5/6th استئصال الكلية في تركيبة مع حمية عالية الملح والنيتريك أوكسيد تثبيط سينسيز للحث على مرض الكلى المزمن في الفئران لويس

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحفيز مرض الكلى المزمن في جرذان لويس. ويتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق إعطاء حاصرات أكسيد النيتريك، NG Nitro، أو L arginine، أو LNNA لمدة أربعة أسابيع. بعد ذلك، يتم استئصال الكلية اليمنى بالكامل.

بعد ذلك بأسبوع واحد، يتم استئصال ثلثي الكلية اليسرى. وأخيراً، أثناء العلاج بـ LNNA ونظام غذائي عالي الملوحة، يتم تتبع تطور الفشل الكلوي في الجرذ بمرور الوقت. وفي النهاية، يمكن الحصول على نتائج تظهر وجود مرض الكلى المزمن من خلال جمع البول لقياس البروتين، وقياس الهيماتوكريت و UIA في الدم والبلازما و/أو البول، وكذلك قياس ضغط الدم الانقباضي.

يتم تحديد الوظائف الكلوية في نهاية المطاف من خلال تصفية الإينولين ومعدل تصفية البارا أمينوهيبورات، أو تصفية PAH. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على أسئلة رئيسية في مجال أمراض الكلى، مثل فهم أفضل لمراضيات مرض CKD، ويمكن استخدامها لدراسة تأثير التدخلات العلاجية. قبل أربعة أسابيع من إجراء استئصال الكلية الأولي، ابدأ في إعطاء 20 milligrams per liter من مثبط سينثاز أكسيد النيتريك LNNA في مياه شرب الجرذ.

وفقاً لهذا الجدول الزمني. قبل البدء في الإجراء، استخدم كحول 70% لتطهير الطاولة. وللتحضير للجراحة، ابدأ بتعقيم الأدوات التالية: غطاء واحد، ملقط أنسجة "ستودنت" بطول 12 سنتيمتر مع سن واحد أو سنين، ملقط "ستودنت" بنمط قياسي واحد، ملقطين "سيمكين"، مقص "مايو" واحد، مقص "ستودنت" لقزحية العين واحد، وحامل إبر "أولسون هيجر" واحد مع مقص.

بعد ذلك، قم بتجهيز القائمة التالية من المستلزمات: طاولة عمليات مزودة بوسادة تدفئة ومصباح، وأكسجين، وإيزوفلوران، وأنسجة. وجهاز حلاقة، وأدوات جراحية معقمة، وشاش معقم بمقاسات 5×5 و10×10، وكحول بتركيز 70%، ومحلول كلوريد الصوديوم بتركيز 0.9%، ومحقنة سعة 1 مل، وإبر قياس 25، ووسادات جيل فوم، وخيوط جراحة Vicryl بمقاسات 4.0 و5.0، وبوبرينورفين بجرعة 0.03 mg/kg، وقفص نظيف للجرذان بعد الجراحة.

بعد تحريض التخدير في غرفة التحريض باستخدام 4% isoflurane وإعطاء المسكنات الأولية. إذا لزم الأمر، ينقل الجرذ إلى وسادة التدفئة على جانبه الأيسر على الطاولة ويتم تهويته باستخدام قناع أنفي بمزيج من 2% isoflurine ولتر واحد من الأكسجين. يتم حلق الخاصرة للجرذ واستخدام الكحول لتطهير الموقع الجراحي.

بما أن الجراحة تتم في بيئة شبه معقمة، فإننا نقوم بتطهير الجلد الأحمر باستخدام الكحول فقط لضمان تحضير أكثر تعقيماً. يمكن استخدام الفرك بـ Betadine، مع ارتداء غطاء الرأس والقناع، ثم غسل اليدين وتطهيرهما قبل ارتداء القفازات الجراحية المعقمة. بعد ذلك، وباستخدام ملاقط تشريحية ومقصات غير حادة، يتم إجراء شق بطول يتراوح من 1 إلى 1.5 سنتيمتر موازٍ للأضلاع.

بعد ذلك، قم بكشف الكلية اليمنى عن طريق التشريح غير الحاد لعضلات الظهر. وبمجرد ظهور القطب السفلي للكلية، استخدم الملقط غير الحاد الصغير للإمساك بأنسجة الدهون المحيطة بالكلية بعناية. ثم استخدم الملقط لسحب الدهون المحيطة بالكلية برفق، مع الحرص على عدم إزعاج الغدة الكظرية، وإخراج الكلية لفصلها عن الغدة الكظرية.

ضع ملقطاً عند الموقع الإنسي في النسيج الدهني وحرك النسيج برفق إلى الأعلى بين الغدة الكظرية والكلية. ضع الكلية برفق على شاش وقم بإزالة أي دهون وأنسجة ضامة محيطة بها. حدد الشريان والوريد الكلوي وقم بتربيطهما بشكل فضفاض.

ضع رباطاً بعقدة واحدة حول الأوعية لمنع انزلاق الرباط. بعد القطع، حرك العقدة غير المحكمة بعناية على طول الأوعية باتجاه الأبهر، لمسافة 0.5 centimeters تقريباً لإيجاد مساحة بين الكلية والعقدة. بعد ذلك، اربط عقدتين مزدوجتين دون قطع أطراف الرباط.

إذا تم إيقاف التروية بنجاح، فسيتغير لون الكلية فوراً إلى اللون البني. بعد ذلك، يتم قطع الأوعية الكلوية بالقرب من الكلية وإزالتها. ثم يتم سحب النهايات الطويلة للرباط بلطف للتحقق من عدم وجود نزيف في الأوعية الكلوية.

يجب أن تظل الربطة في مكانها على الوعاء الدموي. قص الأطراف الطويلة من الربطة. ستتراجع بقايا الأوعية الكلوية إلى داخل التجويف البطني.

استخدم على الفور خيوط جراحية من نوع Vicryl مقاس 5.0 لإغلاق العضلة الهيكلية في الطرف الخلفي. ثم احقن 0.03 milligrams per kilogram من buprenorphine عن طريق الحقن العضلي. بعد ذلك، استخدم خيوط Vicryl مقاس 4.0 لخياطة الجلد تحت الجلد.

بعد ذلك، جفف الكلية المستأصلة باستخدام ورق ترشيح ثم قم بوزنها. اترك الجرذ ليتعافى في قفص منفرد نظيف، يوضع نصفه على وسادة تدفئة مع توفير الغذاء والماء، وراقبه وفقاً للبروتوكول المذكور في النص. بعد سبعة أيام.

تمهيداً للجراحة الثانية، قم بحساب وزن ما يقرب من ثلثي الكلية اليمنى وجهز قطعاً صغيرة من الإسفنج الهلامي (gel foam). كرر الإجراء الموضح لإخراج الكلية اليسرى وفصل الغدة الكظرية عنها. ضع مقصاً حاداً حول القطب العلوي للكلية اليسرى واستأصل القطب العلوي بضربة واحدة، ثم غطه فوراً بقطعة من الإسفنج الهلامي وطبق ضغطاً خفيفاً باستخدام شاش معقم.

ثم استأصل القطب السفلي للكلية وقم بتغطيته بطريقة مماثلة لمنع التجلط على الجلد. ارفع الكلية واستخدم شاشاً معقماً للحفاظ على ضغط خفيف على كلتا وسادتي إسفنج الجل حتى يتوقف النزيف. إذا استمر النزيف عند وسادة إسفنجية أخرى، ضع ما تبقى من الكلية مع وسادات إسفنج الجل الملتصقة بها داخل البطن ثم أغلق العضلة والجلد.

اتبع نفس الإجراء الموضح سابقاً لمراقبة فترة التعافي وإيواء الجرذ. بعد عملية استئصال الكلية الجزئي، يتبقى حوالي سدس الكتلة الكلوية الإجمالية. يوضح هذا الشكل النسبة المئوية المحسوبة للكتلة الكلوية المستأصلة من الكلية اليمنى مع المتوسط والانحراف المعياري.

في تجاربنا السابقة، حدث تضخم في الكلية اليسرى في الأسبوع الذي تلى استئصال الكلية الأخرى، مما أدى إلى تقدير أقل قليلاً من الكمية المطلوبة من الأنسجة الكلوية التي يجب إزالتها، والتي استندت إلى الوزن المحسوب للكلية اليمنى. ومع ذلك، نظراً لعدم إمكانية تحديد وزن الكلية اليسرى، فإن هذه هي الطريقة الأكثر دقة لإزالة نحو خمسة أسداس من الكتلة الكلوية. ويتم تتبع تطور الفشل الكلوي عن طريق جمع البول لقياس البروتين والكرياتينين، وجمع الدم لقياس يوريا وبلازما الكرياتينين، وقياس ضغط الدم الانقباضي.

يمكن حساب تصفية الكرياتينين، ولكنها تميل إلى تقدير انخفاض معدل الترشيح الكبيبي (GFR) بأقل من قيمته الفعلية بسبب الإفراز الأنبوبي الواسع للكرياتينين في الجرذان، مما يؤكد أهمية الطريقة المعيارية الذهبية لتحديد الوظائف الكلوية عن طريق تصفية الإينولين و PAH، حيث وصف Conners وزملاؤه الإجراء كاملاً. يتم حساب تصفية الإينولين و PAH من خلال تركيزهما في عينة البول، ومعدل تدفق البول، وتركيزهما في البلازما. وبمرور الوقت، يصاب الجرذان الذين يعانون من مرض الكلى المزمن (CKD) بفرط ضغط الدم، وفقر الدم، وبيلة بروتينية، وانخفاض ملحوظ في معدل الترشيح الكبيبي وتدفق بلازما الكلى الفعال.

بعد ستة أسابيع، يكون مرض الكلى المزمن (CKD) قد تطور، وهي نقطة زمنية مناسبة لاختبار تدخلات الإنقاذ مع زيادة الوقت؛ حيث يُلاحظ تقدم قوي في ارتفاع ضغط الدم وبيلة البروتين، بينما يظهر الهيماتوكريت ووظائف الكلى تدهوراً طفيفاً. وتشمل الأعراض الأخرى التي لم يتم التركيز عليها في تجاربنا اضطراب استقلاب فوسفات الكالسيوم والدهون، والعديد من الأعراض الأخرى اعتماداً على سلالة الجرذان. ويمكن أن يختلف تطور مرض الكلى المزمن بشكل ملحوظ في جرذان لويس (Lewis) المستخدمة هنا.

تمت إضافة نظام غذائي عالي الملح ومثبط لأكسيد النيتريك لتحفيز ارتفاع ضغط الدم والخلل الوظيفي البطاني. خطوة صغيرة واحدة. يمكن تنفيذ هذه التقنية في غضون 20 إلى 50 دقيقة تقريبًا إذا تم إجراؤها بشكل صحيح.

بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن تكون لديك دراية جيدة بكيفية تحريض مرض الكلى المزمن في سلالة "loose reds" من خلال إجراء عملية استئصال كلي تدريجي.