Name: في المختبر الهجرة الخليوي والغزو فحوصات (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 55 s
Description: تعلم تقييم الهجرة الخلوية والغزو باستخدام اختبارات إغلاق الجرح وTranswell في المختبر. تساعد هذه الطرق الباحثين على دراسة حركة الخلايا في السرطان والمناعة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

يشكر المؤلفون مايك مايلز وسام سوندرز وسي دبليو إلتون في خدمات الوسائط المتعددة والتكنولوجيا في وحدة التحكم الإلكترونية لتقديم المساعدة في إنتاج الفيديو. نحن نقدر دعم المنحة من مركز نورث كارولينا للتكنولوجيا الحيوية ، ولاعبي الجولف ضد السرطان ، وصندوق Brody Brothers Endowment Fund ، وجمعية القلب الأمريكية ، وصندوق ECU / Vidant لأبحاث وتعليم السرطان (L.V.Y. و M.J.R.).

1. إغلاق الفحص مدينة الثقافة الجرح <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل الخلايا من نسيج لوحة الثقافة باستخدام 0.25٪ التربسين-EDTA حل. بيليه الخلايا في أنبوب 15 مل المخروطية بواسطة الطرد المركزي، ونضح طاف، واعادة تعليق الخلايا في وسائل الإعلام والثقافة. لوحة العدد المناسب من الخلايا في لوحة 6 جيدا للالتقاء 100٪ في غضون 24 ساعة. ملاحظة: قد تكون هناك حاجة إلى اختبارات لتحديد الوقت وعدد من الخلايا لتحقيق 100٪ التقاء بسبب نوع من الخلايا وحجم البئر وتستخدم (على سبيل المثال، هي المصنفة 1 × 10 6 خلايا سرطان الجلد B16F10 في بئر ل لوحة 6 جيدا قبل 24 ساعة من الجيل الجرح). بدلا من ذلك، يمكن استخدام 12 أو 24 جيدا جيدا لوحات. ملاحظة: إذا كان متوفرا، يمكن خلايا المصنف إلى إدراج الثقافة (من ibidi LLC) على التعامل مع الأنسجة لوحة الثقافة جعل الجرح قبل مسبوكة. A الثقافة إدراج يمكن حماية السطح من لوحة زراعة الأنسجة من التلف من قبل طرف ماصة. إذا تم استخدام الثقافة إدراج خطوة تجاهل1.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في بيئة معقمة (عادة غطاء السلامة الأحيائية) استخدام غيض ماصة 200 ميكرولتر للضغط بحزم ضد الجزء العلوي من لوحة زراعة الأنسجة وجعل بسرعة جرح رأسي إلى أسفل من خلال أحادي الطبقة الخلية. A مختلفة غيض ماصة الحجم يمكن استخدامها لجعل حجم الجرح الذي هو المطلوب. لا تستخدم القوة المفرطة ضد لوحة زراعة الأنسجة مع طرف ماصة لأنه قد يتلف السطح. إذا كان الجرح محمل مسبقا، قد يتم حذف هذه الخطوة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح بعناية وسائل الإعلام والحطام الخلية. إضافة ببطء بما فيه الكفاية سائل الإعلام والثقافة ضد الجدار جيدا لتغطية قاع البئر وتجنب فصل خلايا إضافية. بعد جيل والتفتيش على الجرح ينبغي أن تؤخذ صورة الأولي. وضع لوحة زراعة الأنسجة في حاضنة وضعت في درجة حرارة مناسبة وأول أكسيد الكربون 2 تركيز (عادة 37 درجة مئوية و 5٪ CO 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في عدة نقاط الوقت، مثل كل 3 ساعات، وإزالة لوحة من incubatأو وضعه تحت مجهر مقلوب لالتقاط صورة لقطة وللتحقق من إغلاق الجرح. إذا كان الوقت الفاصل بين المجهري هو متاح، التقاط صورة كل عدد X من دقيقة (تبدأ عادة مع كل 5 دقائق) لأي مدة زمنية في درجة الحرارة وثاني أكسيد الكربون 2 غرفة التحكم. اعتمادا على نوع من الخلايا، قد تختلف الجرح وقت الإغلاق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحليل نتائج الصور لقطة، وقياس المسافة من جانب واحد من الجرح إلى أخرى باستخدام شريط مقياس. تحليل والحاضر بوضوح إغلاق الجرح مع مرور الوقت باستخدام مؤامرة مبعثر أو شريط الرسم البياني، مثل الشكل 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحليل الصور الوقت الفاصل بين، استيراد الصور في البرنامج يماغيج (متاحة بحرية في http://rsb.info.nih.gov/ij/) لجعل الفيديو. للقيام بذلك يماغيج مفتوحة، انقر فوق ملف، استيراد، وتسلسل الصور. العثور على الملف مع الصور؛ انقر على الصورة الأولى في الملف. حفظ الفيديو عن طريق تحديد ملف، حفظ، وافي. ويمكن ملاحظة الخلايا المهاجرة واحد لشاراcterize حركة الاتجاه. وعلاوة على ذلك، والخصائص المورفولوجية مثل تشكيل أقدام صفاحية وراء حافة التراجع قد تدرس كذلك (الشكل 2 والفيديو التكميلية). </li></ol> 2. Transwell الهجرة الخليوي والغزو الفحص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في بيئة معقمة (عادة غطاء السلامة الأحيائية) فصل الخلايا من نسيج لوحة الثقافة باستخدام غير الأنزيمية العازلة تفارق الخلية أو 0.25٪ التربسين-EDTA حل، وخلايا بيليه بواسطة الطرد المركزي، ونضح وسائل الإعلام القائمة وترك الخلايا مكعبات. اعادة تعليق الخلايا في مصل سائل الإعلام والثقافة الحرة الخلية تحتوي على 0.1٪ BSA (ألبومين المصل البقري). ملاحظة: اعتمادا على خط الخلية التي يجري التحقيق 0.25٪ التربسين EDTA-قد تؤثر الهجرة الخلية والغزو بسبب الانقسام من المستقبلات المختلفة على سطح الخلية 17. ملاحظة: عدد الخلايا لكل مل يعتمد على حجم الخلايا. قد تكون هناك حاجة إلى مزيد من الاختبارات للعثور على كثافة البذر التي محترفينفيديس على أفضل النتائج. عادة 1 × 10 6 خلية / مل هو نقطة انطلاق جيدة لمعظم أنواع الخلايا عند استخدام جيدا 24 transwell إدراج. هناك مجموعة واسعة من الأحجام transwell إدراج وينبغي تعديل عدد الخلايا المضافة لوفقا لذلك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحة 100 ميكرولتر من محلول الخلية على الجزء العلوي من الغشاء المرشح في إدراج transwell واحتضان لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة مئوية و 5٪ CO 2 للسماح للخلايا ليستقر. ملاحظة: حجم المسام معينة من الغشاء transwell المستخدمة تعتمد على حجم الفردية من الخلايا في العينة. على سبيل المثال، إذا كانت الخلايا صغيرة جدا فإنها قد تمر من خلال المسام دون الحاجة إلى تسهيل الهجرة أو إذا كانت كبيرة جدا فإنها قد لا تناسب من خلال المسام. وهناك العديد من إدراج transwell مع أحجام المسام التي تتراوح من 3 ميكرون، 5 ميكرون، و 8 ميكرومتر لفحوصات الهجرة الخلية. تتوفر تجاريا على إدراج transwell من شركات مثل كورنينج. ملاحظة: transwell مigration مقايسة يمكن تعديلها بسهولة لإجراء فحص غزو الخلية. للقيام بذلك، قم بإضافة المصفوفة خارج الخلية (ECM) مواد على رأس الغشاء transwell ثم قم بإضافة خلايا على رأس ECM. على سبيل المثال، يتم إذابة Matrigel ومسالة على الجليد، ومن ثم يتم إضافة 30-50 ميكرولتر من Matrigel إلى جيدا 24 transwell إدراج وعزز في حاضنة 37 درجة مئوية لمدة 15-30 دقيقة لتشكيل طبقة رقيقة هلام. يضاف حل الخلية على رأس طلاء Matrigel لمحاكاة الغزو من خلال المصفوفة خارج الخلية. ملاحظة: هناك اختلافات واضحة بين الهجرة الخلية transwell والمقايسات غزو الخلايا transwell. يقيس الفحص الهجرة الخلية transwell القدرة الكيميائي للخلايا نحو الكيماوي جاذبة. مقايسة غزو الخلايا transwell، ومع ذلك، يقيس كلا الكيميائي خلية وغزو الخلايا من خلال المصفوفة خارج الخلية، وهي العملية التي توجد عادة في الانبثاث السرطان أو التطور الجنيني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ماصة، caref جدامع ully إضافة 600 ميكرولتر من المطلوب الكيماوي جاذبة في الجزء السفلي من مجلس النواب في 24 لوحة جيدا. إضافة الكيماوي جاذبة دون تحريك إدراج transwell وتجنب توليد فقاعات. تأكد من أن السائل الكيماوي جاذبة في البئر أسفل يجعل الاتصال مع الغشاء في البئر العليا لتشكيل التدرج الكيميائي. فترة حضانة تعتمد على نوع من الخلايا والكيماوي جاذبة المستخدمة. ملاحظة: قد تكون هناك حاجة إلى مزيد من الاختبارات لتحديد فترة الحضانة. ملاحظة: للحصول على الخلايا الملتصقة، فإن الخلايا هاجر نعلق على الجانب الآخر من الغشاء 1،8. الكمي من الخلايا هاجر لا يمكن أن يؤديها التالية الخطوات 2،4-2،8 (الخطوات 2،4-2،8 لا تحتاج إلى أن يؤديها في بيئة معقمة). لخلايا غير ملتصقة، فإن الخلايا هاجر تسقط في وسائل الاعلام في مجلس النواب. يمكن الاعتماد على عدد من الخلايا باستخدام عدادة الكريات هاجروا أو تدفق عداد الكريات 5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة إدراج transwell من لوحة. استخدام قضيب من القطن ذات الرؤوس عدة مرات حسب الحاجة لإزالة بعناية وسائل الإعلام والخلايا المتبقية التي لم هاجروا من الجزء العلوي من الغشاء دون الإضرار بها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 600-1،000 ميكرولتر من الايثانول 70٪ في بئر من 24 لوحة جيدا. وضع إدراج transwell في الإيثانول 70٪ لمدة 10 دقيقة للسماح التثبيت الخلية. إزالة transwell إدراج من 24 لوحة جيدا واستخدام قضيب من القطن ذات الرؤوس لإزالة الإيثانول المتبقية من الجزء العلوي من الغشاء. يسمح الغشاء transwell لتجف (عادة 10-15 دقيقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 600-1،000 ميكرولتر من 0.2٪ الكريستال البنفسجي في بئر من 24 لوحة جيدا ووضع الغشاء في ذلك لتلطيخ. يحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 5-10 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بلطف إزالة البنفسجي الكريستال من أعلى الغشاء مع طرف ماصة أو القطن يميل قضيب. بعناية فائقة، لتجنب غسل قبالة خلايا ثابتة، وتراجع الغشاء إلى الماء المقطر عدة مرات حسب الحاجة لإزالة الزائدة الكريستال violeر. يسمح الغشاء transwell لتجف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عرض تحت مجهر مقلوب وحساب عدد الخلايا في مختلف المجالات من أجل الحصول على متوسط ​​مجموع الخلايا التي هاجروا عبر الغشاء تجاه الكيماوي جاذبة وتعلق على الجانب السفلي من الغشاء (الشكل 3). </li></ol>

<ol><li>Castellone, R. D., Leffler, N. R., Dong, L., Yang, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+tumor+cell+migration+and+metastasis+by+the+proton-sensing+GPR4+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Inhibition of tumor cell migration and metastasis by the proton-sensing GPR4 receptor.</a> Cancer Lett. 312 (2), 197-208 (2011).</li>
<li>Hall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cytoskeleton+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">The cytoskeleton and cancer.</a> Cancer Metastasis Rev. 28, (2009).</li>
<li>Lauffenburger, D. A., Horwitz, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+migration%3A+a+physically+integrated+molecular+process%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cell migration: a physically integrated molecular process.</a> Cell. 84 (3), 359-369 (1996).</li>
<li>Peter, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migration+to+apoptotic+%26%2334%3Bfind-me%26%2334%3B+signals+is+mediated+via+the+phagocyte+receptor+G2A%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Migration to apoptotic &#34;find-me&#34; signals is mediated via the phagocyte receptor G2A.</a> J. Biol. Chem. 283 (9), 5296-5305 (2008).</li>
<li>Radu, C. G., Yang, L. V., Riedinger, M., Au, M., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+chemotaxis+to+lysophosphatidylcholine+through+the+G2A+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">T cell chemotaxis to lysophosphatidylcholine through the G2A receptor.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101 (1), 245-250 (2004).</li>
<li>Buul, J. D., Hordijk, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+in+leukocyte+transendothelial+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb.+Vasc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Signaling in leukocyte transendothelial migration.</a> Arterioscler Thromb. Vasc. Biol. (5), 824-833 (2004).</li>
<li>Yang, L. V., Heng, H. H., Wan, J., Southwood, C. M., Gow, A., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+promoters+and+polyadenylation+regulate+tissue-specific+expression+of+Hemogen+isoforms+during+hematopoiesis+and+spermatogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Alternative promoters and polyadenylation regulate tissue-specific expression of Hemogen isoforms during hematopoiesis and spermatogenesis.</a> 228 (4), 606-616 (2003).</li>
<li>Yang, L. V., Radu, C. G., Wang, L., Riedinger, M., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gi-independent+macrophage+chemotaxis+to+lysophosphatidylcholine+via+the+immunoregulatory+GPCR+G2A%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Gi-independent macrophage chemotaxis to lysophosphatidylcholine via the immunoregulatory GPCR G2A.</a> Blood. 105 (3), 1127-1134 (2005).</li>
<li>Yoshida, M., Yoshida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sperm+chemotaxis+and+regulation+of+flagellar+movement+by+Ca2%2B%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Hum.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Sperm chemotaxis and regulation of flagellar movement by Ca2+.</a> Mol. Hum. Reprod. 17 (8), 457-465 (2011).</li>
<li>Albini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+and+endothelial+cell+invasion+of+basement+membranes.+The+matrigel+chemoinvasion+assay+as+a+tool+for+dissecting+molecular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Pathol.+Oncol.+Res%22%5BJournal%5D)">Tumor and endothelial cell invasion of basement membranes. The matrigel chemoinvasion assay as a tool for dissecting molecular mechanisms.</a> Pathol. Oncol. Res. 4 (3), 230-241 (1998).</li>
<li>Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+determinants+of+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">Critical determinants of metastasis.</a> Semin. Cancer Biol. 12 (2), 89-96 (2002).</li>
<li>Steeg, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+metastasis%3A+mechanistic+insights+and+clinical+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Tumor metastasis: mechanistic insights and clinical challenges.</a> Nat. Med. 12 (8), 895-904 (2006).</li>
<li>Roussos, E. T., Condeelis, J. S., Patsialou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotaxis+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Chemotaxis in cancer.</a> Nat. Rev. Cancer. 11 (8), 573-587 (2011).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+3D+morphology+and+functions+on+genetically+engineered+mouse+melanoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Integr.+Biol.+%28Camb%22%5BJournal%5D)">Comparative study of 3D morphology and functions on genetically engineered mouse melanoma cells.</a> Integr. Biol. (Camb. 4 (11), 1428-1436 (2012).</li>
<li>Junger, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purinergic+regulation+of+neutrophil+chemotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Mol.+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Purinergic regulation of neutrophil chemotaxis.</a> Cell. Mol. Life Sci. 65 (16), 2528-2540 (2008).</li>
<li>Lazennec, G., Richmond, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokines+and+chemokine+receptors%3A+new+insights+into+cancer-related+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Chemokines and chemokine receptors: new insights into cancer-related inflammation.</a> Trends Mol. Med. 16 (3), 133-144 (2010).</li>
<li>Huang, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trypsin-induced+proteome+alteration+during+cell+subculture+in+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Sci%22%5BJournal%5D)">Trypsin-induced proteome alteration during cell subculture in mammalian cells.</a> J. Biomed. Sci. 17, (2010).</li>
<li>Cortesio, C. L., Boateng, L. R., Piazza, T. M., Bennin, D. A., Huttenlocher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calpain-mediated+proteolysis+of+paxillin+negatively+regulates+focal+adhesion+dynamics+and+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Calpain-mediated proteolysis of paxillin negatively regulates focal adhesion dynamics and cell migration.</a> J. Biol. Chem. 286 (12), 9998-10006 (2011).</li>
<li>Wehrle-Haller, B., Imhof, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin+microtubules+and+focal+adhesion+dynamics+during+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Biochem.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Actin microtubules and focal adhesion dynamics during cell migration.</a> Int. J. Biochem. Cell Biol. 35 (1), 39-50 (2003).</li>
</ol>

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

الهجرة الخلية هو أحد الجوانب الهامة للدراسة في أبحاث السرطان، ويمكن أيضا أن تطبق على النمو، والجرح الدراسات المناعية الشفاء. ثقافة الخلية الجرح إغلاق الفحص والكشف عن الهجرة الخلية transwell والغزو المقايسات معلومات مفصلة من السلوكيات الخلايا المهاجرة، ويمكن استخدامها للتحقيق في الآليات الجزيئية للهجرة الخلية 1،2،10،14. استخدمت دراستنا هذه المقايسات حركية الخلية لتحديد سرعة الهجرة والغزو قدرات خط خلية سرطان الجلد B16F10. <p class="jove_content" style=";text-align:rig...

حركية هو سمة أساسية من سمات الخلايا الحية. وتشارك الهجرة خلية في مفهوم الحياة، والتطور الجنيني، الاستجابة المناعية، والعديد من العمليات المرضية مثل السرطان والتهاب ثانوي لورم خبيث 1-9. وبالتالي، وأساليب لدراسة الخلية السلوك المهاجرة هي أدوات البحث مفيد جدا لمجموعة واسعة من التخصصات في العلوم الطبية الحيوية، وعلم الأحياء، والهندسة الحيوية، والمجالات ذات الصلة. دراسة الهجرة الخلية في أبحاث السرطان هو من مصلحة خاصة فيما يرتبط السبب الرئيسي للوفاة في مرضى السرطان لتطور النقيلي. من أجل السرطانية تنتشر وتنشر في جميع أنحاء الجسم، يجب أن تهاجر الخلايا السرطانية وغزو من خلال المصفوفة خارج الخلية (ECM)، intravasate في الدورة الدموية، ونعلق على موقع بعيد، وأخيرا يتسرب إلى تشكيل بؤر بعيدة 1،10-12. لذا يمكن استخدام الأساليب البيولوجية المختلفة لدراسة هذه الأحداث بالتفصيل. ثقافة الخلية جرح إغلاق لوتستخدم على نطاق واسع د هجرة transwell والمقايسات الغزو في الأوساط العلمية 1،10. هذه الاختبارات يمكن أن توفر البيانات اللازمة التي قد تسمح لفهم مدى نوع خلية معينة يمكن ترحيل من تلقاء أنفسهم أو الرد على الكيماوي جاذبة وتهاجر إتجاهي نحو ذلك. وقد وصفت العديد من الظواهر المهاجرة. قد تهاجر الخلايا في شكل خلية واحدة من هذا القبيل كما رأينا في الوسيطة أو حركة تشبه حركة أميبية أو متعددة الخلايا وصفت الهجرة الجماعية أو خلية تدفق 13. طريقة الحركة المستخدمة في خلايا متحركة يمكن ملاحظتها بسهولة باستخدام زراعة الخلايا إغلاق الجرح الفحص. من بين العديد من الطرق لدراسة الهجرة الخلية، الجرح خلية إغلاق الفحص هو واحد من أبسط. وهذه الطريقة مفيدة لتحديد القدرة هجرة الجماهير خلية كاملة. عندما اتخذت خطوة أخرى يمكن استخدامها لمراقبة الخصائص المورفولوجية خلية الفرد أثناء الترحيل 14. بعد تحليل إغلاق الجرح قد كشفت العديد من الظواهر. قياس المسافة المغلقة مع مرور الوقت عند مقارنة إلى عنصر تحكم قد تكشف عن تغييرات محددة الهجرة أو النمط الظاهري المهاجرة ضعاف التي لم تكن معروفة سابقا. علاوة على ذلك، تشكيل واحد قدم صفاحية خلية، وذيل سحب، وحركة الاتجاه قد تعطي مؤشرات لما قد تنخفض قيمتها أو محسنة في خلايا الفائدة 14. هجرة transwell والمقايسات الغزو يمكن أن تستخدم لتحليل قدرة الخلايا واحد للرد إتجاهي لمختلف الكيماوي جاذبة سواء كانوا كيموكينات، عوامل النمو، والدهون، أو النيوكليوتيدات 4،5،8،15،16. كما أنه قد تقييم قدرة المهاجرة الفرق بسبب الإفراط في التعبير عن مستقبلات 1،14. ويمكن أيضا أن تستخدم هذه المقايسات لتحديد وتوصيف المنظمين الرئيسيين للهجرة الخلية مثل الأسرة رو من GTPases الصغيرة 2. بعد هذه قصيرة وبسهولة القويمكن أيضا تحديد اختبارات إيصال خدمات الإيداع، ووضع الهجرة الخلية، وقدرة الخلية لغزو في مصفوفة 3-D.

<table><tbody><tr><td>دولبيكو s معدل النسر المتوسط (DMEM)</td><td>جيبكو</td><td>11995-073</td><td></td></tr><tr><td>مصل الأبقار الجنيني (FBS)</td><td>الجوزاء</td><td>100106</td><td></td></tr><tr><td>مصل الأبقار الألبومين (BSA)</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>A4503-50G</td><td></td></tr><tr><td>التربسين EDTA 0.25٪</td> <td>جيبكو</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>دولبيكو s محلول ملحي مخزن بالفوسفات (DPBS)</td> <td>Gibco</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>كريستال بنفسجي</td><td>Sigma</td><td>C0775-100G</td><td>مذاب في الماء عند 0.2٪</td></tr> <tr><td>عازلة تفكك الخلية</td><td>Gibco</td><td>13151-014</td><td></td></tr><tr><td>حاضنة ثقافة الخلية</td><td>Thermo Fisher النموذج العلمي</td><td></td><td># 3145</td></tr><tr><td>SterilGARD غطاء السلامة الحيوية</td><td>The Baker Company، Inc.&nbsp;</td><td></td><td>نموذج # VBM-600</td></tr><tr><td>EVOS Fl مجهر مقلوب</td><td>Thermo Fisher النموذج العلمي</td><td></td><td># AMF-4302-US</td></tr><tr><td>لوحة زراعة الأنسجة</td><td>Becton Dickinson</td><td>353046</td><td>يختلف رقم الكتالوج اعتمادا على نوع لوحة الثقافة</td></tr><tr><td>Corning Transwell insert</td><td>Fisher</td><td>07-200-150</td><td>يختلف رقم الكتالوج حسب حجم مسام الغشاء</td></tr></tbody></table>

في المختبر الهجرة الخليوي والغزو فحوصات

In vitro Cell Migration and Invasion Assays

الهجرة هي خاصية رئيسية للخلايا الحية وضرورية للتطور الطبيعي والاستجابة المناعية وعمليات المرض مثل ورم خبيث السرطان والالتهابات. تعد طرق فحص هجرة الخلايا مفيدة ومهمة للغاية لمجموعة واسعة من الأبحاث الطبية الحيوية مثل بيولوجيا السرطان والمناعة وبيولوجيا الأوعية الدموية وبيولوجيا الخلية والبيولوجيا التنموية. نستخدم هنا هجرة الخلايا السرطانية وغزوها كمثال ونصف فحصين مرتبطين لتوضيح الطرق شائعة الاستخدام والتي يسهل الوصول إليها لقياس هذه العمليات. الطريقة الأولى هي مقايسة إغلاق جرح مزرعة الخلية التي يتم فيها إنشاء خدش على طبقة أحادية الخلية المتقاربة. يمكن قياس سرعة إغلاق الجرح وهجرة الخلايا عن طريق التقاط صور لقطة باستخدام مجهر مقلوب منتظم على عدة فترات زمنية. يمكن توثيق سلوك هجرة الخلايا الأكثر تفصيلا باستخدام نظام الفحص المجهري بفاصل زمني. الطريقة الثانية الموضحة في هذه الورقة هي مقايسة هجرة الخلايا عبر الويل وغزوها التي تقيس قدرة حركة الخلية وغزوها نحو تدرج جاذب كيميائي. هدفنا هو وصف هذه الأساليب بطريقة يسهل الوصول إليها بحيث يمكن تنفيذ الإجراءات بنجاح في مختبرات الأبحاث حتى مع إعداد بيولوجيا الخلية الأساسية.

أجريت إغلاق فحص الجرح وفحص الهجرة الخلية transwell المقدمة هنا باستخدام خلايا فأر B16F10 سرطان الجلد كنظام نموذج. في مقايسة إغلاق الجرح، وكانت المصنفة B16F10 الخلايا في 6 جيدا نسيج لوحة الثقافة ونمت إلى 100٪ التقاء في غضون 24 ساعة. ولدت وجرح ما يقرب من 700 ميكرون واسع باستخدام طرف ماصة وإغلاق الجرح (الهجرة الخلية) تم تسجيلها باستخدام المجهر مرور الزمن. بدلا من ذلك، يمكن أيضا إغلاق الجرح دراستها من قبل التقاط الصور لقطة في نقاط زمنية مختلفة إذا كان الوقت الفاصل بين المجهري غير متوف...

تستخدم عادة، يتم وصف طرق للوصول للغاية لدراسة الهجرة الخلية والغزو في المختبر. الأسلوب الأول هو الجرح خلية إغلاق الفحص الذي يقيس حركية الخلية. الأسلوب الثاني هو transwell الهجرة والغزو الفحص أن يقيم الكيميائي والقدرة الغازية من الخلايا.

Migration is a key property of live cells and critical for normal development, immune response, and disease processes such as cancer metastasis and ...

تعد هجرة الخلايا عملية ديناميكية للغاية، وهي ضرورية للعديد من الوظائف الفسيولوجية مثل التطور الجنيني الطبيعي، والاستجابة المناعية، بالإضافة إلى العمليات المرضية؛ مثل انتشار السرطان والالتهابات.تعد دراسة هجرة الخلايا مهمة لمجموعة واسعة من العلوم الطبية الحيوية مثل بيولوجيا السرطان، وعلم المناعة، وبيولوجيا الخلية، وبيولوجيا النمو. ويمكن تقسيم هجرة الخلايا إلى أربع خطوات منفصلة ميكانيكيًا هي: الامتداد، وتكوين التصاقات جديدة، وانكماش جسم الخلية، وأخيرًا، انفصال الذيل. سنقوم هنا بوصف طريقتين بسيطتين لدراسة الطبيعة الديناميكية لهجرة الخلايا في المختبر بدقة.تتمثل الطريقة الأولى في مقايسة إغلاق جرح في مزارع خلوية. تُستخدم هذه المقايسة بشكل شائع وهي متاحة للغاية للمختبرات التي تمتلك أبسط التجهيزات المخبرية. مقايسة إغلاق جرح في مزارع خلوية هي مقايسة يتم فيها استخدام رأس ماصة لإحداث خدوش في طبقة أحادية متصلة من الخلايا، وبمرور الوقت، ستقوم الطبقة الخلوية المتصلة بإغلاق الجرح الذي تم إحداثه مسبقاً.يمكن دراسة ديناميكيات هجرة الخلايا بالتفصيل باستخدام التصوير الزمني (time ops) أو استخدام الصور اللحظية. حيث يمكن قياس المسافة وحساب السرعة التي تحركت بها الخلايا بمرور الوقت. أما الطريقة الثانية ذات الصلة، وهي مقايسة هجرة وغزو الخلايا عبر غشاء الترانزويل (transwell)، فهي أيضاً وسيلة ميسرة للغاية لتتبع عملية زرع الخلايا على غشاء الترانزويل.تُعرف أيضاً بشكل شائع باسم غرفة بويدن (Boyden chamber). ويمكن من خلالها قياس قدرات الهجرة تجاه تدرج الجاذبات الكيميائية. وتُعد هاتان الإجراءات التجريبية ميسورة الوصول للغاية وقيمة جداً في العديد من المجالات البحثية.الفصل الثاني، مقصورة زراعة الخلايا، المقايسة. مرحباً، اسمي كالفين جاستيس. أنا طالب دراسات عليا في مختبر الدكتور يانغ من قسم علم الأورام في مدرسة برودي للطب بجامعة شرق كارولاينا.وسأقوم اليوم بشرح إجراءين لقياس قدرات الهجرة والغزو للخلايا في المختبر. دعونا نبدأ الآن بإجراء استنبات الخلايا. المقايسة التي استُخدمت فيها الخلايا في استنبات الخلايا.يمكن استزراع المقايسة في أطباق زراعة الأنسجة باستخدام تقنيات زراعة الخلايا التقليدية. للبدء، يتم سحب وسط النمو المستخدم في استزراع الخلايا، ثم تُغسل الخلايا مرة واحدة باستخدام PBS، وبعد ذلك يُضاف ملليلتران من trypsin EDTA بتركيز 0.25% إلى الطبق ويُوضع في الحاضنة لمدة ثلاث دقائق. يُخرج الطبق من الحاضنة ويُضاف إليه ثلاثة ملليلترات من DMM المدعم بـ 10% FES.قم بإزالة الوسط من الطبق وانقله إلى أنبوب مخروطي سعة 15 milliliter. قم بإجراء الطرد المركزي لمدة خمس دقائق بسرعة 1500 RPMs. بعد الطرد المركزي، أعد تعليق الخلايا في 2 milliliter من DMM المكمل بـ 10%FES.بعد ذلك، قم بعدّ الخلايا باستخدام مقياس كرات الدم (hemo cytometer). وعند الانتهاء من العد، قم بزراعة عدد من الخلايا بحيث تصبح متلاصقة تمامًا (confluent) في غضون 24 ساعة. ضع الطبق في الحاضنة لمدة 24 ساعة للسماح للخلايا بالالتصاق والانتشار.أخرج الطبق من الحاضنة وافحصه تحت المجهر للتأكد من أن الخلايا في الطبق قد وصلت إلى حالة الالتحام الكامل بنسبة 100%confluent. بعد ذلك، وفي غطاء السلامة البيولوجية، وباستخدام طرف الماصة بحذر دون إتلاف طبق زراعة الأنسجة، اصنع جرحاً من أعلى البئر إلى أسفله. بعد إحداث الجرح باستخدام طرف الماصة، قم بشفط الوسط الغذائي واغسله برفق باستخدام 2 mL من وسط النمو.في هذه الحالة، يُستخدم وسط DMEM المكمل بـ 10%FES لغسل أي بقايا موجودة، ثم يتم سحب الوسط مرة أخرى. وأخيرًا، يتم إضافة ملي لترين من وسط النمو، وفي حال توفره، توضع الشريحة في غرفة محكومة درجة الحرارة وCO2 أسفل المجهر. تتوفر في هذه الحالة إمكانية التصوير بالفاصل الزمني.خاصية التصوير بالفاصل الزمني غير متوفرة. التقط صورة أولية لموقع العلامة والبئر ثم ضع الطبق في الحاضنة. أما إذا كانت خاصية التصوير بالفاصل الزمني متوفرة، فقم بضبط إعدادات هذه الخاصية في المجهر.سنقوم بضبط الفاصل الزمني للتصوير على 16 ساعة. بعد مرور 16 ساعة، مع التقاط صورة كل خمس دقائق، يمكن إزالة الطبق من الحجرة وحفظ الصور التي تم الحصول عليها طوال مدة التجربة على وحدة ذاكرة فلاش. قم بتوصيل USB بالكمبيوتر وافتح برنامج Image J.انقر فوق "ملف" (file). استورد تسلسل الصور. ابحث عن الصور التي تم التقاطها أثناء التجربة.انقر فوق الملف الأول ثم انقر على فتح. ستظهر خيارات التسلسل التالية. اختر الصورة الأولى من قائمة الصور الخاصة بك وأدخل الزيادات المطلوبة للفيديو.سترى الآن خيارات قارئ AVI. اختر الخيار الأنسب لتجربتك وانقر. حسناً، سيقوم برنامج Image J الآن بإنشاء فيديو، ولحفظ الفيديو، انقر على "File" ثم "Save as" واختر صيغة AVI أو أي خيار آخر قد يناسب تجربتك.يمكن بعد ذلك تحليل الفيديو في دراسة الخلية للبحث عن سمات الهجرة التي قد تكون ذات أهمية. ومن السمات المحتملة التي يمكن دراستها تمدد الأقدام الكاذبة (Lamellipodial extension)، وانكماش جسم الخلية، وانفصال الذيل. وفي حال عدم استخدام التصوير بفاصل زمني، يمكن إزالة الطبق الذي وُضع في الحاضنة لمدة تتراوح بين 12 إلى 16 ساعة بعد التقاط الصورة الأولية.يجب تصوير المنطقة التي تم تصويرها في البداية مرة أخرى، مع ضرورة إضافة شريط مقياس لإجراء القياسات اللاحقة. بعد قياس العرض الأولي للجرح الذي ظهر في الصورة الأولى، يتم تحويل العرض المقاس بالبكسل إلى ميكرومترات باستخدام شريط المقياس. بعد ذلك، يتم قياس عرض الجرح في الصور النهائية بالبكسل في نفس المنطقة السابقة، ثم يُحول مرة أخرى إلى ميكرومترات باستخدام شريط المقياس.تتمثل الخطوة النهائية في طرح العرض النهائي من العرض الأولي للحصول على إجمالي العرض الذي انغلق فيه الجرح خلال الفترة الزمنية المحددة. يجب قسمة مسافة الهجرة النهائية المقاسة على الوقت المحدد للحصول على سرعة الانغلاق بوحدة ميكرومتر لكل ساعة. يمكن تكرار طريقة اللقطات في العديد من الآبار وبأحجام متفاوتة لإجراء تحليل كمي أدق لهجرة الخلايا، راجع الفصل الثالث، مقايسة هجرة الخلايا والابتكار عبر الغشاء (trans Well).للبدء، يجب أولاً تنمية الخلايا المراد دراستها في طبق زراعة أنسجة من أجل هذا الإجراء. بعد ذلك، اغسل الخلايا مرة واحدة باستخدام PBS وافصل الخلايا المستهدفة من طبق زراعة الأنسجة باستخدام محلول تفكيك الخلايا أو التريبسين. كما نقترح عليك الاطلاع على المراجع العلمية حول كيفية تأثير التريبسين على الخلايا التي تدرسها، لأن استخدامه قد يؤثر على نتائجك.بعد عملية الطرد المركزي للفصل بسرعة 1500 RPMs لمدة خمس دقائق، قم بإزالة وسحب الوسط الموجود، ثم أعد تعليق الخلايا في 0.1%BSA. افتح عبوة إدراج Transwell وضعها في البئر المصمم لمقاسها المحدد. إذا كنت تجري اختبار غزو Transwell أولاً، فأضف matrigel إلى الجزء العلوي من الإدراج واحضنه لمدة 30 دقيقة قبل الانتقال إلى الخطوة التالية.قم بتوزيع 100 µL من محلول الخلايا فوق غشاء الـ transwell. قم بالتحضين لمدة 10 دقائق للسماح للخلايا بالترسب. يعتمد عدد الخلايا الموزعة على نوع الخلايا، وقد يتطلب الأمر إجراء تجارب لاحقة للتحديد.لتحديد هذا العدد، استخدم ماصة لإضافة المادة الجاذبة الكيميائية المطلوبة بعناية تحت الغرسة إلى قاع البئر. حاول تجنب إزالة الغرسة. تعتمد مدة الحضانة على نوع الخلايا.قم بإزالة قطعة غشاء الـ transwell بعد فترة الحضانة، واستخدم مسحة قطنية عدة مرات حسب الحاجة لإزالة الوسط الزائد والخلايا التي لم تهاجر إلى الغشاء بلطف من الجزء العلوي للغشاء. كن حذرًا لتجنب إتلاف الغشاء. أضف من 600 إلى 1000 µL من الإيثانول بتركيز 70% في الحجرة السفلية من وعاء فارغ.ضع الغطاء المدرج في البئر الذي يحتوي على إيثانول بتركيز 70% واتركه لمدة 10 دقائق للسماح بتثبيت الخلايا. ومرة أخرى، استخدم مسحة قطنية عدة مرات حسب الحاجة لإزالة الإيثانول المتبقي من الخلايا التي لم تهاجر إلى الغشاء من أعلى الغشاء. أضف من 600 إلى 1000 µL من صبغة Crystal violet بتركيز 0.2% إلى البئر، ثم ضع الغطاء المدرج فيه لصباغة الخلايا.يُحضّن لمدة 10 دقائق. يتم إزالة صبغة البنفسج البلوري الزائدة من سطح الغشاء بشكل عام. بعد ذلك، وبحذر شديد لتجنب غسل الخلايا المهاجرة، يُغمس الغشاء في الماء المقطر لعدد المرات اللازمة لإزالة ما تبقى من صبغة البنفسج البلوري.اترك الغشاء ليجف لعرض الخلايا باستخدام المجهر. يمكن إزالة الغشاء بعناية باستخدام المشرط ووضعه على شريحة زجاجية غطاء، أو يمكنك عرض الخلايا بينما لا تزال الإدراجات في البئر. وباستخدام مجهر مقلوب، يجب التقاط صورة لعدة مجالات رؤية.للحصول على تمثيل دقيق لعدد الخلايا المهاجرة، يمكن عد الخلايا باستخدام أداة العد في برنامج Adobe Photoshop. ويمكن إدراج البيانات التي تم تجميعها في رسم بياني شريطي لتحقيق أفضل تمثيل لنتائجك. الفصل الرابع، النتائج التمثيلية.بعد ذلك، سنستعرض بعض النتائج التمثيلية من مقايسة المزرعة الخلوية المغلقة ومقايسة هجرة الخلايا عبر غشاء Transwell. هاتان طريقتان مرتبطتان لفحص حركية الخلايا كما هو موضح في هذا الفيديو، وسنبدأ بمقايسة المزرعة الخلوية المغلقة. نعرض هنا صوراً لقطات مأخوذة عند 0 و4 و8 و12 ساعة.كما تلاحظون، يمكن التقاط صور للجرح بعد إنشائه، وقياس مسافة انغلاق الجرح بمرور الوقت. نقوم بعرض بياناتنا باستخدام مخطط مبعثر، ومن خلال استخدام الطريقة التي تمت مناقشتها مسبقاً، نحدد سرعة انغلاق الجرح بمرور الوقت. علاوة على ذلك، يمكن أيضاً دراسة هجرة الخلايا الفردية بالتفصيل باستخدام التصوير الزمني.في هذه الحالة، نقوم بتكبير خلايا فردية أثناء إغلاق الجرح، وتتبع هجرتها عبر الزمن ومراقبة حركتها. ويمكن فحص ميزات مثل تمدد الحافة الرائدة، وتراجع الذيل، والحركة العامة بالتفصيل. ستستعرض الآن بعض نتائج مقايسة هجرة الخلايا العرضية. هنا نعرض صورتين تم التقاطهما للغشاء بعد إجراء مقايسة هجرة الخلايا باستخدام transwell.تعرض الصورة الأولى النتائج في غياب المادة الجاذبة كيميائياً، حيث كان هناك انتقال ضئيل أو معدوم للخلايا عبر الغشاء. وتعرض الصورة الثانية النتائج مع وجود المادة الجاذبة كيميائياً، حيث حدث زيادة في انتقال الخلايا إلى الغشاء. ونعرض على اليمين نتائج التكميم لتجربتنا باستخدام رسم بياني شريطي مع أشرطة خطأ تمثل الخطأ المعياري.الفصل الخامس، الخاتمة: تكشف البيانات التي تم تجميعها بعد مقايسة غلق المزرعة الخلوية في مقايسة هجرة الخلايا العرضية أو مقايسة الغزو عن قدرات هجرة الخلايا في بيئة ثنائية الأبعاد (2D) أو بيئة ثلاثية الأبعاد (3D). ويمكن مقارنة هذه النتائج بنتائج أخرى للكشف المحتمل عن بيانات لم تكن معروفة سابقاً، كما يمكن أن ترتبط باختبارات كيميائية حيوية أخرى. ويُعد هذان الاختباران المترابطان والشائعا الاستخدام قيمين وسهلي الوصول في أبسط تجهيزات مختبرات بيولوجيا الخلية.نشكركم على انضمامكم إلينا اليوم ونتمنى لكم كل التوفيق في مساعيكم العلمية المستقبلية.

in-vitro-cell-migration-and-invasion-assays

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

نماذج لغزو الخلايا السرطانية في ثلاثي الأبعاد المصفوفة خارج الخلية تعكس على نحو...

النمذجة والتصوير 3 الأبعاد غزو الخلية الجماعية

يصف مقال الفيديو هذا طريقة معدلة في المختبر لفحص دور الهرمونات و / أو السيتوكينات و / أو عوامل النمو في دفع غزو الخلايا السرطانية.

والتعديل<em&gt; في المختبر</em&gt; الغزو الفحص لتحديد الدور المحتمل للالهرمونات، السيتوكينات و / أو عوامل النمو في التوسط السرطان غزو الخلايا

تفيد هذه الدراسة أسلوبين مختلفين لتحليل الخلية الغزو والهجرة: مقايسة الدائرة Boyden و في المختبر الفيديو المستندة إلى مجهر التئام المقايسة. وصف بروتوكولات لهذه التجارب اثنين، وتتم مقارنة مزايا وعيوب.

تقييم عملية الهجرة وغزو الخلية: مقارنة من الصفر فيديو المستندة إلى مجهر الجرح المقايسة والمقايسة الدائرة Boyden

ويصف هذا البروتوكول مقايسة غزو عمودي مقلوب التي يمكن أن تستخدم لقياس قدرات الهجرة وغزو الخلايا في أجواء ثلاثية الأبعاد مع الحفاظ على المكروية الخلية. هذا التحليل مناسبة لخلايا نادرة و/أو الحساسة.

تتحرك صعودا: بسيطة ومرنة في المختبر غزو ثلاثية الأبعاد مقايسة بروتوكول

نقدم هنا، بروتوكولا لتقييم تأثير الببتيدات على هجرة الخلايا الظهارية الشعب الهوائية. يسمح هذا الأسلوب للحصول على بيانات كمية عن سرعة الإغلاق الهجرة والجرح خلية السريع واستنساخه بدرجة عالية.

رواية في المختبر الجرح المقايسة الشفاء لتقييم الهجرة الخلية

هنا، نحن تصف خلية يعيش تقنيات التصوير لقياس كمي الهجرة وغزو جليوبلاستوما الدماغ ورم الخلايا الجذعية على مر الزمن وظروف العلاج متعددة.

فحوصات التصوير خلية يعيش بدراسة الدماغ جليوبلاستوما ورم الخلايا الجذعية الهجرة والغزو

نقدم هنا، بروتوكول الوصول للغاية لتقييم حركة الخلية في الخلايا البشرية تروفوبلست باستخدام ثلاثة فحوصات في المختبر: مقايسة الصفر والمقايسة غزو ترانسويل والمقايسة انتشار الخلايا.

في المختبر فحوصات تقييم الهجرة، والغزو، وانتشار خطوط الخلايا مخلدة تروفوبلست البشرية في الاثلوث الأول

ويصف البروتوكول الحالي بأسلوب متكامل يحقق سرطان الخلية الهجرة والغزو على منصة واحدة في الوقت الحقيقي، وتوفير خيار استنساخه بسهولة وكفاءة من حيث الوقت لدراسة التنقل خلية ومورفولوجيا.

سير عمل بسيطة هجرة/غزو تصوير خلية يعيش الآلي باستخدام

يتم استخدام اختبار غزو الخلايا في المختبر لقياس إمكانات الانبثاث السرطاني من خلال قياس الإمكانات الخلوية للغزو والهجرة باستخدام إدراج ثقافة الخلايا التي تحتوي على مصفوفة البروتين. يتم تحدي الخلايا للهجرة من خلال مصفوفة البروتين والغشاء المسامي، نحو جاذبية كيميائية، ومن ثم قياسها كميا عن طريق الفحص المجهري الخفيف.

استخدام الخلايا السرطانية الثديية الماوس في مختبر الغزو الاختباري كمقياس لسلوك الخلايا الأنكجينية

تحفز العديد من الجينات غير المنظمة هجرة الخلايا السرطانية وغزوها ، مما يؤدي إلى سوء التشخيص. يعد تحديد الجينات التي تنظم هجرة الخلايا السرطانية وغزوها أمرا بالغ الأهمية. يقدم هذا البروتوكول طريقة للتحقيق في آثار زيادة التعبير عن الجين على هجرة وغزو الخلايا السرطانية في الوقت الفعلي.

القياس الكمي في الوقت الحقيقي لهجرة الخلايا السرطانية وغزوها بعد نقل mRNA الاصطناعي

يوفر هذا البروتوكول طريقة لعزل الخلايا التائية الأولية للفأر والفحص المجهري بفاصل زمني لهجرة الخلايا التائية في ظل ظروف بيئية محددة مع التحليل الكمي.

مقايسة الهجرة في الوقت الحقيقي في المختبر لخلايا الفئران الأولية CD8 + T

تعلم تقييم الهجرة الخلوية والغزو باستخدام اختبارات إغلاق الجرح وTranswell في المختبر. تساعد هذه الطرق الباحثين على دراسة حركة الخلايا في السرطان والمناعة.

في المختبر الهجرة الخليوي والغزو فحوصات

استكشف المزيد من الفيديوهات