداد الخلايا السالبة المزدوجة في أدمغة غير ممتلئة فقط في الفئران المصابة بالملاريا ، ولكن أيضا في الضوابط الساذجة التي تشير إلى أن هذه الخلايا عبارة عن كريات البيض غير الالتهابية الموجودة في الأوعية الدموية في الدماغ والتي يتم استردادها مع الخلايا الالتهابية إذا لم يتم إجراء التروية داخل القلب.أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر إجراء وفرة القلب داخل الفئران المصابة قبل استخراج الأعضاء لتجنب تلوث الكريات البيض المعزولة بالخلايا المنتشرة غير الالتهابية. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية عزل وتحليل الكريات البيض المعزولة في الدماغ من الفئران المصابة بالمتصورة من خلال الهندسة المتدفقة.

isolation-analysis-brain-sequestered-leukocytes-from-plasmodium

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

علم المناعة والعدوى

Intravital المجهري لمتابعة الأحداث الزمانية والمكانية الدورة الدموية والتهابات في دوران الأوعية الدقيقة حنوني.

Intravital المجهري للماوس دوران الأوعية الدقيقة الدماغ باستخدام نافذة مغلقة القحف

ووصف طريقة سريعة للحصول على الكريات البيض التسلل من الدماغ الفئران. هذه الطريقة تستخدم الانحدار المستمر والمتقطع Percoll التدرج Ficoll لتحديد وتنقية طبقة الكريات البيض المخصب. ثم قد تكون معزولة الكريات البيضاء التي تتميز قياسات تدفق cytometric.

عزل الكريات البيضاء في الدماغ التسلل

يوضح هذا الفيديو إنشاء نموذج فأر تجريبي للملاريا الدماغية. يتم حقن البعوض المبلى بالمتصورة في أوردة ذيل الفأر المقيدة ، مما يؤدي إلى اضطراب الحاجز الدموي الدماغي والتهاب الدماغ ، مما يسبب الملاريا الدماغية. يوفر نموذج الفأر المصاب هذا أداة قيمة لدراسة أمراض الأوعية الدموية الدقيقة المرتبطة بالملاريا الدماغية في الجسم الحي.

توليد نموذج فأر للملاريا الدماغية التجريبية باستخدام البوغات المشتقة من البعوض المضيف

يوضح هذا الفيديو فحصا لتحصين نموذج الفأر باستخدام الأبواغ الحية المخففة. يتم حقن البوغات المتصورة الموهنة بالإشعاع في الجانب الظهري من أذن الفأر. بعد الحقن في مواقع متعددة على كلتا الأذنين ، يسمح للفأر بالتعافي.

التحصين داخل الأدمة باستخدام الأبواغ الحية المخففة في نموذج الفأر

نصف هنا بروتوكولا لعزل الخلايا النخاعية من جلد الفأر وتصريف العقدة الليمفاوية بعد الحقن داخل الأدمة من Plasmodium sporozoites. يوفر قياس التدفق الخلوي للخلايا المجمعة فحصا موثوقا به لتوصيف الجلد وتصريف الاستجابة الالتهابية للعقدة الليمفاوية للطفيلي.

النخاعي عزل الخلايا من الجلد ماوس وتصريف العقدة الليمفاوية بعد الأدمة التحصين مع لايف الموهن<em&gt; المتصورة</em&gt; Sporozoites

نصف نموذج فأر للملاريا الدماغية التجريبية ونوضح كيف يمكن تتبع أمراض الأوعية الدموية الالتهابية والأوعية الدموية الدقيقة في الجسم الحي باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي.

في فيفو تتبع من تطوير وذمة والأمراض الوعائية الوعائية في نموذج من الملاريا الدماغية التجريبية باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي

ونظرا لأوجه التشابه اللافتة للنظر في دورة الحياة وبيولوجيا طفيليات الملاريا القوارض وطفيليات الملاريا البشرية، أصبحت نماذج الملاريا القوارض لا غنى عنها لبحوث الملاريا. وفي هذا الشأن، قمنا بتوحيد بعض أهم التقنيات المستخدمة في التحليل الفينوتي للأنواع البرية والمعدلة وراثيا من الملاريا القوارض.

التحليل الفينوتي لطفيليات الملاريا القوارض غير الجنسية ومراحل الدم الجنسي ومراحل البعوض

الهدف العام من هذا البروتوكول هو توجيه كيفية استخراج وصيانة وفصل الخلايا المادرينية وخلايا الميكروجليا من الجهاز العصبي المركزي ، تليها العدوى بالطفيليات الأولية.

العزلة المصاحبة للخلايا الفلكية الأولية وMicroglia لعدوى طفيلي بروتوزوا

تنتقل الملاريا عن طريق تلقيح مرحلة sporozoite من البلازموديوم بواسطة البعوض المصاب. لقد سمحت لنا البلازموديوم المعدلة وراثيا بفهم بيولوجيا الملاريا بشكل أفضل وساهمت بشكل مباشر في جهود تطوير لقاح الملاريا. هنا ، نصف منهجية مبسطة لتوليد المتصورة المعدلة وراثيا Sporozoites المعدلة وراثيا.

توليد المتصورة المعدلة وراثيا بيرغي سبوروزويتات

حتى الآن ، تعد بروتوكولات العزل المتزامن لجميع أنواع الخلايا الرئيسية المقيمة في الجهاز العصبي المركزي من نفس الفأر طلبا غير ملباة. يظهر البروتوكول إجراء قابلا للتطبيق في الفئران الساذجة والتجريبية لالتهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي للتحقيق في الشبكات الخلوية المعقدة أثناء الالتهاب العصبي وتقليل أعداد الفئران المطلوبة في نفس الوقت.

العزل المتزامن لأنواع الخلايا المقيمة في الجهاز العصبي المركزي الرئيسي من الفئران المصابة بالتهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي للبالغين

يحدث التطور الجنسي المتصورة في الأمعاء الوسطى للبعوض. يعد استهداف المراحل الجنسية للطفيلي استراتيجية واعدة لمنع انتقال العدوى. قمنا بتطوير Ookluc ، وهو عبارة عن P. berghei المعدلة وراثيا التي تعبر عن nanoluciferase بعد تكوين البيضة الملقحة ، مما يتيح الفحص عالي الإنتاجية للمركبات التي تمنع الإرسال. توضح هذه المقالة بالتفصيل طرق الفحص باستخدام Ookluc.

Ookluc: خط برازموديوم بيرغي لتحديد المركبات التي تمنع انتقال العدوى

تعلم عزل الخلايا البيضاء الالتهابية من أوعية دماغ الفئران المصابة بـPlasmodium berghei ANKA باستخدام التدفق الخلوي متعدد الألوان. تتيح هذه الطريقة تحديد النمط الظاهري للخلايا المهاجرة للدماغ.

العزلة وتحليل الدماغ المعزول من الكريات البيضاء

استكشف المزيد من الفيديوهات