نموذج من تسريب المغذيات المزمنة في الفئران

يوصف بروتوكول للدفعات المزمن من الجلوكوز وIntralipid في الفئران. هذا النموذج يمكن استخدامه لدراسة تأثير المغذيات الزائدة على وظيفة الجهاز والمعلمات الفسيولوجية.

الهدف العام من هذا الإجراء هو قسطرة الأوردة الوداجية والشرايين السباتية للفئران لحقن الجلوكوز والدهون كنموذج لفائض المغذيات المزمنة. يتم تحقيق ذلك عن طريق القسطرة الأولى ، الوريد الوداجي والشريان السباتي تحت التخدير العام. بعد العملية ، يسمح للفأر بالتعافي لمدة ستة أيام.

ثم يتم توصيل القسطرة بمضخات التسريب من خلال حبل ودوران مثبت على الجزء العلوي من القفص. أخيرا ، يتم غرس الجرذ بمحاليل الجلوكوز والدهون. في النهاية ، يمكن الحصول على نتائج تظهر آثار زيادة المغذيات المزمنة على توازن الجلوكوز.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية على النماذج الأخرى ، مثل النماذج الجينية ، على سبيل المثال ، هي أنه يمكن للمرء فحص التغييرات المبكرة في وظيفة خلايا بيتا استجابة لفائض المغذيات. الميزة الأخرى هي أنه يمكن للمرء على وجه التحديد تعديل مستويات الجلوكوز والدهون الداخلية أو الدهون في الدورة الدموية. الآن ، نستخدم هذه التقنية لفحص التغيرات في وظيفة خلايا بيتا ، ولكن بالطبع ، يمكن استخدامها للنظر في المعلمات الفسيولوجية الأخرى مثل مقاومة الأنسولين.

على سبيل المثال ، سيتم توضيح الإجراء جريس فيرجسون ، فني صحة في مختبري ، قبل البدء ، قم بتعقيم جميع الأدوات الجراحية بواسطة الأوتوكلاف قبل 16 إلى 24 ساعة على الأقل من الإجراء. ضع أنبوب القنية في ألدهيد الألدهيد 2.6٪ للتعقيم. باستخدام أربعة فئران لكل حالة تسريب ، قم بوزن كل فأر ثم احسب جرعات التسكين والأدوية المضادة للكولين.

بعد تخدير الفئران باثنين إلى 3٪ iso والفلور والأكسجين ، تحقق من مستوى التخدير بإصبع القدم. قرصة وضع الجرذ على بطنه. احلق المنطقة خلف الأذنين إلى قاعدة الكتفين ، ثم اقلب على ظهره ، واحلق المنطقة الموجودة أسفل الرقبة إلى الكفوف الأمامية.

بعد ذلك ، قم بتطهير موقع الجراحة ثلاث مرات بكحول الكلورهيكسيدين واليود ، ثم قم بإعطاء الكاربروفين والجليكوبيرولات. نقل الفئران إلى منطقة الجراحة ، ثم بتقنية التعقيم. باستخدام قنية PE 50 متصلة بحقنة سعة مليلتر واحد مملوءة بخمس وحدات من المحلول الملحي الهيباريني ، قم بتقشير الوريد الوداجي الأيمن والشريان السباتي الأيسر لتجنب التخثر خلال فترة الشفاء ، اغسل القنيات ب 50 وحدة من المحلول الملحي الهباريني من خلال إبرة قياس 23 ضعيفة ، ثم استخدم دبوس قياس 23 آخر لإغلاق كل قنية بعد الجراحة ، قم بقص حوالي 2.5 ملم من قاع القواطع ، وضع الجرذ في سترة التسريب لمنع أكل القنيات.

للمساعدة في تفريغ فلور ISO ، قم بإدارة الأكسجين بمعدل لتر واحد في الدقيقة. ضع الجرذ في قفص ساخن حتى يستيقظ تماما. في اليومين الأول والثاني ، بعد الجراحة.

قم بوزن الفئران ، وقم بإعطاء الجليكوبيرولات ، تحت الجلد مرتين في اليوم الأول ومرة في اليوم الثاني ، وقدم علاجات إضافية عند الضرورة وفقا لبروتوكول النص في اليوم السابع بعد الجراحة. بعد وزن كل فأر لحساب معدلات التدفق للتسريب ، قم بتوصيل قنية الوريد الوداجي عن طريق امتداد أنبوب داخل الزنبرك إلى الدوران الأزرق. اغسل القنيات بخمس وحدات من المحلول الملحي الهيباريني وقم بتوصيلها بالحبل.

ثم قم بتوصيل الفئران بنظام التسريب باستخدام الحبل والدوران. الآن اغسل القنيات مرة أخرى بخمس وحدات من المحلول الملحي الهيباريني لمنع التخثر. اسمح للفئران بالتأقلم مع الحبل والدوران لمدة 24 ساعة على الأقل قبل البدء في التسريب لإجراء التسريب.

ابدأ بسحب 0.15 مل من الدم من الشريان السباتي لكل فأر وقم بقياس نسبة السكر في الدم. اغسل القنيات الوداجي واستخدم 50 وحدة من المحلول الملحي الهيباريني لمنع تخثر كلتا القنيات. نقل عينة الدم إلى أنبوب تجميع 0.5 ملليلتر يحتوي على 2٪ EDTA ، ثم جهاز طرد مركزي عند 10،000 RBM لمدة دقيقتين ، وتجميد البلازما عند 20 درجة مئوية تحت الصفر.

املأ حقنتين سعة 60 مليلتر لكل حالة من حالات التسريب المدرجة هنا. استخدم الموصلات y وأنابيب coex T 22 المعقمة لربط كل زوج من الحلول معا. ثم ضع المحاقن على هاربور 33 لمضخة الحقنة ، ووضع المحقنة واحدة في الموضع الأمامي للمضخة والحقنة الثانية في الوضع الخلفي.

بعد ذلك ، قم بتغيير قاع القفص وإزالة جميع الأطعمة من أعلى شواية القفص قبل استبدالها ب 150 جراما من الطعام القياسي. ثم قم بتوصيل المحاقن بالدوران الموجود على شواية القفص واغسل المحاقن بشكل صحيح. لإزالة الهواء المحبوس من الخطوط باستخدام وزن الجسم المحدد مؤخرا ، احسب معدلات تدفق التسريب باستخدام ملف Excel الذي يحول معدل ضخ الجلوكوز أو GIR إلى مليلتر في الساعة بناء على مستويات الجلوكوز المحددة مسبقا المطلوبة الحفاظ عليها طوال التجربة.

اضبط المضخة لإدارة معدلات التدفق ل 60 حقنة وفقا لإعدادات الشركة المصنعة ، وأدخل معدل المحقنة الأولى والحقنة الثانية. ثم ابدأ المضخة. بعد بدء تشغيل المضخة ، تحقق من عدم وجود تسرب من الدوران أو من القنيات وأن أنبوب التسريب غير ملتوي.

أيضا من عدم وجود فقاعات هواء في الأنبوب. بعد ثلاث ساعات من التسريب ، خذ عينة دم صغيرة واستخدم جهاز قياس الجلوكوز المحمول لقياس سحب نسبة السكر في الدم. الأحجام الصغيرة تمنع تغيير حجم الدم و / أو الهيماتوكريت.

خذ عينات دم إضافية باستخدام هذا الجدول الزمني. بناء على قيم نسبة السكر في الدم المقاسة ، قم بتعديل معدل المحقنة الأولى للحفاظ على نسبة الجلوكوز في الدم عند 220 إلى 250 ملليغرام لكل ديسيلتر. يظل معدل المحقنة الثانية ثابتا للحفاظ على الأحماض الدهنية الحرة عند واحد ملي مول لكل لتر.

بعد 24 ساعة من التسريب ، قم بتغيير قاع القفص وقم بوزن الطعام المتبقي في شواية القفص. أعد جزء UNE إلى القفص ، وقم بالشواء وإعادة تعبئة المحاقن حسب الحاجة طوال 72 ساعة. راقب الجرذ بحثا عن أي علامات للالتهاب أو الانزعاج وقم بتقديم الرعاية المناسبة حسب الحاجة.

في نهاية التسريب ، يمكن أن تخضع الفئران لدراسات المشبك المفرط في نسبة السكر في الدم أو ارتفاع نسبة السكر في الدم ، ثم القتل الرحيم أو القتل الرحيم لجمع البنكرياس للأنسجة أو عزل العيون. يوضح هذا الشكل مستويات الدم والجلوكوز والأحماض الدهنية خلال فترة التسريب البالغة 72 ساعة. كما هو موضح هنا في التصميم ، يتم الحفاظ على مستويات الجلوكوز حوالي 220 إلى 250 ملليغرام لكل ديسيلتر طوال فترة التسريب.

القوارض بقدرة قوية على تعويض ضخ الجلوكوز عن طريق زيادة إفراز الأنسولين الداخلي. لذلك ، يجب زيادة GIR أثناء التسريب للحفاظ على مستويات الجلوكوز في الدم في حالة مستقرة نسبيا. ومع ذلك ، تميل مستويات الجلوكوز في الدم إلى الانخفاض في نهاية التسريب.

بالإضافة إلى ذلك ، بناء على قياسات وزن الطعام ، نظرا لأن المملوءة بالجلوكوز والدهون تتلقى مغذيات من السعرات الحرارية ، فإنها تقلل تلقائيا من تناولها للطعام. على عكس فئران التحكم المملوءة بالمحلول الملحي بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء هذه التقنية في غضون 30 إلى 40 دقيقة لكل فأر إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. لذلك بعد هذا الإجراء ، نقوم عادة بإجراء مشابك فقر الدم المفرط في نسبة السكر في الدم أو U لقياس إفراز الأنسولين أو حساسية الأنسولين على التوالي.