Name: التحليل الكمي وتوصيف آفات تصلب الشرايين في الجيوب الأنفية الأبهرية الفئرانية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-12-07T22:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 43 s
Description: تعلم كيفية تحليل وتوصيف آفات تصلب الشرايين في الجيوب الأبهرية للفئران باستخدام تقنيات التقطيع الدقيقة والصبغة النسيجية والمناعية. تساعد هذه الطريقة الباحثين على فهم أمراض القلب والأوعية الدموية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

تم تمويل هذا البحث من خلال منحة تشغيلية من المعاهد الكندية للعلوم الصحية والجمعية الكندية للسكري. يتم دعم DEV من خلال منحة دراسية من اللجنة الوطنية للأبحاث العلمية والتقنية (CONICYT ، تشيلي).

<ol><li>Zadelaar, S., Kleemann, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+for+atherosclerosis+and+pharmaceutical+modifiers%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb.+Vasc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse models for atherosclerosis and pharmaceutical modifiers.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 27 (8), 1706-1721 (2007).</li>
<li>Daugherty, A., Rateri, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+experimental+designs+for+atherosclerosis+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Development of experimental designs for atherosclerosis studies in mice.</a> Methods. 36, 129-138 (2005).</li>
<li>Getz, G. S., Reardon, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diet+and+murine+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb.+Vasc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Diet and murine atherosclerosis.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 26 (2), 242-249 (2006).</li>
<li>Zhang, S. H., Reddick, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+hypercholesterolemia+and+arterial+lesions+in+mice+lacking+apolipoprotein+E%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Spontaneous hypercholesterolemia and arterial lesions in mice lacking apolipoprotein E.</a> Science. 258 (5081), 468-471 (1992).</li>
<li>Ishibashi, S., Goldstein, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Massive+xanthomatosis+and+atherosclerosis+in+cholesterol-fed+low+density+lipoprotein+receptor-negative+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Massive xanthomatosis and atherosclerosis in cholesterol-fed low density lipoprotein receptor-negative mice.</a> J. Clin. Invest. 93 (5), 1885-1893 (1994).</li>
<li>Kunjathoor, V. V., Wilson, D. L., LeBoeuf, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+atherosclerosis+in+streptozotocin-induced+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Increased atherosclerosis in streptozotocin-induced diabetic mice.</a> J. Clin. Invest. 97 (7), 1767-1773 (1996).</li>
<li>Hartvigsen, K., Binder, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+diet-induced+hypercholesterolemic+murine+model+to+study+atherogenesis+without+obesity+and+metabolic+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb.+Vasc.+Biol%22%5BJournal%5D)">A diet-induced hypercholesterolemic murine model to study atherogenesis without obesity and metabolic syndrome.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 27 (4), 878-885 (2007).</li>
<li>King, V. L., Hatch, N. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+obesity+with+accelerated+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Obesity%22%5BJournal%5D)">A murine model of obesity with accelerated atherosclerosis.</a> Obesity. 18 (1), 35-41 (2004).</li>
<li>Taylor Weiss, D. &, R, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deoxycorticosterone+acetate+salt+hypertension+in+apolipoprotein+E-%2F-+mice+results+in+accelerated+atherosclerosis%3A+the+role+of+angiotensin+II%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Deoxycorticosterone acetate salt hypertension in apolipoprotein E-/- mice results in accelerated atherosclerosis: the role of angiotensin II.</a> Hypertension. 51 (2), 218-224 (2008).</li>
<li>Gairola, C. G., Drawdy, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sidestream+cigarette+smoke+accelerates+atherogenesis+in+apolipoprotein+E-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Sidestream cigarette smoke accelerates atherogenesis in apolipoprotein E-/- mice.</a> Atherosclerosis. 156 (1), 49-55 (2001).</li>
<li>Pynn, M., Schäfer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise+training+reduces+neointimal+growth+and+stabilizes+vascular+lesions+developing+after+injury+in+apolipoprotein+e-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Exercise training reduces neointimal growth and stabilizes vascular lesions developing after injury in apolipoprotein e-deficient mice.</a> Circulation. 109 (3), 386-392 (2004).</li>
<li>Nakashima, Y., Plump, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ApoE-deficient+mice+develop+lesions+of+all+phases+of+atherosclerosis+throughout+the+arterial+tree%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb%22%5BJournal%5D)">ApoE-deficient mice develop lesions of all phases of atherosclerosis throughout the arterial tree.</a> Arterioscler. Thromb. 14 (1), 133-140 (1994).</li>
<li>Reddick, R. L., Zhang, S. H., Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atherosclerosis+in+mice+lacking+apo+E.+Evaluation+of+lesional+development+and+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb%22%5BJournal%5D)">Atherosclerosis in mice lacking apo E. Evaluation of lesional development and progression.</a> Arterioscler. Thromb. 14 (1), 141-147 (1994).</li>
<li>Tangirala, R. K., Rubin, E. M., Palinski, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitation+of+atherosclerosis+in+murine+models%3A+correlation+between+lesions+in+the+aortic+origin+and+in+the+entire+aorta%2C+and+differences+in+the+extent+of+lesions+between+sexes+in+LDL+receptor-deficient+and+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Quantitation of atherosclerosis in murine models: correlation between lesions in the aortic origin and in the entire aorta, and differences in the extent of lesions between sexes in LDL receptor-deficient and apolipoprotein E-deficient mice.</a> J. Lipid Res. 36 (11), 2320-2328 (1995).</li>
<li>Paigen, B., Morrow, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+atherosclerotic+lesions+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of atherosclerotic lesions in mice.</a> Atherosclerosis. 68 (3), 231-240 (1987).</li>
<li>Baglione, J., Smith, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Assay+for+Mouse+Atherosclerosis+in+the+Aortic+Root%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Quantitative Assay for Mouse Atherosclerosis in the Aortic Root.</a> Methods in Molecular Medicine. 129, (2006).</li>
<li>Lee, T. Y., Muschal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiostatin+regulates+the+expression+of+antiangiogenic+and+proapoptotic+pathways+via+targeted+inhibition+of+mitochondrial+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Angiostatin regulates the expression of antiangiogenic and proapoptotic pathways via targeted inhibition of mitochondrial proteins.</a> Blood. 114 (9), 1987-1998 (2009).</li>
<li>Ballon, G., Chen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi+sarcoma+herpesvirus+%28KSHV%29+vFLIP+oncoprotein+induces+B+cell+transdifferentiation+and+tumorigenesis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Kaposi sarcoma herpesvirus (KSHV) vFLIP oncoprotein induces B cell transdifferentiation and tumorigenesis in mice.</a> J. Clin. Invest. 121 (3), 1141-1153 (2011).</li>
<li>Khallou-Laschet, J., Varthaman, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+plasticity+in+experimental+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Macrophage plasticity in experimental atherosclerosis.</a> PLoS One. 5 (1), e8852(2010).</li>
<li>Rotzius, P., Thams, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+infiltration+of+neutrophils+in+lesion+shoulders+in+ApoE-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Distinct infiltration of neutrophils in lesion shoulders in ApoE-/- mice.</a> Am. J. Pathol. 177 (1), 493-500 (2010).</li>
<li>Kanellakis, P., Agrotis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-mobility+group+box+protein+1+neutralization+reduces+development+of+diet-induced+atherosclerosis+in+apolipoprotein+e-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb.+Vasc.+Biol%22%5BJournal%5D)">High-mobility group box protein 1 neutralization reduces development of diet-induced atherosclerosis in apolipoprotein e-deficient mice.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 31 (2), 313-319 (2011).</li>
<li>Schwartz, C. J., Mitchell, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observations+on+localization+of+arterial+plaques%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Observations on localization of arterial plaques.</a> Circ. Res. 11, 63-73 (1962).</li>
<li>Won, D., Zhu, S. N., Chen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relative+reduction+of+endothelial+nitric-oxide+synthase+expression+and+transcription+in+atherosclerosis-prone+regions+of+the+mouse+aorta+and+in+an+in+vitro+model+of+disturbed+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Relative reduction of endothelial nitric-oxide synthase expression and transcription in atherosclerosis-prone regions of the mouse aorta and in an in vitro model of disturbed flow.</a> Am. J. Pathol. 171 (5), 1691-1704 (2007).</li>
<li>Rosenfeld, M. E., Polinsky, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+atherosclerotic+lesions+in+the+innominate+artery+of+the+ApoE+knockout+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb.+Vasc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Advanced atherosclerotic lesions in the innominate artery of the ApoE knockout mouse.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 20 (12), 2587-2592 (2000).</li>
<li>McAteer, M. A., Schneider, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+and+3Dreconstruction+of+atherosclerotic+plaque+components+in+apolipoprotein+E+knockout+mice+using+ex+vivo+high-resolution+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb.+Vasc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Quantification and 3Dreconstruction of atherosclerotic plaque components in apolipoprotein E knockout mice using ex vivo high-resolution MRI.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 24 (12), 2384-2390 (2004).</li>
<li>Martinez, H. G., Prajapati, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Images+in+cardiovascular+medicine%3A+Microscopiccomputedtomography-based+virtual+histology+for+visualization+and+morphometry+of+atherosclerosis+in+diabetic+apolipoprotein+e+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Images in cardiovascular medicine: Microscopiccomputedtomography-based virtual histology for visualization and morphometry of atherosclerosis in diabetic apolipoprotein e mutant mice.</a> Circulation. 120 (9), 821-822 (2009).</li>
<li>Kirkby, N. S., Low, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+3-dimensional+imaging+of+murine+neointimal+and+atherosclerotic+lesions+by+optical+projection+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Quantitative 3-dimensional imaging of murine neointimal and atherosclerotic lesions by optical projection tomography.</a> PLoS One. 6 (2), e16906(2011).</li>
</ol>

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

تصلب الشرايين هو مرض مزمن معقد يصيب الشرايين العضلية الكبيرة وهو سبب رئيسي لاحتشاء عضلة القلب والسكتة الدماغية. يتضمن تطور المرض تفاعل العديد من أنواع الخلايا المختلفة داخل جدار الشريان ، مع خلايا الدم المنتشرة وجزيئات البروتين الدهني والعوامل الأخرى المنقولة بالدم والتي بدأنا للتو في فهمها. جاء الكثير من معرفتنا الحالية فيما يتعلق بتطور وتطور تصلب الشرايين من الدراسات التي أجريت في أنظمة نماذج الفئران المعرضة لتصلب الشرايين المصممة خصيصا.
من المهم أن تتذكر أن نماذج الفئران لتصلب الشرايين لها ...

في العقدين الماضيين ، أدى تطوير واستخدام نماذج الفئران المعرضة لتصلب الشرايين من خلال التلاعب الغذائي و / أو الجيني إلى زيادة فهمنا بشكل كبير للآليات الجزيئية والخلوية المشاركة في تطور آفة تصلب الشرايين1-3. يأتي قدر كبير من معرفتنا وفهمنا لتكوين الشرايين من الدراسات التي أجريت في صميم البروتين الشحمي (Apo) -E ناقص 4 الفئران ، حيث تتطور آفات تصلب الشرايين تلقائيا ومستقبلات البروتين الدهني منخفض الكثافة (LDLR) - نقص5 الفئران ، حيث يتم تحفيز تصلب الشرايين على اتباع النظام الغذائي. من المزايا المهمة لهذه النماذج أنها تسمح بدراسة أعداد كبيرة نسبيا من المحددة وراثيا في ظل ظروف غذائية وبيئية خاضعة للرقابة. بالإضافة إلى ذلك ، يبدو أن آفات تصلب الشرايين المتقدمة التي تتطور في بعض سلالات الفئران هذه تشبه إلى حد بعيد تلك التي لوحظت في البشر ، حيث تحتوي على نوى نخرية مملوءة بالدهون وقبعات ليفية. يتطور تصلب الشرايين بسرعة في نماذج الفئران هذه مما يجعل من الممكن جدا دراسة تطور الآفة ، من الخط الدهني إلى البلاك المتقدم ، على مدى أسابيع. علاوة على ذلك ، ثبت أن عوامل الخطر المعروفة لأمراض القلب والأوعية الدموية لدى البشر ، بما في ذلك مرض السكري6 ، وعسر شحمياتالدم 7 ، والسمنة8 ، وارتفاع ضغط الدم9 ، ودخان السجائر10 ، والبيئة المستقرة11 ، تسرع تطور الآفة.
 في معظم نماذج الفئران المعرضة لتصلب الشرايين ، إن لم يكن جميعها ، يمكن اكتشاف تطور الآفة أولا في الجيوب الأبهري. يعتمد وقت البداية على سلالة الفأر والنظام الغذائي. مع زيادة حجم الآفات ، فإنها تميل إلى النمو في الشريان الأورطي الصاعد. في الفئران ApoE- /- و LDLR-/- ، يمكن الكشف عن تطور الآفة اللاحق في تشعبات الأبهر في قوس الأبهر ، في الشريان الأورطي الهابط وفي الشرايين الكبيرة الأخرى12-14. أنشأت الدكتورة بيفرلي بايجن وزملاؤها ، بالإضافة إلى تطوير بعض النماذج المبكرة لتصلب الشرايين الناجم عن النظام الغذائي ، اختبارا لقياس آفات تصلب الشرايين في الجيوب الأنفية الأبهرية التي أصبحت معيارا لقياس الآفة في نماذجالفئران 15. على مر السنين تم تحسين هذه التقنية ووصفها بالتفصيل16. نقدم هنا نسخة معدلة من "طريقة Paigen" لقياس وتوصيف آفات تصلب الشرايين في الفأر. يسهل تحليل المقاطع العرضية الأبهرية التسلسلية من منطقة وعائية معينة وفي اتجاه محدد وثابت جمع البيانات بدقة ويسمح بالكشف الدقيق عن الاختلافات في تطور الآفة في مجموعات العلاج المختلفة. تعتمد الأساليب المعروضة هنا على التقنيات السابقة. على وجه التحديد ، نصف كيف يمكن توصيف الآفة من حيث المساحة والحجم والمحتوى النخر والخلوي من خلال فحص الأقسام التسلسلية باستخدام مزيج من الكيمياء النسيجية والكيمياء المناعية.

<table><tbody><tr><td>الفئران التي تعاني من نقص LDLR&nbsp;( D2.129S7 (B6) -Ldlrtm1Her / J)</td> <td>مخزون مختبر جاكسون</td><td># 002207</td><td></td></tr><tr><td>قوالب الأنسجة Formalin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT5011</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Ted Pella Inc</td><td>27195</td><td></td></tr><tr><td>Paraffin</td><td>Paramat</td><td>19286-10</td><td></td></tr><tr><td>الشرائح المطلية</td><td>فيشر</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>حاويات المذيبات</td><td>Tissue Tek II</td><td>4457</td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Leica</td><td>RM22S5</td><td></td></tr><tr><td>حمام مائي</td><td>VWR</td><td>80086-982</td><td></td></tr><tr><td>مجهر</td><td>أوليمبوس</td><td>BX41TF</td><td></td></tr><tr><td>كاميرا</td><td>أوليمبوس</td><td>DP72</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>المعاهد الوطنية للصحة</td><td>www.rsbweb.nih.gov/ij/</td><td></td></tr> <tr><td>معالج</td><td>ساكورا فينيتيك</td><td>VIP6-A1</td><td></td></tr><tr><td>أشرطة المعالجة</td><td>VWR</td><td>18000-134</td><td></td></tr><tr><td>Preassure طباخ</td><td>Nordic Ware</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Coverslip</td><td>Fisher</td><td>12-545-M</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3813</td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>شفرة Thermo Scientific</td><td>30-518-35</td><td></td></tr><tr><td>مضاد للتلاشي تصاعد متوسط</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F-4680</td><td></td></tr><tr><td>تركيب الزيلين متوسط&nbsp;</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>44581</td><td></td></tr><tr><td>التركيب المائي متوسط</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>I1161</td><td></td></tr><tr><td>Mac-3 والجسم</td><td>BD Pharmingen</td><td>553322</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>D9542</td><td></td></tr><tr><td>F4 / 80 الجسم المضاد</td><td>Abcam</td><td>Ab6640</td><td></td></tr><tr><td>ألفا أكتين الأجسام المضادة</td><td>سانتا كروز التكنولوجيا الحيوية</td><td>SC-32251</td><td></td></tr><tr><td>ماير&rsquo; s هيماتوكسيلين</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>E4382</td><td></td></tr><tr><td>إيوسين Y</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>MHS16</td><td></td></tr><tr><td>DAB (3،3 '-ديامينوبنزيدين)</td><td>داكو</td><td>K3468</td><td></td></tr></tbody></table>

التحليل الكمي وتوصيف آفات تصلب الشرايين في الجيوب الأنفية الأبهرية الفئرانية

Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus

تصلب الشرايين هو مرض يصيب الشرايين الكبيرة وسبب رئيسي أساسي لاحتشاء عضلة القلب والسكتة الدماغية. تم تطوير العديد من نماذج الفئران المختلفة لتسهيل دراسة الفيزيولوجيا المرضية الجزيئية والخلوية لهذا المرض. في هذه المخطوطة ، نصف تقنيات محددة لقياس وتوصيف آفات تصلب الشرايين في الجيوب الأنفية الأبهرية الفئرانية والشريان الأورطي الصاعد. تتمثل ميزة هذا الإجراء في أنه يوفر قياسا دقيقا لمساحة المقطع العرضي والحجم الكلي للآفة ، والذي يمكن استخدامه لمقارنة تطور تصلب الشرايين عبر مجموعات العلاج المختلفة. هذا ممكن من خلال استخدام وريقات الصمام كمعلم تشريحي ، جنبا إلى جنب مع الضبط الدقيق لزاوية التقسيم. نصف أيضا طرق التلوين الأساسية التي يمكن استخدامها للبدء في توصيف تطور تصلب الشرايين. يمكن تعديلها بشكل أكبر للتحقيق في المستضدات ذات الأهمية الخاصة للباحث. التقنيات الموصوفة قابلة للتطبيق بشكل عام على مجموعة متنوعة من النماذج الغذائية الحالية والمنشأة وراثيا لتكوين الشرايين.

تم إطعام فئران LDLR-/- بعمر خمسة أسابيع نظاماً غذائياً قياسياً أو نظاماً غذائياً عالي الدهون لمدة عشرة أسابيع. تم تضحية الفئران وإجراء تروية لها باستخدام الفورمالين كما هو موضح أعلاه. تم تحضير مقاطع عرضية للجيب الأبهر وصبغها بالهيماتوكسيلين والإيوزين لتحديد مساحة وحجم الآفة (الشكل 4). عندما يتم إطعام الفئران نظاماً غذائياً قياسياً، يكون تطور تصلب الشرايين محدوداً جداً وقد لا يكون قابلاً للكشف في عمر 15 أسبوعاً. ويؤدي النظام الغذائي عالي الدهون إلى تسريع عملية تكوين العصيدة بشكل ملحوظ في هذا النموذج، ويح...

نصف إجراءات تحديد وتوصيف آفات تصلب الشرايين في نماذج الفئران باستخدام التقسيم الدقيق للجيب الأبهري والشريان الأورطي الصاعد جنبا إلى جنب مع التحليل الكيميائي النسيجي والكيميائي المناعي.

Atherosclerosis is a disease of the large arteries and a major underlying cause of myocardial infarction and stroke. Several different mouse models have ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو توصيف وتحديد كمية الآفات التصلبية في الجيب الأبهري لـ MI. ويتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق تشريح قلب مستخرج لفصل الجزء القمي وتحديد موقع الجيب الأبهري. بعد ذلك، يتم تحضير كتل البارافين باستخدام الجزء القمي المعالج من القلب.بعد ذلك، يتم تقطيع الجيب الأورطي وتثبيته على شرائح. وأخيراً، تُصبغ المقاطع النسيجية. وفي النهاية، يمكن الحصول على نتائج توضح أحجاماً وتركيبات مختلفة من الآفات العصيدية من خلال التحليل الكيميائي النسيجي والتحليل المناعي النسيجي الكيميائي.سيقوم دانيال فينغا بنال، وهو طالب دراسات عليا من مختبري، بشرح الإجراء. لقد وافق مجلس أخلاقيات البحوث الحيوانية بجامعة McMaster مسبقاً على جميع الإجراءات الموضحة هنا؛ فبعد تخدير فأر من سلالة LDLR double negative واستخلاص الدم منه، يتم القتل الرحيم وتثبيته قبل عزل القلب وفقاً للبروتوكول النصي، ثم استخدم مشرطاً لإجراء قطع عرضي في القلب بشكل عمودي على الأبهر الصاعد. ضع الجزء القمي أو العلوي من القلب في كاسيت تضمين واغمره في Formin.بعد ذلك، ضع الكاسيت في جهاز معالجة الأنسجة واتركه للمعالجة طوال الليل. وباستخدام البرنامج الموضح في البروتوكول النصي لقوالب علم الأنسجة، قم بصهر شمع البارافين طوال الليل عند 62 degrees Celsius. ضع كل نسيج تمت معالجته في قالب أنسجة عميق، مع التأكد من أن واجهة القلب تلامس قاعدة القالب، ثم صب شمع البارافين المصهور لملء القالب تماماً.استخدم كاسيت بلاستيكيًا مُصنفًا لتغطية القالب. بعد تبريد القوالب على الثلج أو على سطح بارد، افصل الكتلة عن القالب لتقطيع الشريان الأورطي. ضع الكتلة في حامل العينات بجهاز الميكروتوم بحيث يمكن تقطيعها من الداخل باتجاه الجزء العلوي من القلب.اضبط الميكروتوم على 10 microns وقم بعمل قطاعات للقلب. اجمع القطاعات على شريحة زجاجية وافحصها تحت المجهر الضوئي لتحديد الموضع والاتجاه. يجب أن يظهر الجيب على شكل ثلاث قواعد صمامية ثنائية الأجزاء مع وريقات متصلة بها.عندما تصبح صمام واحد أو صمامان من الجيب الأبهري واضحين، يتم ضبط زاوية القالب حسب الضرورة. وعند الوصول إلى الصمامات، يُضبط الميكروتوم للقطع بسمك 4 إلى 5 ميكرون. يتم تثبيت أول 10 مقاطع، كل منها في الجزء العلوي من شرائح زجاجية فردية، ثم يتم تثبيت كل مجموعة تالية من 10 مقاطع في الموضع التالي.على الشرائح. استمر في جمع المقاطع حتى لا يُلاحظ وجود أي آفة تصلبية شريانية. ولصبغ المقاطع بـ hematin و eoin لتصور الآفات، ضع الشرائح في مجفف هوائي لمدة ثماني دقائق.بعد ذلك، يتم إزالة البارافين من المقاطع باستخدام الزيلين لغسلها أربع مرات لمدة ثلاث دقائق في كل مرة. تُغسل الشرائح في ethanol بتركيز 100% ثلاث مرات لمدة ثلاث دقائق في كل مرة، ثم في ethanol بتركيز 70% وethanol بتركيز 50%.ثلاث مرات لمدة ثلاث دقائق في كل مرة. استخدم الماء المقطر لشطف الشرائح، ثم اغمرها في صبغة hematin الخاصة بـ MA لمدة 15 دقيقة.اغسل العينة بالماء الجاري من الصنبور لمدة خمس دقائق. ثم اغسلها بالماء المقطر لمدة خمس دقائق بعد الغمر في صبغة eoin Y لمدة تتراوح من دقيقة إلى خمس دقائق.يُغسل بالماء المقطر ثلاث مرات لمدة خمس دقائق في كل مرة. ثم يُغسل بـ 50% ethanol مرتين لمدة دقيقتين في كل مرة. بعد ذلك، يُغسل بـ 70% ethanol ثلاث مرات لمدة دقيقتين في كل غسلة، ثم بـ 100% ethanol.ثلاث مرات لمدة دقيقتين في كل مرة. بعد ذلك، اغسل القطاعات بالزايلين أربع مرات لمدة دقيقتين في كل مرة. استخدم وسط تثبيت يعتمد على الزايلين لتثبيت القطاعات والتقاط الصور باستخدام المجهر الضوئي.استخدم برنامج التصوير لتحديد وقياس الآفات، والتي يمكن تحديدها على مسافات محددة من الجيب الأبهر بفواصل تتراوح من 40 إلى 50 ميكرون، وذلك بناءً على سمك المقاطع؛ يرجى الرجوع إلى البروتوكول النصي الخاص بالتلوين الكيميائي النسيجي المناعي والتلوين المناعي الفلوري. تم تغذية فئران LDLR. Positive بعمر خمسة أسابيع بنظام غذائي قياسي أو نظام غذائي عالي الدهون لمدة 10 أسابيع قبل تثبيت قلوبها وعزلها وتقطيعها كما هو موضح هنا.عندما تتغذى الفئران على نظام غذائي قياسي من العلف، يكون تطور تصلب الشرايين محدوداً للغاية وقد لا يكون قابلاً للكشف في عمر 15 أسبوعاً. ويؤدي النظام الغذائي عالي الدهون إلى تسريع عملية تكوين التصلب بشكل كبير في هذا النموذج، كما يحفز تكوين آفات متقدمة وكبيرة تحتوي على نوى غير خلوية مزمنة وأغطية ليفية. ويمكن إجراء توصيف إضافي لآفات تصلب الشرايين من خلال التلوين للكشف عن وجود أنواع محددة من الخلايا والعوامل التي تحدد مراحل تطور الآفة.يمثل تسلل الخلايا الوحيدة إلى الغلالة الباطنة أحد أبكر أحداث تكوّن العصيدة في الغلالة الباطنة. تتمايز الخلايا الوحيدة إلى بلعميات تلتهم الحطام الخلوي والدهون. وتؤدي البلعميات الممتلئة بالدهون، والمعروفة باسم الخلايا الرغوية، إلى تكوين خط دهني في جدار الشريان كما يظهر هنا.يمكن الكشف عن الخلايا الرغوية البلعمية في جميع مراحل تطور الآفة عن طريق التلوين باستخدام أجسام مضادة ضد علامات بلعمية محددة مثل F four 80 و MAC three. تقتصر خلايا العضلات الملساء الوعائية أو v SMCs على الطبقة المتوسطة للشريان السليم. ويتم تحفيز vSCs على الهجرة والتكاثر في الطبقة الباطنة أثناء تطور الآفة المتقدمة.كما يمكن ملاحظته في هذا اللوح، يمكن التعرف على خلايا العضلات الملساء في الأوعية الدموية (V SMCs) عن طريق الصبغ باستخدام جسم مضاد ضد alpha actin بعد تحضيرها. وقد مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال أمراض القلب والأوعية الدموية لاستكشاف تطور وتفاقم الآفات العصيدية في القوارض.

quantitative-analysis-characterization-atherosclerotic-lesions-murine

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

التحليل الكمي وتحديد خصائص الآفات تصلب الشرايين في تجويف الأبهر للفأر

يعتمد تحليل  Ex vivo للآفات الشريانية من النماذج الحيوانية لأمراض القلب والأوعية الدموية بشكل كلاسيكي على التقنيات النسيجية والكيميائية المناعية. توفر هذه قياسات ثنائية الأبعاد في آفات ثلاثية الأبعاد. تصف هذه المخطوطة توليد الآفات الشريانية للتحليل الكمي في 3 أبعاد باستخدام التصوير المقطعي البصري.

جيل والكميات 3-الأبعاد من الآفات الشرياني في الفئران عن طريق الإسقاط الضوئي المقطعي

هذا الفيديو يبين لنا نموذجين للتنمية وحة باطنة في الشرايين الفئران وتشدد على الاختلافات في تضخم عضلية للبطانة الشريانية وتصلب الشرايين.

حمل عضلية للبطانة الشريانية الحميد مقابل تصلب الشرايين في فئران: مقدمة من اثنين من نماذج صالحة

توضح هذه المقالة منهجية مفصلة لاستخدام مطاط سيليكون راديوباك تعتمد على الرصاص إلى نتخلل المفرج مورين للقياس الكمي قطر الابهر في طراز ماوس الابهر وتشريح.

التحليل الكمي للأشعة المقطعية الصغرى من أورتوباثي في نموذج ماوس β-أمينوبروبيونيتريلي-المستحث الابهر والتشريح

يصف لنا وضع بروتوكول للحث على تصلب الشرايين في جذر الابهر الذين--/-- الفئران التي تتغذى على نظام غذائي atherogenic، من خلال إصدار مستمر من الدوستيرون. ويرد أيضا أساليب لتحديد خصائص تكوين اللوحة.

تحريض لويحات تصلب الشرايين من خلال تنشيط مستقبلات مينيرالوكورتيكويد في الفئران الابوليبوبروتين ه التي تفتقر إلى

ونحن نقترح بروتوكول موحد لوصف تكوين الخلوية أواخر المرحلة مورين الآفات تصلب الشرايين بما في ذلك أساليب منهجية لتشريح الحيوان وتضمين الأنسجة، وتمزيقها، وتلطيخ، وتحليل الشرايين براتشيوسيفاليك من العضلات الملساء أثيروبروني خلية تتبع النسب الفئران.

التحليل الكمي لتكوينها الخلوي في الآفات تصلب الشرايين المتقدمة للعضلات الملساء خلية تتبع النسب الفئران

نماذج مورين من تصلب الشرايين هي أدوات مفيدة للتحقيق في المسارات المسببة للأمراض على المستوى الجزيئي، ولكن تتطلب قياس اقاصي موحد لتطوير الآفات. يصف هذا البروتوكول طريقة محسنة لتحديد حجم الآفة في الأوعية الشريانية الرئيسية بما في ذلك الجذر الأبهري والقوس الأبهري والشريان البشعي.

القياس الكمي لتصلب الشرايين في الفئران

يوفر هذا البروتوكول إجراء خطوة بخطوة لتحليل عبء تصلب الشرايين في الفئران. يمكن للمحققين استخدام هذا البروتوكول لمقارنة وفرة وموقع وحجم آفات تصلب الشرايين في الحيوانات المختلفة.

تصوير وتحليل آفات الشريان الأورطي الكامل الملطخة بالزيت الأحمر في نموذج فأر فرط شحميات الدم تمدد الأوعية الدموية

هنا ، نقدم بروتوكولات محسنة لإزالة الأنسجة لتصوير الشريان الأورطي الفأري في ثلاثة أبعاد (3D). نحدد أحدث الإجراءات للتلوين المناعي والتطهير البصري والتصوير بقصد تحديد القرب التشريحي للجهاز العصبي المحيطي مع لويحات تصلب الشرايين والعرض التراكمي في تصلب الشرايين.

التصوير ثلاثي الأبعاد للأنسجة الأبهرية في تصلب الشرايين

يوفر هذا البروتوكول منهجية شاملة للتحليل الكمي لويحات تصلب الشرايين لتسهيل المزيد من البحث المتعمق في آليات وتطور تصلب الشرايين.

عزل وتحليل قوس الأبهر وآفات الجذر في نموذج فأر تصلب الشرايين

وقد سمح التقدم في مطياف الكتلة لتحليل إنتاجية عالية البروتين التعبير والتعديل على مجموعة من الأنسجة. جنبا إلى جنب مع تجزئة التحت خلوية ونماذج المرض والكتلة الطيفي الكمي والمعلوماتية الحيوية يمكن أن تكشف عن خصائص جديدة في النظم البيولوجية. الطريقة الموضحة هنا يحلل لونين البروتينات المرتبطة في تحديد أمراض القلب وينطبق بسهولة إلى...

التحليل الكمي من Proteomes الكروماتين في الأمراض

تعلم كيفية تحليل وتوصيف آفات تصلب الشرايين في الجيوب الأبهرية للفئران باستخدام تقنيات التقطيع الدقيقة والصبغة النسيجية والمناعية. تساعد هذه الطريقة الباحثين على فهم أمراض القلب والأوعية الدموية.

التحليل الكمي وتوصيف آفات تصلب الشرايين في الجيوب الأنفية الأبهرية الفئرانية

استكشف المزيد من الفيديوهات