Name: نماذج الماوس لتصلب الشرايين الكسب غير المشروع (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 37 s
Description: تعلم بروتوكول زرع الأوعية الدموية في الفئران لدراسة تصلب الشرايين الكسب غير المشروع. يتيح هذا النموذج تقييم التأثيرات الوراثية على تطور المرض وفهم آليات فشل الزرع الوعائي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح R01 HL109420 إلى WM وAHA 9320033N إلى LY.

طعم خيفي مسانج الماوس والكسب غير المشروع نموذج زرع وقد وافق جميع الدراسات على الحيوانات من قبل المؤسسات ورعاية الحيوان لجان استخدام جامعة ييل. لنموذج طعم خيفي، وموسط شرائح الأبهر الصدري من الذكور، 4-5 الاسبوع WT القديمة (C57BL/6J) أو الفئران الإنترفيرون γR-KO في الشريان الأورطي البطني من المتلقي أنثى، الأسبوع WT القديمة 8-12 باستخدام نهاية إلى نهاية المجهرية تقنية توصيلي (انظر المقبل للحصول على التفاصيل). للحصول على نموذج الكسب غير المشروع مسانج، وموسط شرائح للأبهر الصدري من الذكور، 4-5 الاسبوع الفئران WT القديم إلى أبهر البطن من الذكور، 8-12 أسبوع من العمر الإنترفيرون γR1-KO باستخدام نهاية إلى نهاية المجهرية توصيلي تقنية. في 1 أسبوع بعد العمل الجراحي، تم تلقيح الحيوانات الرابع مع ​​Ad5.CMV الماوس الإنترفيرون γ أو Ad5.CMV-LacZ (Qbiogene) في 1 × 10 9 PFU. مصل الماوس الإنترفيرون γ تم قياس مستويات بواسطة ELISA (eBioscience) في 1 و بعد 5 أسابيع الإدارة اتش. بعض الحيوانات تلقى BrdU(سيغما الدريخ) في 100 ملغ / كغ الشوري لمدة 2 اسابيع قبل التضحية. نهاية إلى نهاية المجهرية تقنية توصيلي (سيتم اتخاذ فيديو لهذا الجزء): 1. إجراء المانحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران مع الحقن داخل الصفاق المانحة من الكيتامين (50 ملغ / كلغ) وزيلازين (10 ملغ / كلغ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التأكد من التخدير كافية، ضع الفئران المانحة تحت المجهر التشغيل في X8-30 التكبير على صينية في موقف ضعيف، واستخدام اليود الوسادة الإعدادية والإعدادية الوسادة الكحول لإعداد جدار الصدر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شق جدار الصدر الأمامي من خلال الضلوع والحجاب الحاجز لفضح القلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الأذين الأيمن، وضخ 10 مل من heparinized (100 U / مل) محلول ملحي في البطين الأيسر لطرد الفئران باستخدام حقنة 10 مل مع إبرة عيار 25. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يقطع القلب والرئتين لفضح طول الشريان الأورطي الصدري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح الشريان الأورطي الصدري بعناية لتقليل الصدمة مباشرة، حين إلىه تحديد وligate وتقسيم فروع الخشب باستخدام 11-0 خاط بالقرب من الشريان الأورطي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة في الشريان الأورطي الصدري خال من الأنسجة المحيطة بها، واستئصال الأبهر الصدري كامل للزرع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح نهاية قطع من الشريان الأورطي المانحة مع heparinized (100 U / مل) محلول ملحي، وتخزينها في نفس الحل على الجليد (حتى 6 ساعة) حتى الزرع. </li></ol> 2. إجراء المتلقي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن الفئران المتلقي مع كيتوبروفين الملكية الفكرية (5 ملغ / كلغ) لتسكين الألم، وthenanesthetize الفئران مع الكيتامين IP (50 ملغ / كلغ) وزيلازين (10 ملغ / كلغ). الفئران المتلقية هي تخدير عميق في غضون 10 دقيقة لمدة 60-90 دقيقة. أثناء الجراحة، ويتم تقييم مستوى التخدير كل 15 دقيقة بواسطة معسر جدار البطن الأمامي أو القدم باستخدام ملقط. إذا يتفاعل الحيوان إلى المنبهات الضارة في أي وقت أثناء الجراحة، سيتم من قبل SC أو الدردشة تدار جرعة إضافية من الكيتامين وزيلازين (1/4 أو 1/3 جرعة الأصلي) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التأكد من التخدير كافية، يحلق الفراء في جدار البطن الأمامي باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية، وتنظيف الجلد باستخدام اليود الإعدادية الوسادة والكحول الاعداديه منصة، وتغطية العينين باستخدام مرهم للعين. أثناء الجراحة، سيتم استخدام تقنيات العقيم التالية للعمليات، بما في ذلك التنظيف طاولة العمليات مع التبييض 10٪، وارتداء قفازات معقمة وباستخدام أدوات معقمة المجهرية (الصكوك تعقيمها بالبخار لبدء العملية، ثم الزجاج الساخن حبة تعقيم الصكوك بين عمليات متعددة، الخ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الفئران المتلقية تحت المجهر التشغيل في التكبير من X8-30 على صينية في موقف ضعيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شق جدار البطن في خط الوسط من سيفي الشكل إلى العانة، وانتشرت جدار البطن بصرف النظر باستخدام الصغرى ضام لفضح تجويف البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحب الأمعاء متفوق والتفاف بشاش مبلل بمحلول ملحي. الفئران المتلقية تصبح توترت بسبب فقدان هيئة التعليم العالير من خلال الأمعاء تخريجها. فمن المهم للحفاظ على الدفء الحيوان. ومع ذلك، لا يتم استخدام لوحة التدفئة أثناء الجراحة كما انخفاض حرارة الجسم متواضعة ذات فائدة في منع إصابة في العمود الفقري خلال انسداد تدفق الدم الأبهري وكذلك هناك نقل الحرارة غير فعالة مع تدفق الدم الغائب على النصف السفلي من الجسم الفئران. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الأعضاء التناسلية دون المستوى، والتفاف مناطق البطن من الفئران المتلقية بشاش المالحة حل مبلل، واستخدامها لسحب المستقيم إلى الجانب الأيمن من البطن. والمروية الأنسجة تتعرض دوريا مع محلول ملحي خلال الزرع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح بصراحة جزء من الشريان الأورطي infrarenal بين السفينة الكلوي قريب والتشعب الأبهري بشكل أقصى وفصل من الوريد الأجوف السفلي (IVC) بعناية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد وligate كل من الفروع الصغيرة التي تنشأ من هذا الجزء من الشريان الأورطي البطني باستخدام مادة البولي أميد 11-0 خياطة حيدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عبر المشبك الجزء المعزول منالأبهر bdominal باستخدام اثنين من المشابك الأوعية الدموية المجاورة بشكل مباشر 5 مم وبصرف النظر، واحد في كل نهاية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> القطع الشريان الأورطي البطني بين المشابك باستخدام الصغرى مقص حاد لإنشاء مواقع توصيلي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يقطع شريحة صغيرة من الشريان الأورطي البطني (تصل إلى 0.4 ملم في الطول) من واحد قطع الشريان الأورطي نهاية المتلقي مقطوع لاستيعاب الكسب غير المشروع الأبهر المانحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح شرائح الأبهر بين المشابك باستخدام محلول ملحي heparinized لإزالة الدم المتبقي. يتم ري قطاعات الأبهر بين المشابك والكسب غير المشروع الأبهر المانحة دوريا مع heparinized (100 U / مل) محلول ملحي (ما يصل الى 40 مل / كجم) خلال مفاغرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> القطع جانبي الشريان الأورطي المانحة مع الدقيقة مقص حاد لإنشاء الكسب غير المشروع شريحة من 2.5 ملم في الطول للزرع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الكسب غير المشروع الأبهر المانحة في موقف مثلي، يفاغر الدانية والقاصية نهاية الكسب غير المشروع المانحة لالدانية والقاصية قطع نهاية المستلم من الشريان الأورطي البطني، على التوالي، مع وضع حد-Tنمط O-نهاية باستخدام مادة البولي أميد 11-0 خياطة حيدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لالغرز المستمر، ضع الغرز البقاء في 3 و 09:00 المواقف أولا. بين اثنين من الغرز البقاء في كل جانب من الكسب غير المشروع، يفاغر على حد سواء حواف قطع في غرز 3-4 باستخدام الخيوط الجراحية على التوالي، وربط الغرز تشغيل للبقاء الغرز مع عقدة مزدوجة. لأن كلا طبقات من إغلاق مستمرة، يتم زيادة خطر تفزر. يجب أن يكون الكسب غير المشروع الأبهر المانحة في طول المناسبة للاتصال الدانية والقاصية قطع نهاية المستلم من الشريان الأورطي البطني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لالغرز توقف، بناء أربعة مفاغرة في 3 و 09:00 المواقف في كلا الجانبين من الكسب غير المشروع أولا، ويفاغر على حد سواء حواف قطع في غرز 3-4 بين اثنين من الغرز البقاء في كل جانب من الكسب غير المشروع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الافراج عن المشبك البعيدة للسماح بتدفق الوراء في الكسب غير المشروع، وتحديد مواقع النزيف وجعل غرز إضافية في غضون 3 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التأكد الارقاء مرضية، والإفراج عن المشبك الداني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكيد المباح الكسب غير المشروع من قبل وجود نبض قوي في الكسب غير المشروع والجزء المجاور القريب من الشريان الأورطي البطني الأم، وخاصة في الجزء المجاور القاصي من الشريان الأورطي البطني والشريان المساريقي السفلي. النظر في تخثر في مواقع توصيلي إذا كان نبض يقلل في غضون بضع دقائق بعد استعادة تدفق الدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرجاع الأمعاء إلى تجويف البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خياطة إغلاق جدار البطن باستخدام 5-0 خياطة النايلون في طبقة العضلات وطبقة الجلد، على التوالي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الفئران المتلقي في قفص نظيفة على الجزء العلوي من وسادة التدفئة، والانتظار 1-2 الموارد البشرية لالفئران ليستعيد وعيه والتعافي من التخدير. فمن المهم للحفاظ على الدفء الكافي الحيوان خلال فترة الانتعاش. الحفاظ على الفئران في قفص دافئ وجاف قبل أعقاب الحيوان من التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقييم وظيفة الحركة من أطرافه الخلفية بعد الشفاء الفئران، ومرة ​​أخرى في اليوم الثاني. وسوف يتم تأكيد عملية جراحية زرع ناجحة طو يتم احترام أي خلل في الأطراف الخلفية في الفئران المتلقية في اليوم الثاني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة الفئران المتلقي مع كيتوبروفين في مياه الشرب (5 ملغ / كغ / د = 27 ميكروغرام / مل في مياه الشرب) لمدة 48 ساعة. إذا أي الفئران المتلقية تعاني من ألم غير مرتاح من المسكنات بعد العملية الجراحية كما يتضح من فقدان الحركة، وعدم العريس، غير طبيعية تتزاحم الموقف، وغيرها، وسوف يتم التخلص. وسوف يتم التخلص من الحيوانات في نهاية محددة سلفا نقاط بعد 1-60 أيام. </li></ol> تحليل الكسب غير المشروع وتم شراء ترقيع الشريان في طعم خيفي في 4 أسابيع والطعوم في نموذج الكسب غير المشروع مسانج كانت 6 أسابيع بعد العملية (بعد 5 أسابيع العدوى الفيروسية) وتحليلها بواسطة تقنيات النسيجية القياسية لالمرنة فان Gieson (EVG) تلطيخ، الهيماتوكسيلين ويوزين (HE) تلطيخ وتلطيخ المناعي. تم التقاط الصور باستخدام نظام المجهر المناعي (زايس). كان العد الخلية نواة محاطة المناعية إيجابية أداءإد تحت التكبير عالية ومتوسط ​​من 5 المقاطع العرضية لكل الكسب غير المشروع. القياسات منطقة الكسب غير المشروع من التجويف (داخل البطانة)، البطانية (بين الصفيحة المرنة البطانة والداخلية، IEL)، ووسائل الإعلام (بين IEL والصفيحة المرنة الخارجية، وثعبان البحر)، سمك الجدار (بين الصفيحة المرنة البطانة والخارجية) وحسبت السفينة كله (داخل ثعبان البحر) من 5 المسلسل المقاطع العرضية، 150 ميكرون وبصرف النظر عن كل الكسب غير المشروع، وذلك باستخدام تحليل الصور بمساعدة الحاسوب والمعاهد الوطنية للصحة الصورة 1.60 ( <a href="http://rsbweb.nih.gov/nih-image/" target="_blank">http://rsbweb.nih.gov/nih-image</a> ). التحليل الإحصائي يتم التعبير عن كافة البيانات كما يعني ± SEM. ثنائي الطرف، وأجريت الاختبارات ر الاقتران وتحليل ANOVA اتجاهين باستخدام برنامج حاسوبي بريزم (GraphPad البرمجيات). واعتبرت الاختلافات مع P &lt;0.05 للإشارة إلى الأهمية الإحصائية.

<ol><li>George, J. F., Pinderski, L. J., Litovsky, S., Kirklin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+mice+and+men%3A+mouse+models+and+the+molecular+mechanisms+of+post-transplant+coronary+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">Of mice and men: mouse models and the molecular mechanisms of post-transplant coronary artery disease.</a> J. Heart Lung Transplant. 24, 2003-2014 (2005).</li>
<li>Koulack, J., McAlister, V. C., MacAulay, M. A., Bitter-Suermann, H., MacDonald, A. S., Lee, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+minor+histocompatibility+antigens+in+the+development+of+allograft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Immunol.+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Importance of minor histocompatibility antigens in the development of allograft arteriosclerosis.</a> Clin. Immunol. Immunopathol. 80, 273-277 (1996).</li>
<li>Libby, P., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection.</a> Immunity. 14, 387-397 (2001).</li>
<li>Lorber, M. I., Wilson, J. H., Robert, M. E., Schechner, J. S., Kirkiles, N., Qian, H. Y., Askenase, P. W., Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+allogeneic+vascular+rejection+after+arterial+transplantation+and+peripheral+lymphoid+reconstitution+in+severe+combined+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Human allogeneic vascular rejection after arterial transplantation and peripheral lymphoid reconstitution in severe combined immunodeficient mice.</a> Transplantation. 67, 897-903 (1999).</li>
<li>Minami, E., Laflamme, M. A., Saffitz, J. E., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracardiac+progenitor+cells+repopulate+most+major+cell+types+in+the+transplanted+human+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Extracardiac progenitor cells repopulate most major cell types in the transplanted human heart.</a> Circulation. 112, 2951-2958 (2005).</li>
<li>Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allograft+arteriopathy%3A+pathogenesis+update%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Allograft arteriopathy: pathogenesis update.</a> Cardiovasc. Pathol. 13, 33-40 (2004).</li>
<li>Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graft+vascular+disease%3A+immune+response+meets+the+vessel+wall%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Pathol%22%5BJournal%5D)">Graft vascular disease: immune response meets the vessel wall.</a> Annu Rev Pathol. 4, 19-47 (2009).</li>
<li>Nagano, H., Libby, P., Taylor, M. K., Hasegawa, S., Stinn, J. L., Becker, G., Tilney, N. L., Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+arteriosclerosis+after+T-cell-mediated+injury+in+transplanted+mouse+hearts%3A+role+of+interferon-gamma%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Coronary arteriosclerosis after T-cell-mediated injury in transplanted mouse hearts: role of interferon-gamma.</a> Am. J. Pathol. 152, 1187-1197 (1998).</li>
<li>Nagano, H., Mitchell, R. N., Taylor, M. K., Hasegawa, S., Tilney, N. L., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+deficiency+prevents+coronary+arteriosclerosis+but+not+myocardial+rejection+in+transplanted+mouse+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma deficiency prevents coronary arteriosclerosis but not myocardial rejection in transplanted mouse hearts.</a> J. Clin. Invest. 100, 550-557 (1997).</li>
<li>Raisanen-Sokolowski, A., Glysing-Jensen, T., Koglin, J., Russell, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+transplant+arteriosclerosis+in+murine+cardiac+allografts+placed+in+interferon-gamma+knockout+recipients%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Reduced transplant arteriosclerosis in murine cardiac allografts placed in interferon-gamma knockout recipients.</a> Am. J. Pathol. 152, 359-365 (1998).</li>
<li>Salomon, R. N., Hughes, C. C. W., Schoen, F. J., Payne, D. D., Pober, J. S., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Coronary+Transplantation-Associated+Arteriosclerosis+-+Evidence+for+a+Chronic+Immune+Reaction+to+Activated+Graft+Endothelial+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Human Coronary Transplantation-Associated Arteriosclerosis - Evidence for a Chronic Immune Reaction to Activated Graft Endothelial Cells.</a> Am. J. Pathol. 138, 791-798 (1991).</li>
<li>Scott, D. M., Ehrmann, I. E., Ellis, P. S., Chandler, P. R., Simpson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+do+some+females+reject+males%3F+The+molecular+basis+for+male-specific+graft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Why do some females reject males? The molecular basis for male-specific graft rejection.</a> J. Mol. Med. 75, 103-114 (1997).</li>
<li>Shimizu, K., Sugiyama, S., Aikawa, M., Fukumoto, Y., Rabkin, E., Libby, P., Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+bone-marrow+cells+are+a+source+of+donor+intimal+smooth-+muscle-like+cells+in+murine+aortic+transplant+arteriopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Host bone-marrow cells are a source of donor intimal smooth- muscle-like cells in murine aortic transplant arteriopathy.</a> Nat. Med. 7, 738-741 (2001).</li>
<li>Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+axis+in+graft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma axis in graft arteriosclerosis.</a> Circ. Res. 100, 622-632 (2007).</li>
<li>Tellides, G., Tereb, D. A., Kirkiles-Smith, N. C., Kim, R. W., Wilson, J. H., Schechner, J. S., Lorber, M. I., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+elicits+arteriosclerosis+in+the+absence+of+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma elicits arteriosclerosis in the absence of leukocytes.</a> Nature. 403, 207-211 (2000).</li>
<li>Vassalli, G., Gallino, A., Weis, M., von Scheidt, W., Kappenberger, L., von Segesser, L. K., Goy, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alloimmunity+and+nonimmunologic+risk+factors+in+cardiac+allograft+vasculopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Alloimmunity and nonimmunologic risk factors in cardiac allograft vasculopathy.</a> Eur. Heart J. 24, 1180-1188 (2003).</li>
<li>Wang, Y., Bai, Y., Qin, L., Zhang, P., Yi, T., Teesdale, S. A., Zhao, L., Pober, J. S., Tellides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+induces+human+vascular+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion+by+phosphatidylinositol+3-kinase+dependent+mammalian+target+of+rapamycin+raptor+complex+1+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma induces human vascular smooth muscle cell proliferation and intimal expansion by phosphatidylinositol 3-kinase dependent mammalian target of rapamycin raptor complex 1 activation.</a> Circ. Res. 101, 560-569 (2007).</li>
<li>Wang, Y., Burns, W. R., Tang, P. C., Yi, T., Schechner, J. S., Zerwes, H. G., Sessa, W. C., Lorber, M. I., Pober, J. S., Tellides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+plays+a+nonredundant+role+in+mediating+T+cell-dependent+outward+vascular+remodeling+of+allogeneic+human+coronary+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Faseb+J%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma plays a nonredundant role in mediating T cell-dependent outward vascular remodeling of allogeneic human coronary arteries.</a> Faseb J. 18, 606-608 (2004).</li>
<li>Yacoub-Youssef, H., Marcheix, B., Calise, D., Thiers, J. C., Benoist, H., Blaes, N., Segui, B., Dambrin, C., Thomsen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+vascular+rejection%3A+histologic+comparison+between+two+murine+experimental+models%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant.+Proc%22%5BJournal%5D)">Chronic vascular rejection: histologic comparison between two murine experimental models.</a> Transplant. Proc. 37, 2886-2887 (2005).</li>
<li>Yokota, T., Shimokado, K., Kosaka, C., Sasaguri, T., Masuda, J., Ogata, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitogenic+activity+of+interferon+gamma+on+growth-arrested+human+vascular+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb%22%5BJournal%5D)">Mitogenic activity of interferon gamma on growth-arrested human vascular smooth muscle cells.</a> Arterioscler. Thromb. 12, 1393-1401 (1992).</li>
<li>Yu, L., Qin, L., Zhang, H., He, Y., Chen, H., Pober, J., Tellides, G., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AIP1+prevents+graft+arteriosclerosis+by+inhibiting+IFN-%CE%B3-dependent+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion%5BTitle%5D)+AND+%22Cir.+Res%22%5BJournal%5D)">AIP1 prevents graft arteriosclerosis by inhibiting IFN-γ-dependent smooth muscle cell proliferation and intimal expansion.</a> Cir. Res. 109, 418-427 (2011).</li>
</ol>

ليس لدينا شيء في الكشف عنها.

وتركز البروتوكولات المذكورة على نماذج GA الماوس. يمكن تطبيق إجراءات لنماذج أخرى زرع الكسب غير المشروع. وتشمل هذه النماذج طعم أجنبي أنسنة (أي قطاعات الشريان التاجي الإنسان موسط في أبهر الأشعة تحت الكلوي من الفئران العوز المناعي)، ورفض نموذج الفأر GA الحادة (أي الشريان الأورطي الفار من سلالة وراثية واحدة في المتلقي السلالة الجينية آخر). لدينا نماذج الماوس وصف أكثر ليغلق الآفات GA الإنسان. النموذج الأول ينطوي على مداخلة من شريحة سفينة من ماوس الذكور إلى مستلم الإناث...

arteriosclerois الكسب غير المشروع (GA)، وتسمى أيضا اعتلال وعائي طعم خيفي، هي آفة مرضية أن يتطور مع مرور أشهر إلى سنوات في الأعضاء المزروعة التي تتميز منتشر، تضيق كفافي من كامل شجرة الأوعية الدموية الكسب غير المشروع 7. قد يسبب المراحل المبكرة التضيق غريب الأطوار والتنسيق التي هي أكثر وضوحا في الشرايين، وبالتالي تشبه على نحو أوثق التضيق ينظر في تصلب الشرايين التقليدية. فقدان التجويف السفن الكسب غير المشروع نتائج من التوسع باطنة بسبب تسلل الخلايا T المضيفة والضامة وخصوصا لتراكم المصفوفة خارج الخلية والعضلات الملساء مثل الخلايا نشأت من الكسب غير المشروع، مضيف أو كليهما 5، 13، 19، أن يتم تعويض كاف بواسطة الخارج إعادة عرض السفينة. في المغايرة القلب، الآفات الأكثر أهمية هي تلك سريريا في الشرايين التاجية نخابي وداخل عضلة القلب. في نهاية المطاف، سوف GA الشرايين التاجية يسبب فشل القلب الإقفاري. GA هو السبب الرئيسي في وقت متأخر غرام القلبفقدان الخلف. والتضيق من GA تتوقف عند خطوط الدرز، تورط بقوة استجابة المضيف لalloantigens الكسب غير المشروع في المرضية ويقودنا لتصنيف GA باعتبارها شكلا من أشكال الرفض المزمن 3. ومع ذلك، قد غيرها من إصابة الشرايين أشكال تزيد من خطر GA، إما من خلال زيادة العبء صافي الإصابة أو عن طريق تكثيف و / أو تحوير استجابة منيع للمستضد الخيفي. يتم الاحتفاظ الخلية (EC) بطانة بطانة الشرايين الكسب غير المشروع في GA الإنسان والمناطق الأكثر سطحية من البطانية المتاخمة للبطانة EC هو موقع تسلل بشدة من المضيف المستمدة من الإنترفيرون γ إنتاج خلايا تي والضامة 11؛ في بعض المرضى يرتبط GA مع تطور alloantibodies المانحة الخاصة التي تربط لالكسب غير المشروع EC 16 ولكن الأوعية تظهر أدلة تذكر للنخر فيبرينية الذي هو سمة من الرفض الحاد الأجسام المضادة التي تتوسط فيها 11. العنصر الأكثر أهمية من GA المرضية هوانتشار الخلايا على نحو سلس مثل العضلات داخل البطانية، وإذا كان يمكن القبض على هذه العملية، من غير المرجح أن تقدم GA. وكان العمل السابق من مجموعتنا أظهرت أن intimas من قطاعات الشريان التاجي الإنسان موسط في أبهر الأشعة تحت الكلوي من الفئران العوز المناعي توسيع استجابة لخلايا نقل adoptively T الإنسان خيفي إلى الجهة المانحة الشريان وأن هذه العملية يمكن أن تحول دون تحييد الإنسان الإنترفيرون γ 18. الخارجية علاوة على ذلك الإنسان الإنترفيرون γ يمكن أن تسبب باطنة (وسطي) انتشار الخلايا العضلية الملساء (VSMC) الأوعية الدموية في هذه الطعوم الشريانية في غياب الخلايا التائية البشرية 15 و 17. (من المهم أن نلاحظ أن الإنسان والفأر الإنترفيرون γ لا يعبرون الأنواع، مستبعدا الآثار غير المباشرة على المضيف الماوس في هذا النظام التجريبي.) هذه نماذج الماوس أنسنة والاستفادة من تلخص الإنسان T خلية / التفاعلات الخلية الأوعية الدموية وباطنة وتتكون إلى حد كبير من الآفات الخلايا البشرية (أي الكسب غير المشروع المستمدة)،كما لوحظ في العينات السريرية، لكنها لا تلخص تماما الوضع السريري لأنها تتجاهل دور الضامة المضيف وأنواع الخلايا ربما الأخرى المشاركة في الآفات زرع السريرية. A نموذج الفأر التقليدية من هذه العملية يمكن أن تعالج هذه المشكلة نظريا، استكمال أوجه القصور في نموذج إنساني من خلال إشراك الجهاز المناعي المضيف كاملة وتوفير ميزة إضافية تتمثل في السماح للقوة النهج الوراثية الماوس ليتم تطبيقها على جورجيا. نماذج الماوس الأكثر استخداما على نطاق واسع اثنين تنطوي على زرع القلب والشريان منتبذ مثلي زرع 1. مصنوعة من الآفات التي تنمي في شرايين القلب ترقيع منتبذ إلى حد كبير من خلايا المضيف، على الأرجح من أصل نخاع العظام، في حين أن الخلايا البطانية في الشرايين في ترقيع قلب الإنسان هي في الغالب من أصل الكسب غير المشروع 5، 13، 19. هذا هو الفرق الكبير الذي أدى بنا إلى تطوير نماذج الماوس بديل. مداخلةوالشريان الأورطي الفار من سلالة واحدة إلى أخرى المستلم سلالة الفأر هو محدود حتى أكثر كنموذج لهذا الرفض المزمن في البشر لأن الخلية بوساطة الحاد استجابة الرفض في هذا النموذج الماوس يلغي تماما كل خلايا الأوعية الدموية المانحة المستمدة من الكسب غير المشروع في غضون شهرين الى ثلاثة 19 أسابيع. وبالتالي، فإن تغييرات لاحقة شهدت في قطاع سفينة موسط هي وحدها استجابة الخلايا المضيفة التي إسكانها في decellularized سفينة السقالة، وخلق حالة مصطنعة للغاية من أهمية محدودة كنموذج للتغيرات في الأوعية الكسب غير المشروع التي تحدث في العيادة. وقد وضعنا مؤخرا اثنين من نماذج الماوس الجديد للتحايل على هذه المشاكل 21. النموذج الأول ينطوي على مداخلة من شريحة سفينة من ماوس الذكور إلى مستلم الإناث من نفس السلالة الفطرية (C57BL/6J). النموذج الثاني ينطوي فاصلة شريحة الشريان من النوع البري C57BL/6J المانحة الماوس إلى ماوس المضيف من نفس السلالة والجنس التي تفتقر إلى تفصيلeptor لالإنترفيرون γ (الإنترفيرون γR-KO)، يليه إدارة الماوس الإنترفيرون γ (تسليمها عن طريق العدوى من كبد الفأر مع متجه الفيروسة الغدانية. هنا، نحن تصف بروتوكولات مفصلة ومزايا لدينا الماوس GA النماذج.

<table><tbody><tr><td>C57BL / 6J (H-2b)</td> <td>مختبرات جاكسون (بار هاربور ، مي)</td> <td>000664</td><td>متبرع (5 أسابيع) متلقي (8-12 أسبوعا) حقن</td></tr> <tr><td>هيدروكلوريد الكيتامين </td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-2053</td><td>محلول التخزين (50 مجم / مل) محلول عمل (5 مجم / مل)</td></tr><tr><td> محلول زيلازين معقم</td><td>Lloyd Inc.</td><td>NADA # 139-236</td><td>محلول تخزين (100 مجم / مل) محلول عمل (1 مجم / مل)</td></tr> <tr><td>Ketoprofen</td><td>Fort Dodge Animal Health</td><td>NDC 0856-4396-01</td><td>محلول تخزين (100 مجم / مل) محلول عمل عن طريق الفم (0.027 مجم / مل)</td></tr> <tr><td>صيدلانيات</td> <td>هيبارين صوب الصوديوم</td><td>NDC 25021-400</td><td>محلول تخزين (1000 وحدة / مل) محلول عمل (100 وحدة / مل) محلول</td></tr> <tr><td>ملحي (معقم 0.9٪ كلوريد الصوديوم)</td> <td>CareFusion</td><td>AL4109</td><td></td></tr><tr><td>0.9٪ حقن كلوريد الصوديوم</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-4888-10</td><td>لتحضير مخدر </td></tr><tr><td>مرهم الفازلين للعيون </td><td>Dechra المنتجات البيطرية</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>وسادات اليود الإعدادية </td><td>Triad Disposables، Inc.</td><td>NDC 50730-3201-1</td><td></td></tr><tr><td>وسادات إعداد الكحول</td><td>McKesson Corp.</td><td>NDC 68599-5805-1</td><td></td></tr><tr><td>مجهر</td><td>لايكا</td><td>MZ95</td><td></td></tr><tr><td>مقص صغير</td><td>شركة Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5693</td><td></td></tr><tr><td>مقص زنبركي</td><td>FST</td><td>15009-08</td><td>لتمرير الشريان الأورطي للمتبرع أو المتلقي </td></tr><tr><td>مقص ضيق للغاية</td><td>FST</td><td>14088-10</td><td></td></tr><tr><td>حامل إبرة / ملقط</td><td>MICRINS</td><td>MI1542</td><td>لعقد الإبرة</td></tr><tr><td>ملقط دقيق</td><td>FST</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>ملقط</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>ملقط النمط القياسي</td><td>FST</td><td>11000-12</td><td></td></tr><tr><td>ملقط</td><td>FST</td><td>13011-12</td><td></td></tr><tr><td>لانكستر العين منظار</td><td>زيبف الأدوات الطبية</td><td>42-1209-07</td><td></td></tr><tr><td>مشبك الأوعية الدموية</td> الدقيقة <td>شركة Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-6472</td><td></td></tr><tr><td>مشبك صغير يطبق ملقطا مع قفل</td><td>شركة Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5440</td><td></td></tr><tr><td>خياطة حيدة حيدة من مادة البولي أميد السوداء</td><td>AROSurgical Instruments Corporation</td><td>Cat #T4A10Q07</td><td>10-0 خياطة ، إبرة = 70 ميكرون</td></tr><tr><td>خيوط نايلون أحادية حيدة</td><td>سوداء (Covidien)</td> <td>SN-1956</td><td>6-0 خياطة</td></tr><tr><td>غير منسوجة Songes</td><td>McKesson Corp.</td><td>إعادة الطلب رقم 94442000</td><td></td></tr><tr><td>1 مل حقنة</td><td>BD</td><td>REF 309659</td><td></td></tr><tr><td>3 مل حقنة</td><td>BD</td><td>REF 309657</td><td></td></tr><tr><td>10 مل حقنة</td><td>BD</td><td>REF 309604</td><td></td></tr><tr><td>18G 1 1/2 ، إبرة تحت الجلد</td><td>BD</td><td>REF 305196</td><td></td></tr><tr><td>25G 7/8 ، إبرة تحت الجلد</td><td>BD</td><td>REF 305124</td><td></td></tr><tr><td>27G 1/2 ، إبرة تحت الجلد</td><td>BD</td><td>المرجع 305109</td><td></td></tr><tr><td>30 جم 1/2 ، إبرة تحت الجلد</td><td>BD</td><td>REF 305106</td><td></td></tr><tr><td>وسادة القلب</td><td>شعاع الشمس</td><td>Z-1228-001</td><td></td></tr><tr><td>ماكينة تشذيب</td><td>Wahl</td><td>9854-500</td><td></td></tr> <tr>< TD colspan = "4" ><قوي>الجدول 2. كواشف ومعدات محددة.< / قوي></td></tr></tbody></table>

نماذج الماوس لتصلب الشرايين الكسب غير المشروع

Mouse Models for Graft Arteriosclerosis

arteriosclerois الكسب غير المشروع (GA)، وتسمى أيضا اعتلال وعائي طعم خيفي، هي آفة مرضية أن يتطور مع مرور أشهر إلى سنوات في الأعضاء المزروعة التي تتميز منتشر، تضيق كفافي من شجرة الأوعية الدموية الكسب غير المشروع بأكمله. العنصر الأكثر أهمية من GA المرضية هو انتشار السلس خلايا تشبه العضلات داخل البطانية. عندما يتم موسط شريحة الشريان التاجي الإنسان في أبهر الأشعة تحت الكلوي من الفئران العوز المناعي، وintimas يمكن توسيع ردا على خلايا T الإنسان نقل adoptively خيفي إلى الجهة المانحة الشريان أو خارجية الإنسان الإنترفيرون γ في غياب الخلايا التائية البشرية. مداخلة من الشريان الأورطي الفار من سلالة واحدة إلى أخرى المستلم سلالة الماوس يقتصر كنموذج لهذا الرفض المزمن في البشر لأن استجابة الرفض الخلية بوساطة الحادة في هذا النموذج الماوس يلغي تماما كل الخلايا المانحة المستمدة من الأوعية الدموية من الكسب غير المشروع في غضون شهرين الى ثلاثة أسابيع. وقد وضعنا مؤخرا اثنين متر جديدة[أوس] نماذج للتحايل على هذه المشاكل. النموذج الأول ينطوي على مداخلة من شريحة سفينة من ماوس الذكور إلى مستلم الإناث من نفس السلالة الفطرية (C57BL/6J). يتم توجيه رفض الكسب غير المشروع في هذه الحالة فقط ضد مستضدات التوافق النسيجي طفيفة المشفرة بواسطة كروموسوم Y (موجودة في الذكور ولكن ليس الأنثى) واستجابة الرفض الذي تستتبعه هو كسلان بما فيه الكفاية للحفاظ على خلايا العضلات الملساء المانحة المستمدة لعدة أسابيع. النموذج الثاني ينطوي فاصلة شريحة الشريان من النوع البري C57BL/6J المانحة الماوس إلى ماوس المضيف من نفس السلالة والجنس التي تفتقر إلى مستقبلات للالإنترفيرون γ تليها إدارة الماوس الإنترفيرون γ (تسليمها عن طريق العدوى من الفأرة الكبد مع متجه الفيروسة الغدانية، وليس هناك رفض في هذه الحالة لأن كلا من الجهات المانحة والمتلقية الفئران هي من نفس السلالة والجنس ولكن الخلايا المانحة العضلات الملساء تتكاثر ردا على خلوى في حين أن الخلايا المشتقة من المضيف، وتفتقر إلى مستقبلات للهذا خلوى، لا تستجيب. بواسطة backcrossing بتغيرات جينية إضافية إلى الجهة المانحة السفينة، كلا النموذجين يمكن استخدامها لتقييم تأثير جينات معينة على GA التقدم. هنا، نحن تصف بروتوكولات مفصلة لدينا الماوس GA النماذج.

الماوس طعم خيفي تصلب الشرايين (GA) نموذج: في هذا النموذج، يتم زرعها في الشريان الأورطي المانحة الذكور إلى الإناث المتلقية بحيث المضيف يدفع alloreactive T الردود منيع للمستضد الخيفي الخلية بوساطة ضد مستضد Y قاصر (القاصر التوافق النسيجي HY المستضد الخاص بالذكور) أعرب عن الكسب غير المشروع 12، وبدوره T الخلية المنتجة الإنترفيرون γ محركات VSMC انتشار 20 كما لوحظ في نماذج أخرى زرع طعم خيفي 2، 6، 8-10، 14. وموسط A جزء من الشريان الأورطي ا...

نحن تصف بروتوكولات لدينا arteriosclerois الكسب غير المشروع الماوس (GA) نماذج التي تنطوي على مداخلة من شريحة سفينة الماوس إلى المتلقي من نفس السلالة الفطرية. بواسطة backcrossing بتغيرات جينية إضافية إلى الجهة المانحة السفينة، يمكن للنموذج تقييم تأثير جينات معينة على GA.

Graft arteriosclerois (GA),  also called allograft vasculopathy, is a pathologic lesion that develops over  months to years in transplanted organs ...

الهدف العام من التجربة التالية هو زراعة وعاء دموي مانح في الأبهر البطني لفأر مستقبِل. تتمثل الخطوة الأولى في تشريح الأبهر الصدري من الفأر المانح. بعد ذلك، يتم إنشاء مواقع المفاغرة في الأبهر البطني للفأر المستقبِل.يتم بعد ذلك زرع الوعاء المانح في الأبهر البطني للمستقبل. وفي النهاية، يمكن تقييم نجاح عملية الزرع من خلال سلامة الوظيفة الحركية للطرف الخلفي للفأر المستقبل. لذا، سيساعدنا هذا النموذج في فهم الإمراض الخاص بتصلب الشرايين في الطعم.وهذا يمثل تحدياً تقنياً يتطلب الكثير من الممارسة والصبر للوصول إلى الإتقان. لذا، سيقوم الدكتور Chen بتوضيح الإجراء بمساعدة Louanne. للبدء، تأكد من وصول تخدير الفأر المانح إلى العمق المناسب.بمجرد تخدير الفأر، ضعه في وضعية الاستلقاء الظهري على صينية تحت مجهر جراحي. نظف الصدر بعمليات فرك متكررة باستخدام اليود والكحول بعد كشف القلب وشطفه بالمحلول الملح، ثم قم بإزالة القلب والرئتين للكشف عن كامل طول الأبهر الصدري. وبمجرد رؤيته، ابدأ بتشريح الأبهر الصدري بعناية وفصله عن الأنسجة المحيطة.عند الوصول إلى الفروع القطنية، يتم ربطها بالقرب من الأبهر باستخدام خياطة حريرية قبل قطعها. وبمجرد تحريرها من الأنسجة المحيطة، يتم استئصال الشريان الأبهر الصدري بالكامل. وبعد عزله، يُغسل الشريان الأبهر المتبرع به بمحلول ملحي مضاف إليه الهيبارين ويُحفظ في هذا المحلول على الثلج حتى عملية الزرع.بعد التأكد من تخدير الفأر المستقبل بشكل كافٍ، قم بحلاقة الفراء من المنطقة البطنية الأمامية. غطِّ العينين بمرهم عيني ونظف المنطقة كما سبق توضيحه. عند الجاهزية، ضع الفأر في وضعية الاستلقاء الظهري على صينية تحت مجهر جراحي.قم بشق جدار البطن عند الخط الناصف من الناتئ xiphoid إلى العانة، ثم استخدم مباعداً لفتح الجدار وكشف التجويف البطني. وبمجرد الكشف عنه، لف الأمعاء بشاش مبلل بالمحلول الملح، وادفع بها للأعلى وبعيداً عن التجويف البطني. استخدم المزيد من الشاش المبلل بالمحلول الملح للف المناطق المتبقية من البطن واستخدمه لإزاحة المستقيم إلى الجانب الأيمن من البطن. بعد ذلك، حرك الأعضاء التناسلية نحو الأسفل.تذكر الحفاظ على رطوبة الأنسجة المكشوفة عن طريق تطبيق محلول ملحي. حدد بانتظام الشريان الأورطي تحت الكلوي الموجود قريباً من الوعاء الكلوي وبعيداً عن تفرع الأبهر. قم بتشريحه بعناية لفصله عن الوريد الأجوف السفلي.حدد جميع الفروع الصغيرة التي تنشأ من هذا الجزء من الشريان الأبهر، ثم قم بربطها وقطعها لتحريرها. وبمجرد عزل الجزء الأبهري، ضع ملقطاً وعائياً عند كل طرف بمسافة تفصل بينهما خمسة مليمترات تقريباً. بعد ذلك، قم بإنشاء مواقع التوصيل عن طريق قطع الشريان الأبهر البطني بين الملقطين.باستخدام مقصات جراحية دقيقة وحادة، استأصل قطعة صغيرة من الأبهر من أحد الطرفين المقطوعين لتهيئة مكان لتركيب طعم الأبهر المانح. قم بغسل قطع الأبهر الموجودة بين المشابك باستخدام محلول ملحي هيباريني لإزالة بقايا الدم. تذكر ري كلتا عينتي الأبهر بشكل دوري بمحلول ملحي هيباريني طوال فترة الإجراء.بعد ذلك، يتم قطع كلا جانبي الأبهر المانح لإنشاء قطعة تطعيم بطول 2.5 millimeters لغرض الزرع. ضع قطعة تطعيم الأبهر المانحة في موضعها مع محاذاة الطرفين القريب والبعيد من أجل الخياطة المستمرة. ضع غرز تثبيت عند موضعي الساعة الثالثة والتاسعة في كلا الطرفين أولاً.بعد ذلك، قم بتوصيل الحواف المقطوعة باستخدام ثلاث إلى أربع غرز جراحية مستمرة، واربط الغرز المستمرة بغرز التثبيت باستخدام عقدة مزدوجة للغرز المتقطعة. قم بإنشاء أربعة مواقع مفاغرة عند موضعي الساعة الثالثة والتاسعة على كلا جانبي الطعم أولاً. بعد ذلك، قم بتوصيل الحواف المقطوعة باستخدام ثلاث إلى أربع غرز توضع بين كل موقع من هذه المواقع.بمجرد وضع الغرز في مكانها، قم بتحرير المشبك القاصي للسماح بالتدفق الرجعي إلى الطعم. حدد أي مواقع نزيف وقم بإجراء غرز إضافية في غضون ثلاث دقائق. وعند تحقيق إرقاء مرضٍ، قم بتحرير المشبك الداني.يمكن تأكيد نفاذية الطعوم من خلال وجود نبض قوي. وفي حال تراجع النبض، يتم حقن الهيبارين في الوعاء الدموي لمنع حدوث التخثر. وعند الجاهزية، تُعاد الأمعاء إلى التجويف البطني وتُخاط طبقات العضلات والجلد لإغلاق الجرح.ضع الفأر المستقبل في قفص نظيف ودافئ وراقبه لمدة تتراوح من ساعة إلى ساعتين حتى يستعيد وعيه. قيم الوظيفة الحركية للفأر بعد التعافي ومرة أخرى في اليوم الثاني؛ وتعتبر جراحة الزرع ناجحة إذا لم يلاحظ أي خلل وظيفي في الأطراف الخلفية. وكشف التحليل النسيجي للطعوم الشريانية المأخوذة بعد أربعة أسابيع من الجراحة عن زيادة في سمك جدار الوعاء الدموي في الإناث المستقبلات من متبرع ذكر.ومع ذلك، لم يُلاحظ حدوث تصلب شرايين في الطعم لدى مجموعة الذكر إلى الذكر. في هذا المثال، تم زرع الشريان الصدري من متبرع ذكر في فأر من نوع interferon gamma knockout، ثم تم تحفيز تعبير interferon gamma في الفأر المستقبل قبل أخذ العينات.بعد بضعة أسابيع، أظهر التحليل النسيجي لطعوم الشرايين عدم ملاحظة أي تصلب شرايين في الطعوم لدى المجموعة المعالجة. الآن أصبحت تعرف كيفية إجراء هذه الجراحة. استمر في التدرب.

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

وصفنا تقنية التي زرعها قسم من الشريان الأورطي البطني من الماوس orthotopically إلى أسفل الشرايين الكلوية في مستلم خيفي أو مسانج. هذه التقنية يمكن أن تكون مفيدة في الدراسات التي يعتبر زرع الشرايين كبيرة من حجم موحد المفيد.

زرع مثلي الشريان الأورطي في الفئران لدراسة أمراض الأوعية الدموية

ونحن يبرهن على وجود رواية نموذج ربط الشرايين في العضلات spinotrapezius الفئران، بما في ذلك إجراء خطوة بخطوة ووصف الأجهزة المطلوبة. وصفنا الجراحة وقياسات النتائج ذات الصلة المتعلقة إعادة عرض شبكة الأوعية الدموية وتوسع الأوعية الوظيفية باستخدام المجهر متحد البؤر intravital و.

Spinotrapezius نموذج الفئران لتقييم أثر ربط شريني ظيفة الاوعية الدموية الدقيقة وعلى إعادة عرض

يعتمد تحليل  Ex vivo للآفات الشريانية من النماذج الحيوانية لأمراض القلب والأوعية الدموية بشكل كلاسيكي على التقنيات النسيجية والكيميائية المناعية. توفر هذه قياسات ثنائية الأبعاد في آفات ثلاثية الأبعاد. تصف هذه المخطوطة توليد الآفات الشريانية للتحليل الكمي في 3 أبعاد باستخدام التصوير المقطعي البصري.

جيل والكميات 3-الأبعاد من الآفات الشرياني في الفئران عن طريق الإسقاط الضوئي المقطعي

لقد أثبتت النماذج الحيوانية لتكون أدوات لا تقدر بثمن في تحديد آليات المضيف والممرض المحددة التي تسهم في تطوير الالتهاب المزمن. نحن هنا وصف نموذج الفأر العدوى عن طريق الفم مع الممرض البشري Porphyromonas اللثوية ومنهجيات التفاصيل لتقييم تطور التهاب في المواقع المحلية والنظامية.

نموذج الفأر لالتهاب الناجم عن مسببات الأمراض المزمنة في مواقع المحلية والجهازية

نصف بروتوكول لتطعيم تداخل الأبهر في الفئران. الهدف من البروتوكول هو توفير نموذج يمكن من خلاله دراسة العمليات المرضية والاستراتيجيات العلاجية ذات الصلة بالتفاعلات المناعية الخيفية في الشرايين والتغيرات الشريانية الناتجة التي تساهم في فشل زراعة الأعضاء.

نموذج الفأر من منيع للمستضد الخيفي الناجم عن رفض الأوعية الدموية وزراعة تصلب الشرايين

نحن نقدم نموذجا زرع الابهري أورثوتوبيك باستخدام تقنية الأكمام في الفئران. وهي طريقة ملامسة سريعة جداً، التي يمكن استخدامها في الدراسات المتعلقة بأمراض الأوعية الدموية.

باستخدام هذه التقنية الأكمام في نموذج ماوس لزرع الابهري-فيديو التعليمية

نماذج مورين من تصلب الشرايين هي أدوات مفيدة للتحقيق في المسارات المسببة للأمراض على المستوى الجزيئي، ولكن تتطلب قياس اقاصي موحد لتطوير الآفات. يصف هذا البروتوكول طريقة محسنة لتحديد حجم الآفة في الأوعية الشريانية الرئيسية بما في ذلك الجذر الأبهري والقوس الأبهري والشريان البشعي.

القياس الكمي لتصلب الشرايين في الفئران

توضح هذه المقالة نهجا جراحيا فعالا لإنشاء نقص التروية الحاد في الفئران ذات الشق الصغير. ويمكن تطبيق هذا النهج من قبل معظم مجموعات البحوث دون أي تحسينات مختبرية.

نموذج جراحي معدل لإقفارية الأطراف الخلفية في ApoE-/- الفئران باستخدام شق مصغر

لقد أثبتنا توسع الأوعية الدموية الكبيرة الذي يحفز كيميائيا في الفئران كنموذج للتحقيق في الخلل الوظيفي الوعائي الدماغي ، والذي يمكن استخدامه في الخرف الوعائي ونمذجة مرض الزهايمر. نوضح أيضا تصور الأوعية الدموية عن طريق حقن مركب مطاط السيليكون وتوفير إرشادات بصرية واضحة لقياس التغيرات في حجم الأوعية الدموية.

نهج بصري لإحداث توسع الشعيرات في الفئران لنمذجة الخلل الوظيفي الدماغي الوعائي بوساطة الأوعية الدموية الكبيرة

يقترح استخدام طريقة الإبرة لتضيق الشريان السباتي المشترك الثنائي غير المتماثل لإنشاء نموذج فأر لضعف إدراك الأوعية الدموية والخرف. ينتج عنه نتائج طويلة المدى مقارنة بالنماذج التي تم إنشاؤها سابقا ومتوافق مع التصوير بالرنين المغناطيسي الحي. يوفر التمثيل المرئي الذي يوضح الإجراء إرشادات لإتقان الجراحة.

نموذج فأر للضعف الإدراكي الوعائي والخرف على أساس تضيق الشريان السباتي المشترك الثنائي غير المتماثل الموجه بالإبرة

هنا ، يتم تقديم بروتوكول لزرع طعم وعائي مصمم بالأنسجة في الشريان السباتي للفأر باستخدام تقنية الكفة ، مما يوفر نموذجا حيوانيا مناسبا للتحقيق في آليات تجديد أنسجة الأوعية الدموية.

زرع ترقيع الأوعية الدموية المصمم بالأنسجة في الشريان السباتي للفأر بتقنية الكفة

تعلم بروتوكول زرع الأوعية الدموية في الفئران لدراسة تصلب الشرايين الكسب غير المشروع. يتيح هذا النموذج تقييم التأثيرات الوراثية على تطور المرض وفهم آليات فشل الزرع الوعائي.

نماذج الماوس لتصلب الشرايين الكسب غير المشروع

استكشف المزيد من الفيديوهات