شبكية العين مفرزة النموذجي في القوارض بواسطة حقن تحت الشبكية من هيالورونات الصوديوم

الهدف العام من هذا الإجراء هو إحداث انفصالات شبكية تجريبية بارتفاع انفصال مستدام وقابل للتكرار دون حدوث نزيف تحت الشبكية. ويتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق شق الملتحمة الصدغية عند الليمب الخلفي لفصل الملتحمة عن الصلبة. وفي الخطوة الثانية، يتم استخدام طرف إبرة عيار 30 لعمل شق في الصلبة ذاتي الإغلاق وثقب في القرنية.

بعد ذلك، يتم حقن sodium urinate في الحيز تحت الشبكية لفصل الشبكية الحسية العصبية عن ظهارة صباغ الشبكية الكامنة تحتها. وفي الخطوة النهائية، يوضع غراء cyanoacrylate على جرح الصلبة ويُعاد تثبيت الملتحمة في موضعها الأصلي، مما يقلل من خطر تسرب sodium hall urinate. وفي النهاية، يتم فحص قاع العين باستخدام غطاء زجاجي للتأكد من إحداث انفصال شبكي كتلي دون حدوث نزيف تحت الشبكية.

يمكن أن تؤدي الطرق الحالية لتقليل انفصال الشبكية في القوارض إلى تباين في ارتفاع واستمرارية انفصال الشبكية، مما يؤدي إلى قياس معدلات غير متسقة لموت الخلايا. وباستخدام هذه التقنية، يمكن إحداث انفصالات شبكية فقاعية ومستمرة وقابلة للتكرار مع تقليل مخاطر النزيف تحت الشبكي، مما يسمح بتوفير نموذج موثوق لانفصال الشبكية في القوارض. ويعد إحداث انفصال الشبكية التجريبي في القوارض بسيطاً نسبياً من حيث التنفيذ، وله مسار زمني معقول، وهو مشابه جداً للمرض البشري.

لذا، فهو نموذج ممتاز لدراسة آليات موت الخلايا المستقبلة للضوء والعلاجات الرامية إلى منع فقدان البصر. وفي اضطرابات التنكس الشبكي، وبما أن موت الخلايا المستقبلة للضوء يتفاوت في الشبكية المنفصلة، فمن المفيد إحداث انفصال قابل للتكرار دون حدوث نزيف تحت الشبكية. وذلك لأن زيادة مدة انفصال الشبكية أو حدوث نزيف تحت الشبكية يمكن أن يؤثرا على موت الخلايا المستقبلة للضوء.

بعد تخدير فأر يبلغ من العمر ثمانية أسابيع، قم بتقليم شوارب الحيوان، ثم قم بتوسيع حدقة العين باستخدام محلول يحتوي على 5% phenyl rine و 0.5% tropic تحت مجهر جراحي. قص أهداب الحيوان، وطبق تخديرًا موضعيًا باستخدام محلول عيني بتركيز 0.5% propane hydrochloride. ضع الفأر في وضعية جانبية بحيث يكون الأنف مواجهًا للجراح، ثم قم بعمل شق في الملتحمة الصدغية عند الحاجز الخلفي، مع فصل الملتحمة عن الصلبة باستخدام ملقط.

أمسك الملتحمة عند اللم وهو الحافة الملونة للتحكم في العين. ثم أمسك إبرة مقاس 30 gauge بحيث يكون طرفها المائل متجهاً للأعلى. استخدم سن الإبرة لعمل نفق عبر الصلبة، بحيث تخترق الصلبة وصولاً إلى المشيمية دون اختراق الشبكية.

بعد ذلك، مع إمساك الإبرة ذات القياس 30 gauge بشكل موازٍ للقزحية، يتم ثقب القرنية لخفض الضغط داخل العين. والآن، مع توجيه الشطب إلى الأسفل، يتم إدخال إبرة ذات قياس 33 gauge متصلة بمحقنة Hamilton سعة 10 µL في الحيز تحت الشبكي، ثم حقن 3.5 µL من sodium urinate.

سيؤدي ذلك إلى فصل حوالي 50% من الشبكية الحسية العصبية عن ظهارة صباغ الشبكية الكامنة. باستخدام الملقط، اضغط على القرنية حول ثقب القرنية للسماح للخلاط المائي بالتدفق من خلال ثقب القرنية، ثم استخدم رمحاً سليلوزياً جراحياً للتأكد من عدم وجود تسريب من جرح الصلبة لتقليل خطر تسريب يورينات الصوديوم. ضع غراء السيانوأكريليت على جرح الصلبة ثم أعد تثبيت الملتحمة في وضعها الأصلي.

استخدم غطاءً زجاجياً لفحص قاع العين والتأكد من إحداث انفصال شبكي كروي دون حدوث نزيف تحت الشبكية. وأخيراً، ضع مرهمًا مضادًا حيويًا في العين لتقليل خطر الإصابة بالعدوى. حافظ على الفأر فوق وسادة تدفئة لمنع انخفاض درجة حرارة الجسم.

بعد انخفاض ضغط الدم، يُعاد الحيوان إلى قفصه بعد إفاقته من التخدير. ولتقييم استمرارية انفصال الشبكية الناتج عن هذا البروتوكول، تم إعداد مقاطع تجميدية في الأيام الثالث والسابع والرابع عشر بعد تحفيز الانفصال.

تم استخدام ست عيون لكل نقطة زمنية، واستُخدم صبغ الهيماتوكيسلين والإيوزين لتصوير المقاطع التي أظهر كل منها كتلة من انفصال الشبكية تقترب من العدسة.

لم تظهر أي من العيون أي علامات على العدوى أو إصابة العدسة. وبمجرد إتقان هذه الجراحة، يمكن إجراؤها في حوالي خمس دقائق. وأثناء محاولة القيام بهذا الإجراء، من المهم تنفيذ كل خطوة برفق لتجنب التسبب في تسرب الصوديوم، أو حدوث نزيف تحت الشبكية نتيجة الإضاءة العالية، أو إصابة العدسة، حيث يمكن أن تؤدي كل هذه العوامل إلى موت الخلايا المستقبلة في الشبكية المنفصلة. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن تكتسب فهماً جيداً لكيفية إحداث انفصال شبكية تجريبي في القوارض مع تحقيق ارتفاع انفصال مستدام وقابل للتكرار دون حدوث نزيف تحت الشبكية.