Name: قياس آثار البكتيريا على C. ايليجانس السلوك باستخدام مقايسة الاحتفاظ البيض (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 36 s
Description: تعلم تقنية مقايسة الاحتفاظ البيض لقياس السلوك التكاثري في Caenorhabditis elegans. تُستخدم هذه الطريقة لدراسة آثار البكتيريا الممرضة على الاستجابات السلوكية للديدان.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

فإن الكتاب أود أن أشكر يونيو ميدلتون لتوريد E. سلالات البرازية وللتوجيه مع ثقافة البكتيريا. C. وقدمت ايليجانس من قبل CGC، الذي يتم تمويله من قبل المعاهد الوطنية للصحة مكتب برامج البنية الأساسية للبحوث (P40 OD010440).

1) إعداد وسائط النمو الخيطية (NGM) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لجعل 50 لوحات، إضافة 1.5 غرام كلوريد الصوديوم، 8.5 غرام عالى النقاء آجار، و1.25 ز ببتون إلى Lflask 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أضف 487.5 مل من DH 2 O إلى القارورة. دوامة بلطف لمزج وتغطية افتتاح قارورة مع قطعة من رقائق الألومنيوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم الحل عن طريق التعقيم في الظروف القياسية (121 رطل، 120 ° C، 20 دقيقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يسمح الحل لتبرد إلى 45 درجة مئوية في حمام مائي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إلى الحل، إضافة التالية بالترتيب: 500 ميكرولتر من الكولسترول 5 ملغ / مل محلول المخزون (الذائبة في الايثانول)، 500 ميكرولتر 1 M و CaCl 2، 500 ميكرولتر 1 M MgSO 4، و 12.5 مل KPO 4 العازلة (54.15 ز KH 2 PO 4 و 17.8 ز K 2 هبو 4 في 500 مل من DH 2 O) كما هو موضح في 18. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ماصات معقمة، إضافة 10 مل من محلول أجار لكل 60 مم البوليسترين طبق بيتري. السماح لوسائل الإعلام لترسيخ في درجة حرارة الغرفة overnآيت. </li></ol> 2) إعداد مرق B E. وسائل الإعلام القولونية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خمسة لجعل 100 مل الثقافات، إضافة 5.0 غرام من Bacto تريبتون، 2.5 غرام خلاصة الخميرة، 5.0 غرام كلوريد الصوديوم إلى دورق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة عقيمة، الماء المقطر إلى الحجم النهائي من 500 مل. الحرارة الحل على طبق ساخن، مع التحريك، إلى أن حلت المواد المذابة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صب 100 مل من مرق B إلى خمس زجاجات (200 مل على الأقل حجم). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم بواسطة التعقيم الحلول في الظروف القياسية (121 رطل، 120 ° C، 20 دقيقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسمح B مرق لتبرد إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام. </li></ol> 3) البذر C. لوحات صيانة ايليجانس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد السماح لوحات NGM حتى يجف في درجة حرارة الغرفة لمدة أسبوع واحد على الأقل، تطعيم واحدة 100 مل B ثقافة مرق مع عدد قليل من مستعمرات E. القولونية (OP50). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنمو E. ثقافة القولونية عند 37 درجة مئوية خلال الليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة اثنين واحد قطرات (ما يقرب من 10081؛ ل) من OP50 الثقافة على مركز كل لوحة NGM. وعادة ما تكون مكدسة لوحات من جانب غطاء فوق. عندما pipetting ل(البذر)، تبدأ من قبل pipetting الثقافة على لوحة في أسفل كومة. العمل طريقك كل المكدس. ليس محاولة لنقل لوحات بعد البذر، لأنه من المهم أن الثقافة لا يحصل أيضا على مقربة من حواف اللوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح لوحات المصنف لتجف في درجة حرارة الغرفة لمدة أسبوع واحد على الأقل قبل استخدام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تخزين لوحات المصنف (مقلوب) في حاويات من البلاستيك مختوم في درجة حرارة الغرفة. </li></ol> 4) الحفاظ على C. ايليجانس سلالات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للحفاظ على تغذية جيدة C. الأسهم ايليجانس، استخدم دودة اختيار لنقل ثلاثة L4s أو البالغين حامل إلى جديد، المصنف NGM لوحة كل 3-4 أيام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحات مخزن (مقلوب) يفضل أن يكون داخل حاضنة عند 15-22 درجة مئوية. تم تخزين الثقافات في المقايسات وصفها في 20 ° C. C. التنمية ايليجانس هو درجة الحرارة التي تعتمد على. كما maintenaNCE ارتفاع درجات الحرارة، والوقت بين مراحل النمو النقصان. </li></ol> 5) إعداد آجار الصويا زيتية (TSA) E. البرازية الثقافة وسائل الإعلام <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لجعل 50 لوحات، وقياس 500 مل من العقيمة، الماء المقطر في دورق وتقديمهم ليغلي، مع التحريك، على موقد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 20 غرام من مسحوق TSA أجار إلى قارورة والسماح حل حل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم بواسطة التعقيم الحلول في الظروف القياسية (121 رطل، 120 ° C، 20 دقيقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يسمح الحل لتبرد إلى 45 درجة مئوية في حمام مائي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ماصات معقمة، إضافة 10 مل من محلول أجار لكل 60 مم البوليسترين طبق بيتري. السماح لوسائل الإعلام لترسيخ في درجة حرارة الغرفة بين عشية وضحاها. </li></ol> 6) إعداد مرق الصويا زيتية (TSB) E. البرازية الثقافة وسائل الإعلام <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لجعل 250 أنابيب والثقافة، وقياس 500 مل من العقيمة، الماء المقطر في دورق ودافئة على موقد مع التحريك. </lI&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 15 غرام من مسحوق أجار TSB إلى قارورة والسماح للمسحوق حل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم بواسطة التعقيم الحلول في الظروف القياسية (121 رطل، 120 ° C، 20 دقيقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يسمح حل لتبرد إلى درجة حرارة الغرفة، ثم ماصة 2 مل إلى العقيمة، 5 مل أنابيب الاختبار. </li></ol> 7) إعداد الدماغ القلب تسريب (BHI) وسائل الاعلام، مع الستربتوميسين، لE. البرازية الثقافة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس 500 مل من العقيمة، الماء المقطر في دورق وتقديمهم ليغلي، مع التحريك، على موقد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 26 غرام من BHI متوسطة إلى القارورة والسماح للحل حل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم بواسطة التعقيم الحلول في الظروف القياسية (121 رطل، 120 ° C، 20 دقيقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يسمح حل لتبرد إلى 45 درجة مئوية في حمام مائي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام تقنية معقمة، إضافة 0.5 مل من 10 ملغ / مل الستربتوميسين حل الأوراق المالية ودوامة لخلط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 10 مل من محلول لكل 60 مم البوليسترين طبق بيتري. </li><lI&gt; السماح لوسائل الإعلام لترسيخ في درجة حرارة الغرفة بين عشية وضحاها. لوحات مخزن (مقلوب) في 4 درجات مئوية حتى ساعات قليلة قبل الاستخدام. </li></ol> 8) المحافظة على E. البرازية سلالات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للحفاظ على E. الأسهم البرازية، استخدم حلقة عقيمة إلى خط المستعمرات الفردية على لوحات أجار الصويا زيتية منفصلة (TSA). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنمو الثقافات عند 37 درجة مئوية خلال الليل. لوحات مخزن (مقلوب) في كيس مختوم أو مربع في درجة حرارة الغرفة لعدة أسابيع. </li></ol> 9) إعداد E. لوحات البرازية لEIW الفحص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطعيم 2 مل ثقافة TSB مع مستعمرة من E. البرازية واحتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 20 ميكرولتر من E. ثقافة البرازية على وسط المعدة لوحة بهي، الستربتوميسين، واحتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية. </li></ol> 10) إعداد E. لوحات القولونية لEIW الفحص (لوحات التحكم) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطعيم 100 مل B-إخوانهثقافة ال مع مستعمرة من E. القولونية OP50 واحتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 20 ميكرولتر من ثقافة OP50 على مركز لوحة NGM غير المصنف والسماح لوحات المصنف لتجف في درجة حرارة الغرفة بين عشية وضحاها. </li></ol> 11) بيضة في الفحص دودة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختيار 15-20 نظموا-L4 C. ايليجانس (الشكل 1) على وسط الحديقة من البكتيريا على استعداد BHI-بكتيريا E.- البرازية لوحة. يجب الحرص على عدم نقل الكثير من OP50 إلى لوحة بهي. اختيار نفس العدد من L4s إلى عنصر تحكم NGM-OP50 لوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لوحات لمدة 40 ساعة عند 20 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 20٪ محلول التبييض. خلط مواد التبييض التجارية (6.0٪ هيبوكلوريت الصوديوم) مع حجم مناسب من الماء المقطر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 10 قطرات ميكرولتر من محلول التبييض لعشرة مواقع متميزة على غطاء من البلاستيك (من دودة أو لوحة البكتيرية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام معول دودة، دودة نقل واحدة في كل قطرة التبييض. بلطف دوامة غيض مناختيار في قطيرة التبييض للتأكد من وغسلها الدودة قبالة نهاية المعول (تأكيد عن طريق عرض قطيرة تحت المجهر تشريح). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للبشرة حل لحوالي 10 دقيقة أو حتى انفجر الديدان مفتوحة، طرد البيض (الشكل 2). يجب الحرص على عدم نقل البيض من لوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مجهر تشريح، عد البيض في كل قطرة من التبييض. </li></ol>

<ol><li>Horvitz, H. R., Chalfie, M., Trent, C., Sulston, J. E., Evans, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+and+octopamine+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Serotonin and octopamine in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Science. 216, 1012-1014 (1982).</li>
<li>Sawin, E. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Genetic+and+cellular+analysis+of+modulated+behaviors+in+Caenorhabditis+elegans+%5B%5D%22">Genetic and cellular analysis of modulated behaviors in Caenorhabditis elegans [dissertation]</a>. , Massachusetts Institute of Technology. Cambridge, MA. (1996).</li>
<li>Trent, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Genetic+and+behavioral+studies+of+the+egg-laying+system+of+Caenorhabditis+elegans+%5B%5D%22">Genetic and behavioral studies of the egg-laying system of Caenorhabditis elegans [dissertation]</a>. , Massachusetts Institute of Technology. Cambridge, MA. (1982).</li>
<li>Chase, D. L., Koelle, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+RGS+protein+function+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of RGS protein function in Caenorhabditis elegans.</a> Methods Enzymol. 389, 305-320 (2004).</li>
<li>Trent, C., Tsuing, N., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Egg-laying+defective+mutants+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Egg-laying defective mutants of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 104, 619-647 (1983).</li>
<li>Weinshenker, D., Garriga, G., Thomas, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+pharmacological+analysis+of+neurotransmitters+controlling+egg+laying+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Genetic and pharmacological analysis of neurotransmitters controlling egg laying in Caenorhabditis elegans.</a> J. Neurosci. 15, 6975-6985 (1995).</li>
<li>Waggoner, L. E., Zhou, G. T., Schafer, R. W., Schafer, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+alternative+behavioral+states+by+serotonin+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Control of alternative behavioral states by serotonin in Caenorhabditis elegans.</a> Neuron. 21, 203-214 (1998).</li>
<li>Bany, A., Dong, M., Koelle, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+cellular+basis+for+acetylcholine+inhibition+of+Caenorhabditis+elegans+egg-laying+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Genetic and cellular basis for acetylcholine inhibition of Caenorhabditis elegans egg-laying behavior.</a> J. Neurosci. 23, 8060-8069 (2003).</li>
<li>Dempsey, C. M., Mackenzie, S. M., Gargus, A., Blanco, G., Sze, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+%285HT%29%2C+fluoxetine%2C+imipramine+and+dopamine+target+distinct+5HT+receptor+signaling+to+modulate+Caenorhabditis+elegans+egg-laying+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Serotonin (5HT), fluoxetine, imipramine and dopamine target distinct 5HT receptor signaling to modulate Caenorhabditis elegans egg-laying behavior.</a> Genetics. 169, 1425-1436 (2005).</li>
<li>Leung, M. C., Williams, P. L., Bennedetto, A., Au, C., Helmcke, K. J., Aschner, M., Meyer, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caenorhabditis+elegans%3A+an+emerging+model+in+biomedical+and+environmental+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Caenorhabditis elegans: an emerging model in biomedical and environmental toxicology.</a> Toxicol. Sci. 106, 5-28 (2008).</li>
<li>Mylonakis, E., Aballay, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Worms+and+flies+as+genetically+tractable+animal+models+to+study+host-pathogen+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Worms and flies as genetically tractable animal models to study host-pathogen interactions.</a> Infect. Immun. 73, 3833-3841 (2005).</li>
<li>Schafer, W. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSchafer%2C+WR+%22WormBook%22">WormBook</a>. , WormBook. (2005).</li>
<li>White, J., Southgate, E., Thomson, N., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+of+the+Caenorhabditis+elegans+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Philos.+Trans.+R.+Soc.+Lond.+B.+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">The structure of the Caenorhabditis elegans nervous system.</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 314, 1-340 (1986).</li>
<li>Desai, C., Garriga, G., McIntire, S. L., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetic+pathway+for+the+development+of+the+Caenorhabditis+elegans+HSN+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genetic pathway for the development of the Caenorhabditis elegans HSN motor neurons.</a> Nature. 336, 638-646 (1988).</li>
<li>Garsin, D. A., Sifri, C. D., Mylonakis, E., Qin, X., Singh, K. V., Murray, B. E., Calderwood, S. B., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+model+host+for+identifying+Gram-positive+virulence+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">A simple model host for identifying Gram-positive virulence factors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 10892-10897 (2001).</li>
<li>Aballay, A., Yorgey, P., Ausubel, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salmonella+typhmurium+proliferates+and+establishes+a+persistent+infection+in+the+intestine+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Salmonella typhmurium proliferates and establishes a persistent infection in the intestine of Caenorhabditis elegans.</a> Curr. Biol. 10, 1539-1542 (2000).</li>
<li>O'Quinn, A. L., Wiegand, E. M., Jeddeloh, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burkholderia+pseudomallei+kills+the+nematode+Caenorhabditis+elegans+using+an+endotoxin-mediated+paralysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Burkholderia pseudomallei kills the nematode Caenorhabditis elegans using an endotoxin-mediated paralysis.</a> Cell. Microbiol. 3, 381-393 (2001).</li>
<li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77, 71-94 (1974).</li>
<li>Harvey, S. C., Shorto, A., Orbidans, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+genetic+analysis+of+life-+history+traits+of+Caenorhabditis+elegans+in+stressful+environments%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Evol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Quantitative genetic analysis of life- history traits of Caenorhabditis elegans in stressful environments.</a> BMC Evol. Biol. 8, 15(2008).</li>
<li>Harvey, S. C., Orbidans, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((All+eggs+are+not+equal%3A+the+maternal+environment+affects+progeny+reproduction+and+developmental+fate+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">All eggs are not equal: the maternal environment affects progeny reproduction and developmental fate in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS One. 6, e25840(2011).</li>
<li>Klass MR, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%3A+major+biological+and+environmental+factors+influencing+life+span%5BTitle%5D)+AND+%22Mech.+Ageing.+Dev%22%5BJournal%5D)">Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span.</a> Mech. Ageing. Dev. 6, 413-429 (1977).</li>
</ol>

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

الخطوات الأكثر أهمية في أداء هذا الاختبار بنجاح هي: 1) باستخدام مخزونات تغذية جيدة من C. ايليجانس، 2) زراعة أنواع من البكتيريا واحدة على لوحة فحص، 3) تحديد بدقة نظموا L4 الديدان التعرض للE. البرازية، 4) حفظ الوقت التعرض لE. البرازية متناسقة عبر جميع المحاكمات و5) تبيض الوقت يجب أن لا تتجاوز عشر دقائق لمنع تفكك البيض. لهذا الاختبار من المهم لاختيار صحي، والديدان التي تتغذى بشكل جيد. المج...

انواع معينة ايليجانس، وهو المجهرية، الدودة التي تعيش بحرية، هو كائن نموذج يستخدم تقليديا لدراسة العمليات التنموية وخلية يشير بسبب التشريح مهامها بشفافية، وتنمية تتميز بشكل جيد، تماما التسلسل الجينوم، وباختصار جيل من الوقت، والتماثل الجيني للبشر . وفي الآونة الأخيرة، C. أصبح ايليجانس كائن نموذج في مجال علم السموم البيئية والمناعة الفطرية 10، 11. هذه الديدان خنثوي التسميد الذاتي تصبح ناضجة جنسيا في غضون 2-3 أيام من الفقس من البيض. خلال دورة حياتها، C. ايليجانس يمر عبر أربع مراحل اليرقات (L1-L4)، قبل أن تصل إلى سن البلوغ. واحدة معزولة خنثى يمكن أن تنتج، في المتوسط، 300 ذرية في غضون ثلاثة أيام من ذروة الخصوبة. في التناسل ناضجة C. ايليجانس المخنثين، يتم الاحتفاظ البويضات المخصبة داخل الرحم لعدة ساعات قبل أن يوضع. الالعدد الطبيعي من البيض المخزنة في الرحم في أي وقت واحد (خلال ذروة الخصوبة) ما بين عشرة وخمسة عشر 12. عدد البيض في الرحم هي وظيفة كل من معدل إنتاج البيض ومعدل وضع البيض. يتم طرد البويضات المخصبة من الرحم عن طريق تقلص عضلات ستة عشر فرجي رتبت حول فتحة الفرج 13. motorneurons خنثى محددة (في HSN) وmotorneurons VC المشبك على عضلات فرجي التي تؤثر على انقباض العضلات وبالتالي وضع البيض السلوك 5،7،13،14. طرد البيض من الرحم يحدث نتيجة لنشاط منسقة من الخلايا العصبية والعضلات. الثقافات مختبر C. عادة ما تثار ايليجانس على نظام غذائي من غير ممرض الإشريكية القولونية OP50. في البيئة الطبيعية، C. ايليجانس تتلامس مع مجموعة متنوعة من مصادر الغذاء، مثل البكتيريا المسببة للأمراض، التي يمكن أن تكون ضارة. عندما تتعرض لمواد ضارة فيالبيئة، C. ايليجانس الاحتفاظ البيض حتى يصبح بيئة أكثر ملاءمة. يفترض هذا احتباس البيض هو محاولة لحماية ذريتها. في هذه البيضة في دودة (EIW) مقايسة، C. ويتعرض ايليجانس للبكتيريا المسببة للأمراض محتملة، المكورات المعوية البرازية، وهي موجودة في البيئة. التعرض لأشكال المسببة للأمراض من E. البرازية يمكن أن يسبب عدوى معوية الثابتة وحتى الموت في C. ايليجانس 15. وقد ثبت أن التعرض لأشكال أخرى من أشكال البكتيريا المسببة للأمراض تؤثر على البيض الاحتفاظ 16،17، ومع ذلك لم يكن كميا تأثير. وبالإضافة إلى ذلك، فإن تأثير المسببة للأمراض أقل ما يقال سلالات E. البرازية، لم تدرس السلالات التي ليست قاتلة على الفور، على سلوك وضع البيض. المقايسات EIW تنطوي على إحصاء عدد البيض الاحتفاظ بها في رحم C. ايليجانس 4. على الرغم من C. ايليجانستتسم بالشفافية، ويمكن البيض تتراكم في الرحم يكون من الصعب تحديد في حيوان سليمة. ينطوي على فحص EIW تبيض حامل الكبار C. ايليجانس التي تعرضت للبكتيريا لفترة محددة من الزمن. الحل التبييض يذوب إهاب الخارجي تاركا وراء البيض. البيض هي الانكسار لآثار التبييض بسبب وجود قشر البيض واقية. بعد التبييض، واحد هو بسهولة جدا قادرة على الاعتماد على عدد البيض التي صدرت من الرحم من الديدان على التبييض. مقايسة وصف هو وسيلة بسيطة وغير مكلفة، وسريعة لتحديد عدد البيض في الرحم في وقت واحد، وبالتالي تحديد آثار E. البرازية على الاحتفاظ البيض. هذا الاختبار يمكن أن تستخدم لقياس تأثير أنواع أخرى من البكتيريا، والسموم البيئية أو المخدرات على الاحتفاظ البيض. يحتوي هذا الاختبار أيضا على إمكانية استخدامها كشاشة للالمرضية البكتيرية.

<table><tbody><tr><td>أجار ، فائق النقاء</td><td>Affymetrix</td><td>10906</td><td></td></tr><tr><td>باكتو بيبتون</td><td>بيكتون ديكنسون</td><td>211677</td><td></td></tr><tr><td>باكتو التربتون</td><td>بيكتون ديكنسون</td><td>211705</td><td></td></tr><tr><td>ضخ القلب في الدماغ مجفف متوسط</td><td>كارولينا الإمداد البيولوجي</td><td>781781</td><td></td></tr><tr><td>C. elegans ، N2 سلالة</td><td>Caenorhabditis مركز</td> <td>علم الوراثة</td><td>http://www.cbs.umn.edu/cgc</td></tr> لوحات <tr><td>ثقافة الكوليسترول</td><td>Alfa Aesar</td><td>A11470</td><td></td></tr><tr><td>ل C. elegans</td><td>Tritech Research Inc.</td><td>T3308</td><td></td></tr><tr><td>لوحات الثقافة ل E. faecalis Fisher</td> <td>Scientific-Fisherbrand</td><td>875713</td><td></td></tr><tr><td>E. القولونية (OP50)</td> <td>مركز Caenorhabditis لعلم الوراثة</td><td>http://www.cbs.umn.edu/cgc</td> < >E. faecalis سلالات مقدمة من J. Middleton.<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> تم تأكيد جميع العزلات على أنها المكورات المعوية</td></tr> < td colspan = "4" > من خلال ملاحظة النمو على أجار المكورات المعوية (BBL) وفي مرق كلوريد الصوديوم بنسبة 6٪.<tr></td></tr><tr><td colspan = "4" > نمت جميع السلالات عند 44.5 & ordm. C وكانت سلبية الكاتلاز وتحلل الإسكولين. مبسط &nbsp; مفتاح ثنائي التفرع يعتمد على تفاعلات التصبغ والتخمير لستة سكريات & nbsp ؛ (أرابينوز ، مانيتول ، ميثيل - ألفا ؛ - جلوكوبيرانوسيد (MGP) ، ريبوز ، سوربوز وسوربيتول) مسموح به &nbsp ؛ تحديد المفترض لجميع E. سلالات faecalis (يفتقر Efs إلى التصبغ وهو أرابينوز ، MGP & nbsp ؛ والسوربوز سلبي والسوربيتول والمانيتول والريبوز الإيجابي). جميع سلالات Efs المفترضة&nbsp; تم تأكيدها باستخدام نظام API 20 STREP (Biomerieux). </td></tr><tr><td>المجهر</td><td>Motic</td><td>SMZ 168B يجب</td><td>أن يكون أي مجهر مع إضاءة مرسلة وتكبير 50X كافيا</td></tr><tr><td>كبريتات الستربتومايسين</td><td>فيشر الكواشف الحيوية</td><td>BP910-50</td><td></td></tr><tr><td>Tryptic Soy Agar (فول الصويا والكازين Digest Agar Medium) ، Difco</td><td>Becton Dickinson</td><td>236950</td><td></td></tr><tr><td>مرق الصويا Trypticase (فول الصويا والكازين Digest Medium) ، BBL</td><td>Becton Dickinson</td><td>211768</td><td></td></tr><tr><td>مستخلص الخميرة</td><td>Acros</td><td>61180-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

قياس آثار البكتيريا على<em&gt; c. ايليجانس</em&gt; السلوك باستخدام مقايسة الاحتفاظ البيض

Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay

يتأثر C. ايليجانس سلوك وضع البيض من قبل العظة البيئية مثل الأسمولية 1 والاهتزاز 2. في غياب الأغذية C. وقف ايليجانس أيضا وضع البيض والاحتفاظ البويضات المخصبة في الرحم بهم 3. ومع ذلك، فإن تأثير مصادر مختلفة من المواد الغذائية، وخصوصا البكتيريا المسببة للأمراض وخاصة المعوية البرازية، على سلوك وضع البيض لا تتميز بشكل جيد. البيضة في ودودة (EIW) الاختبار هو أداة مفيدة لقياس الآثار المترتبة على أنواع مختلفة من البكتيريا، في هذه الحالة E. البرازية، على سلوك وضع البيض. المقايسات EIW تنطوي على إحصاء عدد البيض الاحتفاظ بها في رحم C. ايليجانس 4. مقايسة EIW ينطوي تبيض نظموا، حامل الكبار C. ايليجانس لإزالة إهاب وفصل البيض المدورة من الحيوان. قبل التبييض، ويتعرضون للبكتيريا والديدان (أو أي نوع من جديلة البيئية) لفترة محددة من الزمن. بعد التبييض، واحد هو بسهولة جدا قادرة على الاعتماد على عدد من البيض الاحتفاظ داخل الرحم من الديدان. في هذا الاختبار، زيادة قابلة للقياس الكمي في الاحتفاظ البيض بعد E. التعرض البرازية يمكن قياسها بسهولة. مقايسة EIW هو فحص السلوكية التي يمكن استخدامها للكشف عن الجراثيم المحرضة أو وجود السموم البيئية. وبالإضافة إلى ذلك، قد يكون مقايسة EIW أداة للكشف عن الأدوية التي تؤثر على الموصلات العصبية مما يشير السلوك منذ وضع البيض هو عن طريق التضمين الناقلات العصبية مثل السيروتونين وأستيل كولين 5-9.

هذا الاختبار يسمح احد لتحديد عدد البيض المدورة ضمن C. ايليجانس بعد التعرض لE. البرازية. نظمت L4 تعرضوا الديدان (التي تتميز مساحة شفافة فوق الفرج، والشكل 1) إلى E. البرازية من خلال مرحلة البلوغ. بعد أربعين ساعة من التعرض للE. البرازية، وتبيض تم تنفيذها. كما تفككت بشرة في الحبرية التبييض، أصبحت أكثر وضوحا البيض (الشكل 2). وكان كميا عدد البيض الاحتفاظ بسهولة عن طريق عد أثناء عرض تحت مجهر تشريح. <p class="jove_c...

بيضة في ودودة (EIW) الاختبار هو طريقة مفيدة لتحديد وضع البيض السلوك. يمكن إجراء تعديلات في وضع البيض يكون ردا السلوكية للكائن نموذج<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em&gt; للمواد البيئية الضارة المحتملة مثل تلك التي تنتجها البكتيريا المسببة للأمراض.

قياس آثار البكتيريا على<em&gt; C. ايليجانس</em&gt; السلوك باستخدام مقايسة الاحتفاظ البيض

C. elegans egg-laying behavior is  affected by environmental cues such as osmolarity1 and  vibration2. In the total absence of food C. elegans also cease ...

measuring-effects-bacteria-on-c-elegans-behavior-using-an-egg

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

C. ايليجانس يمكن أن يوفر سلوك وضع البيض معلومات مهمة في الدراسات التنموية والإنجابية والتشريحية. يقدم هذا الفيديو الخطوات المهمة لمقايسة وضع البيض ويظهر عينة من التجربة التي يتم فيها اختبار الدواء للكشف عن السمية الإنجابية.

فحص وضع البيض: طريقة لتحديد سلوك وضع البيض ل C. ايليجانس

وهناك طريقة لتقييم كمي لاستجابة الكيميائي...

C. ايليجانس الانجذاب الكيميائي الفحص

C. elegans هو نموذج مفيد لدراسة تأثيرات الإيثانول على السلوك. نقدم اختبارًا سلوكيًا يقيس تأثيرات الإيثانول على سرعة الحركة من الديدان الزاحفة؛ يمكن قياس كل من الحساسية الأولية وتطور التسامح الوظيفي الحاد للإيثانول مع هذا الاختبار.

على الفحص لقياس آثار الإيثانول على سرعة تحرك من<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em

ويرد وصف بروتوكول أساسية لتقييم سمية المواد الكيميائية في حيوان نموذج، ايليجانس كاينورهابديتيس،. الطريقة مريحة ومفيدة لتطوير المستحضرات الصيدلانية، وكذلك فيما يتعلق بتقييم المخاطر من الملوثات البيئية المختلفة.

قياس "تأثير المواد الكيميائية" على النمو والتكاثر من ايليجانس كاينورهابديتيس

نقدم هنا، ديدان أسطوانية ايليجانس كاينورهابديتيس كنموذج مضيف تنوعاً لدراسة التفاعل الميكروبية.

ايليجانس كاينورهابديتيس السلكية-نموذج تنوعاً في فيفو لدراسة التفاعلات بين الميكروبات والمضيف

يصف هذا البروتوكول كيفيه قياس نفاذيه المعوية من الايلي+آت Caenorhabditis. هذا الأسلوب مفيد للبحوث البيولوجية الاساسيه علي الصحة المعوية المتعلقة بالتفاعل بين البكتيريا المعوية والمضيفة وللكشف لتحديد عوامل بروبيوتيك والكيميائية لعلاج متلازمة الأمعاء المتسربة وامراض الأمعاء التهابيه.

قياس اثار البكتيريا والمواد الكيميائية علي نفاذيه المعوية من اليجان

لدراسة مرافق مرافق ومرافق التفاعلات الركيزة، ونحن أداء شاشات التفاعل الاصطناعية في Elegans Caenorhabditis باستخدام تدخل الجيش الملكي النيبالي في تركيبة مع الطفرات الخفيفة أو الإفراط في التعبير عن المرافقين ورصد خلل البروتين الأنسجة محددة على مستوى الكائن الحي.

استخدام Elegans Caenorhabditis إلى الشاشة لتفاعلات Chaperone الأنسجة محددة

Caenorhabditis elegans بمثابة نظام نموذجي ممتاز مع أساليب قوية ومنخفضة التكلفة لمسح الصحة والعمر والمرونة في مواجهة الإجهاد.

طرق المسح منخفضة التكلفة لقياس العمر الافتراضي والمدى الصحي في Caenorhabditis elegans

هنا ، نقدم طريقة عامة لتحديد الصلاحية الجنينية والعدد الإجمالي للأجنة المنتجة (الحضنة) باستخدام الكائن الحي النموذجي C. elegans.

قياس الصلاحية الجنينية وحجم الحضنة في Caenorhabditis elegans

هذا الفيديو يوضح أسلوب microinjection في الغدد التناسلية من ايليجانس جيم لخلق حيوانات معدلة وراثيا.

توليد مستقرة ايليجانس جيم المعدلة وراثيا عن طريق Microinjection

تعلم تقنية مقايسة الاحتفاظ البيض لقياس السلوك التكاثري في Caenorhabditis elegans. تُستخدم هذه الطريقة لدراسة آثار البكتيريا الممرضة على الاستجابات السلوكية للديدان.

قياس آثار البكتيريا على

استكشف المزيد من الفيديوهات