Name: تقييم إفراغ المعدة في الفئران من السكري غير البدناء باستخدام 13 C -الأوكتانويك اختبار التنفس حمض (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 24 s
Description: تعلم قياس إفراغ المعدة في الفئران باستخدام اختبار التنفس بحمض الأوكتانويك المُعلَّم بـ[13C]، وهي طريقة غير جراحية تتيح متابعة متكررة لدراسة عسر الإفراغ المعدي في نماذج السكري.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وجاء هذا المنشور الفيديو ممكن عن طريق تمويل من المعهد الوطني للسكري وأمراض الجهاز الهضمي والكلى (جوائز كبيرة) ل&quot;البيولوجيا المرضية للنظام المعوية&quot; مشروع برنامج منح DK 68055. وأيد كريستوفر T. Creedon من برنامج روشستر العامة توجيهي المدارس. نشكر السيد غاري ستولتز للمساعدة التقنية، والسيدة كريستي Zodrow للمساعدة السكرتارية والدكتور دوغلاس من باير لوس قطط البحوث، وشركة (ماونتن فيو، كاليفورنيا).

1. التدريب والتعويد من الفئران <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل التحليل، ووضع كل الفئران في غرف اختبار لمدة 2-4 ساعة مع تدفق الهواء المستمر من أجل روض لهم الظروف الاختبار. هذا يقلل بشكل ملحوظ من مستويات التوتر التي قد تسبب خلاف ذلك الكشف الشاذة من تأخر إفراغ المعدة. علاج الفئران بنفس الطريقة كما لو أن التجربة تم تشغيل إفراغ المعدة. إعداد صفار البيض (انظر كذلك) دون إضافة حمض الأوكتانويك وإطعام 0.2 جم لكل الماوس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر هذه العملية حتى يتم تدريب الفئران على نحو كاف (عادة 2-3 مرات). الفئران عادة ما اعتادوا بسهولة طالما يتم الاحتفاظ الظروف البيئية نفسها. </li></ol> ملاحظة: غير متعود الفئران مواصلة التحرك في جميع أنحاء لحوالي 1 ساعة بعد نقل إلى غرفة، والتبرز والتبول بشكل متكرر، في حين اعتادوا تسوية الفئران بسرعة في بيئتهم الجديدة وبقية بهدوء. لاالشركة المصرية للاتصالات: خلال التجربة: الحيوانات مراقبة لدلائل على فقدان التعود مثل كثرة التبول، التبرز، وعدم الاهتمام في تناول البيض. إذا كانت هذه هي الحالة إعادة النظر في التعود في غرفة فارغة 1-2 مرات قبل الحصول على البيانات المعدة إفراغ. الاتساق هو في غاية الأهمية أثناء القيام بهذه التجربة. فعل الأشياء بنفس الطريقة تماما في كل مرة هو السبيل الوحيد للحصول على نتائج موثوقة وقابلة للتكرار. وهذا يشمل إعطاء العلاج (مثل الأنسولين) كل يوم في نفس الوقت، لا يفصل بين الفئران من الاصحاب قفص الا للضرورة القصوى، صيام الفئران والبدء في اختبار إفراغ المعدة في نفس الوقت، والتعامل مع الفئران بنفس الطريقة. 2. إعداد وجبة تحتوي على النظير اختبار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تبدأ وزنها إلى 5 غ من صفار البيض في أنبوب 50 مل الصقر. كرر هذه الخطوات كل يوم التجريبية لإعداد وجبة اختبار جديدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 10 ميكرولتر من حمض octanoic مع concentrأوجه من 2 ميكرولتر / ز إلى أنبوب 50 مل الصقر تحتوي على البيض ويخلط بقوة لمدة 1 دقيقة مع ملعقة في أنبوب الصقر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم نقل البويضة إلى كأس زجاجي وتسخن أكثر من ناسخ بنسن حتى يتخثر واتساقه هو مناسبة لجعل كرات صغيرة. هذا عادة ما يستغرق حوالي 30 ثانية. </li></ol> ملاحظة: كرات من صفار البيض يجب أن تزن 0.2 غرام في الماوس. هذا مهم للحفاظ على جرعة تراكمية مستمرة في جميع الفئران. 3. بدء التجربة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة مدربة وجاهزة للإفراغ المعدة، سرعة الفئران بين عشية وضحاها (12 ساعة) على رف معدني &quot;شبكة القاع&quot; الصيام لمنع أكل البراز. تأكد لديهم حرية الوصول إلى المياه الصالحة للشرب. منذ تستخدم الفئران من السكري في التجربة الحالية، لا ينبغي أن صام لأكثر من 16 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تبدأ من خلال إنشاء دوائر المعدة إفراغ. استخدام غرف نظيفة وأغطية التي كانت المجفف في الهواء. أيضا، أييجب أنابيب يربط بين الدوائر إلى محلل أو توريد الهواء 2 CO تكون خالية الرطوبة والمياه يمكن أن تتداخل مع إشارة قراءة من قبل محلل </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توصيل الدوائر إلى مدخل أنابيب التي توفر تدفق الهواء المستمر. ثم قم بتوصيل منفذ أنابيب من غرف إلى الجهاز. إغلاق أنابيب وتشغيل تدفق الهواء. </li></ol> ملاحظة: ضع كمية صغيرة جدا من الفازلين في نهاية الجفن غطاء حتى إغلاق بسهولة ومغلقة بإحكام. هذا الختم هو ضيق اللازمة لجمع كل ثاني أكسيد الكربون التي تنتجها الفئران. 4. إجراءات تجريبية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تبدأ بها كل وزنها الماوس. وزن الجسم هو مقياس لصحتهم جيدة مستمرة. ثم ضع الماوس في كل غرفة المناسبة. ومن المهم بطبيعة الحال أن الهواء المتدفقة إلى غرف في هذا الوقت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لبدء القياس، والسماح للفئران حتى يتأقلم إلى غرف قبل ضبطجي مستويات الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وبمجرد أن الفئران تظهر الهدوء، والتي قد يستغرق بضع دقائق، وضبط معدل تدفق الهواء لكل غرفة الماوس. وهذا قد يكون مختلفا عن كل الماوس. عادة، يتم ضبط تدفق الهواء في بداية التجربة للتأكد من أن الزفير CO 2 إلى مستويات يمكن كشفها بأي المعدات المستخدمة، والتأكد من أن مستوى يبقى منخفضة بما فيه الكفاية لضمان دوران الهواء صحية. نستخدم الأولية مستويات CO 2 بين 1،000 و 1،500 جزء في المليون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان وجود صعوبة مع تعديلات، والتحقق من وجود تسرب الهواء. ثم كرر العملية لكل دائرة من الدوائر ومشاهدة لجولة أخرى من قياسات لمعرفة ما إذا التعديلات التي أدخلت على تدفق الهواء وتصحيح مستوى CO 2. من المهم للحصول على خط الأساس ثابت القراءة قبل إطعام الفئران. نستخدم جهاز مع ميزة معايرة الذاتي. يجب إذا لم يكن ذلك يتم فحص المعايرة القضية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما يتحقق هذا، وجبة البيض إدارةلأول مرة الماوس وسجل كل الماوس يتلقى الطعام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نحن تشغيل الإجراء لمدة 4 ساعة للحصول على ما يكفي من القيم لتركب ال 13 منحنى CO 2 لكل تخصيب الماوس. اطمئنان على الفئران كل دقيقة 30-60 للتأكد من أن مستويات CO 2 لا تزال آمنة للالفئران. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد صناديق جديدة تحتوي على المواد الغذائية قبل نهاية الاختبار لذلك يمكن البدء في تناول الفئران مباشرة بعد الاختبار قد انتهت. </li></ol>

<ol><li>Yeung, C. K., McCurrie, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+to+investigate+the+inhibitory+effects+of+drugs+on+gastric+emptying+in+the+mouse+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method to investigate the inhibitory effects of drugs on gastric emptying in the mouse in vivo.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 45, 235-240 (2001).</li>
<li>Osinski, M. A., Seifert, T. R., Cox, B. F., Gintant, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+of+evaluation+of+drug-evoked+changes+in+gastric+emptying+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">An improved method of evaluation of drug-evoked changes in gastric emptying in mice.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 47, 115-120 (2002).</li>
<li>Ghoos, Y. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+gastric+emptying+rate+of+solids+by+means+of+a+carbon-labeled+octanoic+acid+breath+test%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Measurement of gastric emptying rate of solids by means of a carbon-labeled octanoic acid breath test.</a> Gastroenterology. 104, 1640-1647 (1993).</li>
<li>Symonds, E., Butler, R., Omari, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+breath+tests+can+detect+alterations+in+gastric+emptying+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Noninvasive breath tests can detect alterations in gastric emptying in the mouse.</a> Eur. J. Clin. Invest. 32, 341-344 (2002).</li>
<li>Symonds, E. L., Butler, R. N., Omari, T. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+gastric+emptying+in+the+mouse+using+the+%5B13C%5D-octanoic+acid+breath+test%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Pharmacol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Assessment of gastric emptying in the mouse using the [13C]-octanoic acid breath test.</a> Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 27, 671-675 (2000).</li>
<li>Verhulst, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+ghrelin+in+the+relationship+between+hyperphagia+and+accelerated+gastric+emptying+in+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Role of ghrelin in the relationship between hyperphagia and accelerated gastric emptying in diabetic mice.</a> Gastroenterology. 135, 1267-1276 (2008).</li>
<li>Schoonjans, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+13C-octanoic+acid+breath+test%3A+validation+of+a+new+noninvasive+method+of+measuring+gastric+emptying+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterol.+Motil%22%5BJournal%5D)">The 13C-octanoic acid breath test: validation of a new noninvasive method of measuring gastric emptying in rats.</a> Neurogastroenterol. Motil. 14, 287-293 (2002).</li>
<li>Choi, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+gastric+emptying+in+nonobese+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Gastrointest.+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Determination of gastric emptying in nonobese diabetic mice.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 293, 1039-1045 (2007).</li>
<li>Atkinson, M. A., Leiter, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+NOD+mouse+model+of+type+1+diabetes%3A+as+good+as+it+gets%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">The NOD mouse model of type 1 diabetes: as good as it gets?</a> Nat. Med. 5, 601-604 (1999).</li>
<li>Camilleri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+practice.+Diabetic+gastroparesis%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Clinical practice. Diabetic gastroparesis.</a> N. Engl. J. Med. 356, 820-829 (2007).</li>
<li>Choi, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+oxygenase-1+protects+interstitial+cells+of+Cajal+from+oxidative+stress+and+reverses+diabetic+gastroparesis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Heme oxygenase-1 protects interstitial cells of Cajal from oxidative stress and reverses diabetic gastroparesis.</a> Gastroenterology. 135, 2055-2064 (2008).</li>
<li>Kashyap, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+monoxide+reverses+diabetic+gastroparesis+in+NOD+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+GI%22%5BJournal%5D)">Carbon monoxide reverses diabetic gastroparesis in NOD mice.</a> Am. J. Physiol. GI. G298, G1013-G1019 (2010).</li>
</ol>

الكتاب تعلن أنه ليس لديهم المصالح المتنافسة المالية.

هذه التقنية تسمح صفها هنا للالمتكررة وغير الغازية في قياس الجسم الحي من إفراغ المعدة الصلبة في الفئران. هذا النظام له ميزة أنه لا تقييد الحيوانات في غرفة القياس، والسماح لهم للتحرك وتحويل بحرية. حيث أن هذه هي بيئة غير مألوفة، والفئران لا تزال بحاجة إلى تدريب وتعود على اختبار الدوائر لمنع آثار الإجهاد على إفراغ المعدة. بشكل عام، ونحن نفترض البيانات إفراغ المعدة يمكن الاعتماد عليها إذا كان التباين داخل الماوس بين الاختبارات المعدة على التوالي إفراغ أقل من 10٪. ...

يصف هذا المخطوط الاعتبارات التقنية والمنهجية المشاركة في غير الغازية قياس إفراغ المعدة في الفئران. باتباع بروتوكول الموصوفة هنا، يمكن المحققين موثوق وبتكاثر متابعة التغيرات في المعدة إفراغ بسبب تطور المرض، ودراسة تأثير العوامل الدوائية على إفراغ المعدة واتبع رد إفراغ المعدة لعلاج الأمراض أو العيوب الكامنة 6،8، 11،12. في المنشورات السابقة، وتطبيق 13 C وأظهرت الاختبارات التنفس حمض octanoic ليكون وسيلة مفيدة لقياس إفراغ المعدة في الإنسان والحيوان 3،8. وتصف هذه الورقة بالتفصيل، الإجراءات اللازمة للحصول على بيانات موثوق بها على مدى 8 6 إلى اللازمة لإجراء دراسة طولية من إفراغ المعدة في الفئران المصابين بداء السكري أشهر. مزايا هذا البروتوكول بعد بالمقارنة مع الأساليب التي تم نشرها مسبقا هي التي يمكن أكدت للمحقق obtaine البياناتسوف تكون موثوقة ود استنساخه. وبالإضافة إلى ذلك، فإن النظام الآلي لجمع وتحليل عينات الغاز الموصوفة هنا يزيد من عدد الحيوانات التي يمكن اتباعها في وقت واحد في الدراسة. وعموما، فإن الهدف من هذه الورقة هو تحديد العوامل الرئيسية التي تحافظ على التعود من الفئران لاختبار والتي تقلل من التباين في النتائج التي تم الحصول عليها. لفي قياس الجسم الحي من إفراغ المعدة، وصام بين عشية وضحاها الفئران ووضعها في غرف اختبار تدفق الهواء مع بلاستيكية شفافة ثابتة. بعد الحصول على اعتادوا على الفئران إلى أنابيب، خط الأساس الزفير 13 CO يتم تحديد 2 مستويات تدفق الهواء وتعديلها وفقا لذلك. المقبل، ونحن إدارة وجبة تتكون من اختبار صفار البيض مختلطة مع 13 حمض octanoic C-المسمى. لأن الفئران صام وتدريبهم، وأنهم يأكلون وجبة الاختبار عموما داخل 2 دقيقة. لا يمتص في إدارة حمض octanoic في المعدة ولكن سيتم تناولها في الاثني عشر علىسوف تحصل على استقلاب في الكبد د إلى 13 CO 2، الذي صدر والزفير، مما أسفر عن تخصيب من 13 CO 2 في الهواء المحيط. يتم جمع عينات من الهواء في فترات زمنية محددة ويتم تحليلها من قبل محلل الكربون النظير. معدل منظم للخطوة في هذه العملية كلها هو إفراغ المعدة وإفراز الرئوي من 13 CO 2 يتوافق مباشرة مع إفراغ المعدة من وجبة المسمى. <img src="/files/ftp_upload/50301/50301fig1.jpg" alt="الشكل 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50301/50301fig1highres.jpg"/> الشكل 1. التخطيطي لجهاز إفراغ المعدة. بعد الصيام بين عشية وضحاها، وضعت الفئران في غرف شفافة تسمح لهم بالانتقال وتحويل بحرية. مدخل أنبوب يسمح الطازجة ومستمر تدفق الهواء ومنفذا يؤدي إلى محلل لقياس النظائر 13 C-إلى-12الزفير C نسبة في التنفس. الدائرة لديها أيضا ميناء مركزي لتسليم الأغذية التي تحتوي على [13 C]-الأوكتانويك الحمض.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم </td><td> COMPANY </td><td> CAT رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> وقال مصدر من تدفق مستمر والهواء الإمداد وكذلك تكوين </td><td> المركزية العرض الجوي في منشأة بحثية </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 130 غرفة أخذ العينات مل يحتوي على مدخل الهواء، منفذ الهواء، والغذاء افتتاح الإدارة البلاستيك أنابيب لتوريد الهواء </td><td> في منزل بني </td><td></td><td></td></tr><tr><td> حمض octanoic </td><td> كامبريدج النظائر مختبرات (اندوفر، MA) </td><td> CLM-293-1 </td><td></td></tr><tr><td> لإعداد وجبة البيض: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دورق صغير </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 50 مل أنبوب من البلاستيك </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بنسن الموقد </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بيضة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملعقة الصيدلي </li></ul></td><td> أي مورد </td><td></td><td> محاولةأن تكون متسقة مع المورد البيض منذ المحتوى الغذائي واستساغة من البيض يمكن أن تؤثر على ابتلاع والمعدة إفراغ وجبة </td></tr><tr><td> محلل ثاني أكسيد الكربون النظير </td><td> لوس جاتوس مؤسسة بحوث (ماونتن فيو، كاليفورنيا) </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

تقييم إفراغ المعدة في الفئران من السكري غير البدناء باستخدام [<sup&gt; 13</sup&gt; c]-الأوكتانويك اختبار التنفس حمض

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

واقتصرت الدراسات المعدة في الفئران عن طريق إفراغ عدم القدرة على تتبع التغيرات إفراغ المعدة في نفس الحيوان منذ أكثر التقنيات استخداما تتطلب قتل الحيوانات والانتعاش بعد الوفاة من 1،2 جبة. يمنع هذا النهج الدراسات الطولية لتحديد التغيرات في إفراغ المعدة مع التقدم في السن وتطور المرض. ويشيع استخدام [13 C]-الأوكتانويك تم تعديل حمض اختبار التنفس للبشر 3 للاستخدام في الفئران الفئران 4-6 و 7 و أظهرنا سابقا أن هذا الاختبار هو موثوق بها وتستجيب للتغيرات في إفراغ المعدة في الاستجابة للأدوية وخلال تطور المرض السكري 8. في هذا الفيديو عرض وشرح المبدأ والتطبيق العملي لهذا الاختبار تم تعديلها. كما هو الحال في الدراسة السابقة، يتم استخدام NOD الفئران LtJ، وهذا نموذج من مرض السكري نوع 1 9. وهناك نسبة من هذه الفئران أعراض تطوير خزل المعدة، ومضاعفات diabetتتميز ES من تأخر إفراغ المعدة دون عرقلة الميكانيكية المعدة 10. هذه الورقة يوضح كيفية تدريب الفئران لاختبار، وكيفية إعداد وجبة الاختبار والحصول على البيانات المعدة 4 ساعات تفريغ وكيفية تحليل البيانات التي تم الحصول عليها. محلل نظائر الكربون المستخدمة في هذه الدراسة مناسبة لأخذ العينات التلقائي للعينات الهواء من الفئران تصل إلى 12 في نفس الوقت. هذه التقنية تسمح للالطولية متابعة إفراغ المعدة من أكبر مجموعات من الفئران المصابين بداء السكري أو غيره من الأمراض طويلة الأمد.

ويرد ممثل تعيين البيانات من ثلاثة الفئران مختلفة في الشكل 2. الرسم البياني الأسود يمثل نقطة البيانات من الماوس العادي مع إفراغ المعدة. ويعرض جزء من 13 C التي يتم استردادها في الهواء الزفير معبرا عنها كنسبة مئوية من الجرعة المعطاة للساعة الواحدة أعرب بوصفها وظيفة من الزمن. منحنى الأزرق هو من الماوس مع تسارع إفراغ المعدة بقيمة 1/2 T من 40 دقيقة ومنحنى الأحمر هو من الماوس مع تأخر إفراغ المعدة بقيمة 1/2 T من 168 دقيقة. على النحو المنصوص عليه في دراسة سابقة ...

تحديد إفراغ المعدة مع الغازية غير [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-الأوكتانويك حمض اختبار التنفس لتتبع خزل المعدة في الفئران الإناث NOD LtJ.

تقييم إفراغ المعدة في الفئران من السكري غير البدناء باستخدام [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-الأوكتانويك اختبار التنفس حمض

Gastric emptying studies in mice have been limited by the inability to follow gastric emptying changes in the same animal since the most commonly used ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو وضع منهجية للقياس الحيوي لتفريغ المعدة في الفئران باستخدام اختبار تنفس حمض 13 carbon Octa NOIC. لقد كانت الفئران والحيوانات الصغيرة الأخرى مفيدة حقاً في مساعدتنا على فهم الفسيولوجيا المرضية للأمراض؛ حيث يدرس مختبرنا خزل المعدة، وإحدى المشكلات المتعلقة بخزل المعدة هي أننا، من أجل دراسة المرض، نحتاج إلى تتبع تفريغ المعدة بمرور الوقت. وقد شكل هذا مشكلة في التقنيات الحالية لأنها تتطلب وضع مادة، سواء كانت سائلة أو صلبة، في معدة الفأر، ثم قتل الفأر بعد فترة زمنية لتقدير الكمية التي غادرت المعدة.كان هدفنا هو تأسيس تقنية غير جراحية لقياس تفريغ المعدة، ولتحقيق ذلك قمنا بتكييف اختبار تنفس الأحماض الأمينية بالكربون 13 المعروف لتمكيننا من استخدامه على الفئران. يتيح لنا ذلك إجراء قياسات متكررة بمرور الوقت ومن ثم ربط النتائج التي نراها بكل من الدراسات النسيجية والفيزيولوجية. تتيح لنا المعدات المستخدمة هنا أتمتة الإجراء، على الرغم من أنه يمكن القيام به يدويًا بالطبع.لا تكمن ميزة الأتمتة في حقيقة أننا نستطيع إجراء العديد من اختبارات تفريغ المعدة بمرور الوقت فحسب، بل في أنه يمكننا القيام بذلك في فئران متعددة في نفس الوقت. ما سنعرضه هو طريقة تتيح لنا التعامل مع ما يصل إلى 12 فأراً في المرة الواحدة. يوضح الرسوم المتحركة التالية إعداد تجربة تفريغ المعدة الخاصة بنا للقياس الحي (in vivo) لتفريغ المعدة.توضع الفئران في أنابيب بلاستيكية شفافة مع تدفق هواء مستمر. وبعد أن تعتاد الفئران على الأنابيب وضبط تدفق الهواء، نقوم بإعطائها وجبة اختبار تتكون من صفار البيض الممزوج بـ Octo NOIC acid المسمى بنظير الكربون 13. وبسبب صيام الفئران وتدريبها، فإنها تأكل وجبة الاختبار بشكل عام.في غضون دقيقتين، سيتم امتصاص حمض OCT NOIC الذي تم إعطاؤه في الاثني عشر، ومن ثم يتم استقلابه في الكبد وإطلاقه وزفيره، مما يؤدي إلى إثراء 13 carbon dioxide في الهواء المحيط، والذي يتم قياسه بعد ذلك بواسطة محلل النظائر الخاص بنا. دعونا نلقي نظرة أكثر تفصيلاً على ما يحدث في جسم الفأر. فبعد تناول الوجبة الاختبارية التي تحتوي على حمض OCT NOIC المسمى بنظير 13 carbon، تدخل الوجبة إلى المعدة.يظل حمض OCT NOIC سليمًا في المعدة. وبعد مروره عبر البواب، يتم امتصاصه بسرعة في الاثني عشر. ويصل المركب الموّسم إلى الكبد عبر الوريد البابي، حيث يتم استقلابه إلى ثاني أكسيد الكربون الموّسم بكربون 13.يتم تحرير ثاني أكسيد الكربون المسمى في الدم الوريدي ويُطرد عبر الزفير. وتعد عملية تفريغ المعدة هي الخطوة المحددة للمعدل في هذه العملية بأكملها. وهذا يعني أن الإفراز الرئوي لـ 13 ثاني أكسيد الكربون يتناسب طردياً مع تفريغ المعدة للوجبة المسمى.تُجمع عينات الهواء في فترات زمنية محددة ويتم تحليلها بواسطة محلل نظائر الكربون. ويمكن استخدام محللات نظائر متنوعة؛ وفي هذه الدراسة، اخترنا استخدام محلل نظائر الكربون LGR 13 من شركة low GATOS research.يؤدي جمع العينات لمدة أربع ساعات إلى الحصول على حركية 13 carbon dioxide قابلة للتكرار، والتي تعكس معدل تفريغ المعدة. مطابقة المنحنى. يتيح استخدام الانحدار غير الخطي حساب أوقات نصف التفريغ.تعد هذه الإجراءات مناسبة لمتابعة الفئران المصابة بأمراض مزمنة. في هذه الدراسة تحديداً، نستخدم إناث الفئران من سلالة N-O-D-L-T-J المصابة بداء السكري غير السمين، والتي تعد نموذجاً لمرض السكري من النوع الأول لدى البشر. وقبل البدء في التحليل، تُترك جميع الفئران للتكيف داخل غرف الاختبار لتقليل مستويات التوتر.بما أن التأخر في تفريغ المعدة يعد مؤشراً مميزاً للإجهاد لدى الفئران، فإن الفئران غير المعتادة تستمر في التحرك لمدة ساعة تقريبًا بعد نقلها إلى الغرفة، وتقوم بعمليات التبرز والتبول. وغالبًا ما تُعتبر الفئران قد تأقلمت بنجاح عندما تستقر بسرعة في بيئتها الجديدة. وعند نقلها إلى الغرفة، وبعد فترة قصيرة من الاستكشاف، تستريح الفئران المعتادة بهدوء داخل الغرفة.في اختبار تفريغ المعدة للفئران التي اعتادت على التجربة، يجب أن تُظهر النتائج تباينًا داخل الفأر الواحد بنسبة أقل من 10%. وبمجرد تدريب الفئران وجاهزيتها لاختبار تفريغ المعدة، يجب إخضاعها للصيام في اليوم السابق للتجربة. يتم صيام الفئران طوال الليل على رف صيام ذو قاعدة من الشبكة المعدنية.لمنع حدوث الرعاف، تأكد من وصول الفئران بحرية إلى مياه الشرب. يجب ألا تزيد فترة صيام الفئران المصابة بالسكري عن 16 ساعة. إن الاتساق في الإجراءات أمر بالغ الأهمية خلال تجربة MCN المعدية.تعد عوامل مثل التعامل مع الفئران بنفس الطريقة، وصيامها في الوقت نفسه يومياً، وفحص مستويات الجلوكوز وإعطاء الإنسولين في الوقت نفسه كل يوم، من الأمور البالغة الأهمية؛ بما في ذلك ارتداء المستخدم لنفس العطر ونفس معطف المختبر يومياً، لأن كل هذه العوامل ستؤدي إلى تغيير بيانات MTN المعدية. وتشمل المواد التي نستخدمها لتحضير وجبة البيض حمض OC للبيض، وكأساً زجاجياً، وأنبوب فالكون، وملعقة مسطحة ذات طرف منحني.ابدأ بوزن خمسة جرامات من صفار البيض في أنبوب فالكون سعة 50 مللي لتر. بعد ذلك، أضف 10 ميكرولتر من حمض okin NOIC بتركيز 2 ميكرولتر لكل جرام إلى أنبوب فالكون الذي يحتوي على البيض، واخلط المزيج بقوة باستخدام الملوق داخل أنبوب الفالكون. ثم يُنقل البيض إلى دورق زجاجي ويُسخن فوق موقد بنزن لمدة دقيقة واحدة حتى يتخثر ويصبح قوامه مناسباً.لصنع كرات صغيرة، يستغرق ذلك عادةً حوالي 30 ثانية. يجب أن تزن كرات صفار البيض 0.2 grams لكل فأر. ومن المهم الحفاظ على ثبات الجرعة التراكمية في جميع الفئران.تتراوح النسبة المقبولة لاستعادة الجرعة التراكمية لدينا بين 55 إلى 100%. ابدأ بتجهيز غرف التفريغ المعدي. استخدم غرفاً وأغطية نظيفة تم تجفيفها بالهواء. كما يجب أن تكون جميع الأنابيب التي تربط الغرفة بالمحلل أو بمصدر إمداد الهواء بثاني أكسيد الكربون خالية من الرطوبة.يمكن أن تتداخل الرطوبة مع الإشارة التي يقرؤها المحلل. قم بتوصيل الغرف بأنابيب الإدخال التي توفر تدفق هواء منقى من الهيدروكربونات. ومن المهم أن يكون هذا الهواء متسقاً دائماً لأن أي تغير في كمية ثاني أكسيد الكربون قد يؤدي إلى تغيير قيمة الخط القاعدي.ثم قم بتوصيل أنابيب المخرج من الحجرات بالجهاز، وأغلق الأنابيب ثم قم بتشغيل تدفق الهواء. ضع كمية صغيرة جداً من الفازلين عند أطراف الأغطية لضمان إغلاقها وإحكام سدها بسهولة وأمان. هذا السد المحكم ضروري لجمع كل ثاني أكسيد الكربون الذي تنتجه الفئران.قم بوزن الفئران باستخدام حامل فئران صغير لتقليل مستويات التوتر. ويتم تحديد وزن الجسم كمقياس لاستمرار تمتعها بصحة جيدة. بعد ذلك، ضع كل فأر في الغرفة المناسبة.من المهم أن يكون الهواء يتدفق إلى الغرف في هذا الوقت. يتم زرع جهاز تتبع في كل فأر. ويتم تتبع البيانات المتعلقة بوزن الفأر، وجلوكوز الدم، والعلاجات باستخدام قاعدة بيانات برمجية تعتمد على هذا الرقم.نستخدم برنامجاً يتيح لنا ربط رقم تعريف الفأر تلقائياً ببيانات التخزين مباشرة. وبالطبع، يمكن القيام بذلك يدوياً أيضاً. لبدء القياس، اترك الفئران تتكيف مع الغرف قبل ضبط مستويات الهواء.بمجرد أن تبدو الفئران هادئة، وهو أمر قد يستغرق بضع دقائق، قم بضبط معدل تدفق الهواء لكل غرفة من غرف الفئران. قد يختلف هذا المعدل من فأر لآخر. عادةً ما يتم ضبط تدفق الهواء في بداية التجربة للتأكد من أن ثاني أكسيد الكربون المزفور يصل إلى مستويات يمكن اكتشافها بواسطة الجهاز المستخدم، ولضمان بقاء هذا المستوى منخفضاً بما يكفي لضمان تجديد الهواء بشكل صحي.نستخدم مستويات أولية من ثاني أكسيد الكربون تتراوح بين 1000 و 1500 جزء في المليون؛ وفي حالة مواجهة صعوبة في إجراء التعديلات، يجب التحقق من وجود تسريبات هوائية. بعد ذلك، كرر العملية لكل غرفة من الغرف وراقب جولة أخرى من القياسات لمعرفة ما إذا كانت التعديلات التي أُجريت على تدفق الهواء قد صححت مستوى ثاني أكسيد الكربون. ومن المهم الحصول على قراءة خط أساس مستقرة قبل البدء في إطعام الفئران.عند تحقيق ذلك، قدّم وجبة البيض للفأر الأول وسجّل الوقت الذي يتلقى فيه كل فأر طعامه. نُجري هذه العملية لمدة أربع ساعات للحصول على قيم كافية لملاءمة منحنى إثراء carbon dioxide بـ 13 لكل فأر. افحص الفئران كل 30 إلى 60 دقيقة للتأكد من أن مستويات carbon dioxide لا تزال آمنة.بالنسبة للفئران، يقوم جهازنا بقياس تركيزات 12 carbon dioxide و13 carbon dioxide والماء كل 25 ثانية. وبناءً على ذلك، يمكن تحليل 12 فأراً في وقت واحد مع فاصل زمني مدته خمس دقائق بين القراءات. وفي حال أخذ العينات يدوياً أو استخدام جهاز آخر، تأكد من الحصول على القراءات بفواصل زمنية تتراوح بين خمس إلى 10 دقائق كحد أدنى.قم بتجهيز صناديق جديدة تحتوي على الطعام قبل نهاية الاختبار حتى تتمكن الفئران من البدء في الأكل فور انتهاء الاختبار. يمثل هذا الرسم البياني نقاط البيانات لفأر يعاني من إفراغ معدي طبيعي، حيث يوضح جزءاً من الكربون 13 الذي تم استرداده في الهواء المزفور، مُعبراً عنه كنسبة مئوية من الجرعة المعطاة لكل ساعة كدالة في الوقت.يتم تمثيل نقاط البيانات بمنحنى يتبع المعادلة التالية. لماذا تعتبر النسبة المئوية للكربون 13 المستعاد في الزفير في الساعة و B و CA ثوابت انحدار؟ يتم حساب T half عن طريق إدخال معاملات هذا المنحنى في دالة غاما العكسية كما تم تحديده في دراسة سابقة في مختبرنا؛ يتراوح وقت نصف تفريغ المعدة الطبيعي لفأر NOD غير المصاب بالسكري يتراوح عمره بين 9 إلى 15 أسبوعاً من 62 إلى 1 31 دقيقة كما هو موضح في المربع الرمادي.يمثل المنحنى الأزرق فأراً يعاني من تسارع في تفريغ المعدة بقيمة T half تبلغ 40 دقيقة، بينما يمثل المنحنى الأحمر فأراً يعاني من تأخر في تفريغ المعدة بقيمة T half تبلغ 168 دقيقة. وفي الختام، يوضح هذا الفيديو كيفية قياس تفريغ المعدة للمواد الصلبة عن طريق اختبار تنفس غير جراحي. وقد أظهرنا في الفئران كيفية تحضير الحيوانات للاختبار، وإعداد الطعام، وجمع البيانات.لقد تم الإبلاغ سابقاً عن طريقة قياس إفراغ المعدة من المواد الصلبة باستخدام إعطاء حمض الأوكتانويك المسمى بالكربون 13 للبشر، وقد قمنا بتكييف هذا البروتوكول لاستخدامه في الفئران. ويوفر لنا هذا البروتوكول طريقة قيمة لقياس إفراغ المعدة بشكل متكرر في الفأر نفسه، مما يسمح بدراسة إفراغ المعدة للبحث في الأمراض طويلة الأمد. وهناك العديد من التطبيقات المستقبلية لهذه الطريقة.على سبيل المثال، اختبار أدوية مختلفة لعلاج خزل المعدة السكري.

assessment-gastric-emptying-non-obese-diabetic-mice-using-13c

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

يقدم هذا الفيديو كيفية إجراء اختبار تحمل الجلوكوز عن طريق الفم على فأرة المختبر.

اختبار تحمل الجلوكوز عن طريق الفم (OGTT): قياس استقلاب الجلوكوز في الفئران

يظل القياس في الجسم الحي لتقلصات العضلات الملساء على طول الجهاز الهضمي لحيوانات المختبر تقنية قوية ، على الرغم من عدم استخدامها بشكل كاف. لا تتوفر مقاييس الإجهاد المرنة ذات العناصر المزدوجة تجاريا وتتطلب تصنيعها. يصف هذا البروتوكول بناء مقاييس سلالة موثوقة وغير مكلفة للزرع الحاد أو المزمن في القوارض.

تصنيع وزرع مصغرة ثنائي العنصر العربونات سلالة لقياس<em&gt; في فيفو</em&gt; الجهاز الهضمي تعهدات في القوارض.

جراحة السمنة هي الطريقة الأكثر فاعلية لتقليل وزن الجسم والمضاعفات الأيضية المميتة (مرض السكري والسمنة وعسر شحميات الدم) المرتبطة بشكل متكرر بالسمنة المرضية. تمثل نماذج الفئران لجراحة السمنة رصيدا فريدا لفك رموز الآليات الجزيئية وراء الآثار المفيدة لهذه العمليات الجراحية على مرض السكري وارتفاع ضغط الدم وعسر شحميات الدم.

تقنيات تكميم المعدة والتعديل رو اون Y تجاوز المعدة في الفئران

ويصف المقال الحالي الجيل وتوصيف الأيضية للفئران تغذية حمية عالية الدهون كنموذج للمقاومة الأنسولين الناجمة عن النظام الغذائي والسمنة. ويضم كذلك بروتوكولات مفصلة لإجراء اختبار تحمل الجلوكوز عن طريق الفم، واختبار تحمل الأنسولين، رصد التعديلات كامل الجسم من الجلوكوز الأيض في الجسم الحي.

دراسة في فيفو أيض الجلوكوز في الفئران تغذية حمية عالية الدهون باستخدام اختبار تحمل الجلوكوز عن طريق الفم (OGTT) واختبار تحمل الأنسولين (ITT)

ارتفاع الإصابة بالسمنة ويزيد من خطر الإصابة بالأمراض الرئوية المزمنة. هناك حاجة لإنشاء الآليات الكامنة والاستراتيجيات الوقائية، الحيوان المعالم نماذج. هنا، نحن نقدم ثلاث طرق (اختبار تحمل الجلوكوز، بليثيسموجرافي الجسم، وتثبيت الرئة) لدراسة تأثير السمنة على النتائج الرئوية في الفئران.

اختبار تحمل الجلوكوز داخل، قياس وظيفة الرئة، والتثبيت في الرئة لدراسة تأثير السمنة والايض البصر على النتائج الرئوية

توضح المقالة الحالية بروتوكولا مفصلا ل الكالوريات 2:1 الصيام المتقطعة لحماية وعلاج ضد السمنة وضعف استقلاب الجلوكوز في البرية من نوع والفئران ob/ob .

تقييم الآثار الايضيه من Isocaloric 2:1 الصيام المتقطع في الفئران

تصف هذه الدراسة القياس المباشر لإنتاج الجلوكوز الكبدي في نموذج فأر متلازمة المبيض المتعدد الكيسات باستخدام متتبع جلوكوز نظائري مستقر عبر الوريد الخلفي في كل من حالات الصيام والجلوكوز الغنية بالجلوكوز جنبا إلى جنب.

تقييم إنتاج الجلوكوز الكبدي في نموذج ماوس متلازمة المبيض المتعدد الكيسات

يقدم هذا البروتوكول طريقتين للحصول على الصور في التصوير بالموجات فوق الصوتية في المعدة. بالإضافة إلى ذلك ، يتم تقديم نصائح لتفسير هذه المعلومات للمساعدة في اتخاذ القرارات الطبية.

نقطة رعاية المعدة بالموجات فوق الصوتية عند البالغين: الحصول على الصور وتفسيرها

يوصف بطارية اختبار (IMAP) لإجراء عملية تقييم متعمق لالسمعية وقدراته المعرفية المساهمة في مهارات الاستماع. انها سريعة لإدارة والصديقة للطفل وخالية من يفند اللغوية. يتم التحكم في توليد الحوافز وإدارة البروتوكول عبر منصة برمجيات (اللوائح - STAR) لضمان إجراءات قابلة للتكرار.

جعل الشعور الاستماع : البطارية اختبار IMAP

الأمونيا هي مستقلب فسيولوجي مهم ذي صلة بمختلف حالات المرض والعافية. كما أنه جزيء يصعب قياسه في التنفس ، مما يتطلب اتخاذ احتياطات خاصة للحصول على نتائج دقيقة. ليست كل العوامل التي تؤثر على الأمونيا معروفة ، ولكن قد يكون التقدم صعبا دون مراعاة هذه العوامل.

بسرعة ودقة مزفور التنفس قياس الأمونيا

تعلم قياس إفراغ المعدة في الفئران باستخدام اختبار التنفس بحمض الأوكتانويك المُعلَّم بـ[13C]، وهي طريقة غير جراحية تتيح متابعة متكررة لدراسة عسر الإفراغ المعدي في نماذج السكري.

تقييم إفراغ المعدة في الفئران من السكري غير البدناء باستخدام [

استكشف المزيد من الفيديوهات