مايو 14, 2013
نحن تصف بروتوكولات لدينا arteriosclerois الكسب غير المشروع الماوس (GA) نماذج التي تنطوي على مداخلة من شريحة سفينة الماوس إلى المتلقي من نفس السلالة الفطرية. بواسطة backcrossing بتغيرات جينية إضافية إلى الجهة المانحة السفينة، يمكن للنموذج تقييم تأثير جينات معينة على GA.
الهدف العام من التجربة التالية هو زرع وعاء متبرع في الشريان الأورطي البطني للمتلقي. الخطوة الأولى هي تشريح الشريان الأورطي الصدري من الفأر المتبرع. بعد ذلك ، يتم إنشاء مواقع مفاغرة في الشريان الأورطي البطني للفأر المتلقي.
ثم يتم زرع الوعاء الدموي المتبرع في الشريان الأورطي البطني المتلقي. في النهاية ، يمكن الوصول إلى عملية الزرع الناجحة من خلال الوظيفة الحركية السليمة للطرف الخلفي للفأر المتلقي. لذا سيساعدنا هذا النموذج في فهم التسبب في التصلب الشرياني الطعمي.
وهو تحد من الناحية الفنية ، والذي يتطلب الكثير من الممارسة العملية والمريض ليكون مثاليا. لذا فإن إظهار الإجراء سيكون الدكتور تشين ومساعده من قبل لوان. للبدء ، تأكد من العمق المناسب للتخدير في الفأر المتبرع.
بمجرد التخدير ، ضع الماوس في وضع ضعيف على صينية تحت مجهر التشغيل. نظف الصدر بفرك متكرر من اليود والكحول بعد تعريض القلب وغسله بالمحلول الملحي ، وقم بإزالة القلب والرئتين لكشف طول الشريان الأورطي الصدري بالكامل. بمجرد تصورها ، ابدأ في تشريح الشريان الأورطي الصدري بعناية بعيدا عن الأنسجة المحيطة.
عند الوصول إلى الفروع القطنية ، اربطها بالقرب من الشريان الأورطي بخياطة حريرية قبل قطعها. عند تحريره من الأنسجة المحيطة ، استئصال الشريان الأورطي الصدري بالكامل. بمجرد عزلها ، اغسل الشريان الأورطي المتبرع بمحلول ملحي هيبارين وقم بتخزينه في هذا المحلول على الثلج حتى الزرع.
بعد التأكد من التخدير الكافي في الفأر المتلقي ، احلق الفراء من منطقة البطن الأمامية. غطي العينين بمرهم للعيون ونظفي المنطقة كما رأينا من قبل. عندما تصبح جاهزا ، ضع الماوس في وضع ضعيف على صينية تحت مجهر التشغيل.
شق جدار البطن عند خط الوسط من الخنجري إلى العانة ، ثم استخدم ضام لنشر الجدار بعيدا وفضح تجويف البطن بمجرد تعريضه ، لف الأمعاء بشاش مبلل بالملح ، وادفعها لأعلى وبعيدا عن تجويف البطن. استخدم المزيد من الشاش المبلل بالمحلول الملحي للف مناطق البطن المتبقية واستخدمه لسحب المستقيم إلى الجانب الأيمن من البطن. بعد ذلك ، حرك الأعضاء التناسلية بشكل أدنى.
تذكر أن تحافظ على رطوبة الأنسجة المكشوفة عن طريق وضع محلول ملحي. التعرف بانتظام على الشريان الأورطي تحت الكلوي القريب من الوعاء الكلوي والبعيد عن التشعب الأبهري الحاد. قم بتشريحه بعناية لفصله عن الوريد المشخ السفلي.
حدد جميع الفروع الصغيرة التي تنشأ من هذا الجزء من الشريان الأورطي وربطها وقطعها. بمجرد عزل الجزء الأبهري ، ضع مشبك وعائي في كل طرف على بعد خمسة ملليمترات تقريبا. بعد ذلك ، قم بإنشاء مواقع مفاغرة عن طريق نقل الشريان الأورطي البطني بين المشابك.
باستخدام مقص دقيق حاد ، قم باستئصال جزء صغير من الشريان الأورطي من طرف واحد مقطوع لاستيعاب طعم الأبهر المتبرع. اغسل الأجزاء الأبهرية بين المشابك باستخدام محلول ملحي هيباريني لإزالة الدم المتبقي. تذكر أن تروي كلتا العينتين الأبهريتين بشكل دوري بمحلول ملحي هيباريني طوال العملية.
بعد ذلك ، قم بتحويل جانبي الشريان الأورطي المتبرع لإنشاء طعم مقطعي بطول 2.5 ملم للزرع. ضع طعم الأبهر المتبرع في موضعه الذي يصطف الأطراف القريبة والبعيدة للخيوط المستمرة. ضع خيوط البقاء في مواضع الساعة الثالثة والتاسعة لكلا الطرفين أولا.
بعد ذلك ، انضم إلى الحواف المقطوعة بثلاث إلى أربع خيوط تشغيل واربط الغرز الجارية بخيوط التثبيت بعقدة مزدوجة للخيوط المتقطعة. قم ببناء أربعة مواقع مفاغرة في مواضع الساعة الثالثة والتاسعة لكلا جانبي الكسب غير المشروع. أولا. بعد ذلك ، انضم إلى الحواف المقطوعة بثلاث إلى أربع غرز موضوعة بين كل موقع من هذه المواقع.
بمجرد وضع الغرز في مكانها ، حرر المشبك البعيد للسماح بالتدفق المرتجع إلى الكسب غير المشروع. حدد أي مواقع نزيف وقم بعمل غرز إضافية في غضون ثلاث دقائق. عندما يتم تحقيق إرقاء مرض ، حرر مضخم المشبك القريب.
يمكن تأكيد سالكية الطعوم من خلال وجود نبض قوي. إذا تضاءل النبض ، قم بحقن الهيبارين في الوعاء الدموي لمنع تجلط الدم. عندما تصبح جاهزا ، أعد الأمعاء إلى تجويف البطن وقم بخياطة طبقات العضلات والجلد مغلقة.
ضع الفأر المتلقي في قفص دافئ ونظيف وراقبه لمدة ساعة إلى ساعتين حتى يعود الوعي. قم بتقييم الوظيفة الحركية للفأر بعد الشفاء ومرة أخرى ، في اليوم الثاني ، تنجح جراحة الزرع إذا لم يلاحظ أي خلل في الأطراف الخلفية. كشف التحليل النسيجي لترقيع الشرايين الذي تم إجراؤه بعد أربعة أسابيع من الجراحة عن زيادة السماكة في جدار الوعاء الدموي لدى الإناث المتلقين لمتبرع ذكر.
ومع ذلك ، لم يلاحظ تصلب الشرايين في مجموعة الذكور إلى الذكور. في هذا المثال ، تم زرع الشريان الصدري من متبرع ذكر في تعبير إنترفيرون جاما بالضربة القاضية في الفأر الذي تم تحريضه بعد ذلك في الفأر المتلقي. قبل أخذ العينات.
بعد بضعة أسابيع ، أظهر التحليل النسيجي لترقيع الشرايين أنه لم يلاحظ تصلب الشرايين في المجموعة المعالجة. الآن أنت تعرف كيفية إجراء هذه الجراحة. استمر في المحاولة.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
تصف هذه المقالة بروتوكولات لنموذج تصلب شرايين الطعم في الفئران، مع التركيز على نقل وعاء دموي من متبرع إلى فأر مستقبل. يهدف هذا النموذج إلى تقييم تأثير تغيرات جينية محددة على تصلب الشرايين في الطعم.
لا يزال تصلب شرايين الطعم سبباً رئيسياً لفشل عملية الزرع على المدى الطويل، مدفوعاً بتكاثر خلايا العضلات الملساء في غلالة الطعم الباطنة. وغالباً ما تفشل النماذج قبل السريرية الحالية بسبب الفقدان السريع للطعم بوساطة مناعية، مما يحد من الدراسات الميكانيكية. وتتجاوز نماذج الفئران الموصوفة هنا هذه المشكلة من خلال تمكين بقاء خلايا المانح لفترة مستدامة وحدوث اعتلال مرضي يعتمد على IFN-γ، مما يدعم التحقق من الأهداف والحد من المخاطر الميكانيكية في أبحاث الطعوم الوعائية.
يتناسب هذا النموذج ضمن سلسلة الاكتشاف الممتدة من التحقق من الهدف إلى التقييم قبل السريري، مما يتيح إجراء دراسات ميكانيكية لفشل الطعم الوعائي قبل مرحلة تحسين المركب الرائد.