التصوير بالموجات فوق الصوتية الموجهة داخل القلب حقن لتطوير نموذج الفأر من الثدي الانبثاث سرطان الدماغ تلاه الطولية التصوير بالرنين المغناطيسي

الهدف العام من هذا الإجراء هو استخدام إرشادات الموجات فوق الصوتية لإنشاء نموذج فأر ورم خبيث في الدماغ لسرطان الثدي يمكن مراقبته بعد ذلك بواسطة التصوير بالرنين المغناطيسي. يتم تحقيق ذلك عن طريق جمع خلايا سرطان الثدي الاستوائية في الدماغ وحقنها في البطين الأيسر. بمساعدة التوجيه بالموجات فوق الصوتية ، يتم بعد ذلك مراقبة تطور الورم داخل الجمجمة.

يتم تأكيد استخدام التصوير بالرنين المغناطيسي والنقائل عن طريق تلطيخ h و e. في نهاية المطاف ، يمكن أن يؤدي الحقن الدقيق الموجه بالصور إلى زيادة نجاح مراقبة وتكوين وتطور نقائل الدماغ لسرطان الثدي. يتيح التصوير بالرنين المغناطيسي الطولي مراقبة غير جراحية لتكوين سرطان الثدي وتطوره.

الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامه في المركز الطبي بجامعة تكساس ساوث وسترن لهذا البروتوكول جاهز M-D-A-M-B 2 31 B-R-G-F-P المزروعة في وسط DMEM يحتوي على 10٪ FBS و 1٪ جلوتامين و 1٪ بنسلين. يراقب الستربتومايسين دائما حالة الخلايا ويستبدل الوسائط كل يومين إلى ثلاثة أيام. عندما يتم الحصول على التقاء 80٪ ، عيون التربسين وجمع الخلايا.

أولا ، قم بإزالة الوسط القديم تماما بواسطة ماصة مفرغة. ثم أضف خمسة ملليلتر من PBS لغسل الخلايا برفق حتى يتم تغطية جميع الخلايا بواسطة PBS. ثم قم بإزالة الغسيل.

بعد ذلك ، أضف 1.5 مل من التربسين إلى الطبق. قم بإمالة الطبق برفق للتأكد من تغطية جميع الخلايا بالتربسين. ضع الطبق مرة أخرى في حاضنة الخلية عند 37 درجة مئوية.

انتظر دقيقة واحدة ، وراقب الخلايا تحت المجهر. إذا كانت مستديرة وعائمة ، فقد انفصلت. أضف ثلاثة ملليلتر من الوسط لوقف الهضم وماصة خليط الخلية إلى أنبوب جهاز طرد مركزي.

الطرد المركزي الخليط على حرارة 1 ، 160 جم لمدة خمس دقائق. ثم قم بإزالة الوسيط بعناية باستخدام ماصة مفرغة. بعد ذلك ، أعد تعليق الخلايا برفق في خمسة ملليلتر من الوسط الخالي من المصل باستخدام ماصة حتى لا يمكن رؤية حبيبات خلية واضحة ، ويبدو المحلول متجانسا إلى 50 ميكرولتر من خليط الخلية.

أضف 50 ميكرولترا من اللون الأزرق التريز بمجرد خلطه جيدا. أضف 10 ميكرولتر من الحصص إلى عدة شرائح لعد الخلايا. ثم احسب الخلايا من قيم عداد الخلايا.

احسب واستخدم متوسط جميع التهم الأوقية. الآن قم بعمل تعليق خلية أكثر دقة. قم بطردها مرة أخرى وأعد تعليقها عند 175،000 خلية لكل 100 ميكرولتر من الوسط الخالي من المصل.

ثم قم بتخزين الخلايا على الجليد للحقن داخل القلب. بالنسبة لهذا البروتوكول ، استخدم إناث الفئران العارية BC ، التي يبلغ عمرها من ستة إلى ثمانية أسابيع. قم بتسجيل الدخول إلى نظام التصوير وتهيئة محول الطاقة.

7 0 4 عند 40 ميغا هرتز. ابدأ دراسة جديدة واملأ مطالبات المعلومات وفقا لذلك. بعد ذلك ، قم بتخدير الفأر وتوصيل المخدر عبر مخروط الأنف.

أثناء الحقن الموجه ، اضبط درجة حرارة طاولة التصوير على 37 درجة مئوية وقم بلصق الماوس على الطاولة في وضع ضعيف. احتفظ بجل الموجات فوق الصوتية عند 37 درجة مئوية قبل التصوير وقم بتطبيق بعضها على صدر الفأر. الآن قم بتركيب محول الطاقة في الحامل وخفضه إلى عمق التصوير المطلوب.

بعد ذلك ، حرك المرحلة حتى يتم تحديد البطين الأيسر مع الشريان الأورطي الصاعد حيث يقفل المعلم المرحلة حيث يكون المنظر في أوضح. الآن ارسم 100 ميكرولتر من خليط الخلايا المبردة في حقنة سعة مليلتر واحد بإبرة قياس 22. ثبت المحقنة المحملة على حامل المحقنة.

ثم حرك المحقنة نحو الصدر. وقبل دخول الماوس ، حركه بعناية من جانب إلى آخر حتى يصبح طرف الإبرة في مجال رؤية التصوير. اضبط ارتفاع الإبرة وزاويتها لاستهداف البطين الأيسر ، وعندما تكون في موضعه ، اخترق الإبرة على الفور عبر طبقات الجلد والعضلات إلى البطين الأيسر.

تحت إشراف صورة الموجات فوق الصوتية ، فإن المؤشر على الإدخال الناجح في البطين الأيسر هو ارتداد الدم الشرياني الوردي الطازج إلى المحقنة. ثم قم بحقن خليط الخلية ببطء عند الانتهاء ، واسحب الإبرة ، وارفع محول الطاقة ، ونظف هلام الموجات فوق الصوتية بشاش مبلل. ثم حرر من الشريط وانقله إلى قفص نظيف مع وسادة مسخنة مسبقا.

راقب الماوس حتى يتعافى تماما ، وبعد ذلك افحصه يوميا لبضعة أيام. باستخدام 78 ميكرون مربع بدقة عادية ، يمكن تحديد آفات التصوير بالرنين المغناطيسي شديدة الشدة بقطر 310 ميكرون. نظرا لأن ورم خبيث في هذه الدراسة كان صغيرا جدا وكان النخر والوذمة ضئيلا ، فإن الآفة شديدة الشدة على T صورتين مرجحتين تمثل الورم حقا.

تسمح دراسات التصوير بالرنين المغناطيسي الطولية الجماعية بالتقييم غير الجراحي لنمو الورم. كان التصوير بالرنين المغناطيسي عالي الدقة قادرا على اكتشاف العديد من الآفات الصغيرة بعد ثلاثة أسابيع من الحقن داخل القلب في الأسبوع الرابع ، وأصبحت الآفات التي شوهدت في الفحص السابق أكبر. ظهرت المزيد من الآفات الجديدة على T صورتين مرجحتين.

كشف تلطيخ H و e عن آفات نقيلية منتشرة أو كشف h و e عن آفات نقيلية من النوع العنقودي. غالبا ما شوهدت الأوعية المتضخمة حول الورم مما يشير إلى حدوث تكوين الأوعية الدموية غير المنبت. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء حقن إبرة موجهة بالتصوير بالموجات فوق الصوتية في البطين الأيسر لقلب الفأر.