Name: تجريب ذبابة الفاكهة الشم مع الفحص Y-المتاهة (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: اكتشف طريقة بسيطة لاختبار الشم في ذباب الفاكهة Drosophila melanogaster باستخدام متاهة Y. تُستخدم هذه التقنية لتقييم الاستجابات السلوكية للروائح المختلفة في علم الأعصاب والسلوك.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نشكر 4 المراجعين المجهولين لعملهم لتحسين المخطوطة. نشكر المركز الوطني للبحوث العلميه للحصول على الدعم المالي لMBG وYG، وجامعة دي بورغون وزارة البحوث الفرنسية لMMS. ويتم تمويل البحوث في مختبر YG من قبل المجلس الأوروبي للبحوث (ERC ابتداء غرانت، GliSFCo-311403)، والوكالة الوطنية دي لا بحوث (ANR-JCJC، GGCB-2010) ومجلس الدولة الجهوي دي بورغون (فابر)، وCNRS.

1. قبل بدء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الأسهم المرجعية isogenized تحمل الظواهر السلوكية مستقرة وقوية. ليس هناك قاعدة عامة لاختيار هذا السهم، حيث أن جميع الضوابط المحتملة قد تحمل الأليلات الخلفية غير المتجانسة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام هذا التحكم لسلالة تزاوج تبادلي كل الأسهم الأخرى اللازمة لخطوات لاحقة. وعادة ما تمثل هذه الخطوة backcrossing لا يقل عن 5 تمريرات متتالية من الإناث البكر واحدة (للسماح ممكن عبور أكثر من بين الكروموزومات المتماثلة) إلى 2-3 الذكور إشارة إسوي 5. هذه الخطوة مهمة لتجانس الخلفية الوراثية بين الأسهم ذبابة مختلفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحتفظ بمخزونات ذبابة الفاكهة على الدقيق العادي الذرة (9٪)، والخميرة (10٪)، والمتوسطة أجار (1.5٪) تستكمل مع المضادات الحيوية (0.4٪ الميثيل الفقرة هيدروكسي بنزوات) في 12 ساعة ضوء / دورة الظلام في 25 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقيق التجارب حسي كيميائي في غرفة التحكم في درجة حرارته (25 درجة مئوية) تحت الضوء الأحمر حتى الآن(للقضاء على مساهمة الإشارات البصرية، والتركيز على إشارات حسي كيميائي). بانتظام تجديد الهواء من الغرفة لتهوية المنطقة الواقعة بين كل تجربة. </li></ol> 2. الاستجابة الشمية باستخدام الفحص Y-المتاهة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجويع الذباب ل16-18 ساعة عند 25 درجة مئوية في أنابيب زجاجية تحتوي على منشفة ورقية مبللة قبل الاختبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الانضمام إلى موصل Y-شكل لاثنين من قوارير الزجاج وإلى قارورة بلاستيكية صغيرة (القارورة التحميل). استخدام 1 مل ماصة نصائح التي تمر عبر سدادات الرغوة لربط موصل إلى قارورة الثلاثة، والحصول على مغلقة بإحكام Y-المتاهة. قطع نهايات ضيقة من اثنين من نصائح ماصة (~ 2 مم، لتجنب أي عودة الطاير مرة واحدة جعلت من قرارها) لتشكيل اثنين من قارورة &quot;فخ&quot;، ونهاية واحدة كبيرة من طرف ماصة لتشكيل &quot;تحميل&quot; أنبوب (الشكل 1A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فقط قبل توصيل قوارير &quot;الفخ&quot; (الشكل 1B)، ومكان واحد ~ 6 مم رقة الترشيح فيكل قنينة. إضافة 40 ميكرولتر من الحل الرائحة على الورق مرشح واحد، و 40 ميكرولتر من المذيب المقابل على ورقة الترشيح الثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أعرض عشرة 4-9 الذباب بعمر يوم واحد في &quot;تحميل&quot; القارورة. لا تستخدم CO 2 التخدير أثناء هذا النقل، لما لها من تأثير قوي على السلوك 10. بدلا استخدام التبريد وجيزة على الجليد. التلاعب السليم من الذباب مخدرة المهم للحد من الضغط على المواضيع قدر الإمكان. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء سلسلة من الاختبارات Y-متاهة عند 25 درجة مئوية تحت ضوء بعيدة الحمراء (باستخدام لمبات LED للحد من مصدر التدفئة ممكن) لتجنب المثيرات البصرية إلى أقصى حد ممكن. كن حذرا بالتناوب توجهات Y-متاهات (الرائحة التي تحتوي على أنبوب على اليسار، أو على حق، وأنبوب التحميل في الجبهة أو في الظهر. الشكل 1C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسمح عدة ساعات للذباب للدخول في فخ القارورة التي تحتوي على الرائحة أو المذيبات. عد الذباب بعد 24 ساعة إلى زيادة participatiعلى ما يصل إلى أكثر من 80٪ وتوفير أقصى قدر من القيمة الشمية مؤشر (Simonnet، اتصال شخصي). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب مؤشر حاسة الشم الناتجة باستخدام الصيغة التالية: (الرقم في أنبوب رائحة - الرقم في أنبوب المذيبات) / العدد الكلي للذباب تحميلها. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل Y-متاهة انشاء النحو التالي: نقع تفكيك انشاء RBS في 35 MD بين عشية وضحاها. شطف جيدا خارجا مع مياه الحنفية. أخيرا شطف مع الماء منزوع الأيونات والسماح تجف. </li></ol> 3. التحليل الإحصائي للبيانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء اختبار ر، وANOVA في اتجاه واحد أو اتجاهين ANOVA اعتمادا على البيانات والمتغيرات. </li></ol>

<ol><li>Mombaerts, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+and+ligands+for+odorant%2C+vomeronasal+and+taste+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Genes and ligands for odorant, vomeronasal and taste receptors.</a> Nat. Rev. Neurosci. 5, 263-278 (2004).</li>
<li>Silbering, A. F., Benton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ionotropic+and+metabotropic+mechanisms+in+chemoreception%3A+%27chance+or+design%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">Ionotropic and metabotropic mechanisms in chemoreception: 'chance or design.</a> EMBO Rep. 11, 173-179 (2010).</li>
<li>Ziegler, A. B., Berthelot-Grosjean, M., Grosjean, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+smell+of+love+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Physiol%22%5BJournal%5D)">The smell of love in Drosophila.</a> Front. Physiol. 4, (2013).</li>
<li>Silbering, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complementary+function+and+integrated+wiring+of+the+evolutionarily+distinct+Drosophila+olfactory+subsystems%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Complementary function and integrated wiring of the evolutionarily distinct Drosophila olfactory subsystems.</a> J. Neurosci. 31, 13357-13375 (2011).</li>
<li>Grosjean, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+olfactory+receptor+for+food-derived+odours+promotes+male+courtship+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An olfactory receptor for food-derived odours promotes male courtship in Drosophila.</a> Nature. 478, 236-240 (2011).</li>
<li>Woodard, C., Huang, T., Sun, H., Helfand, S. L., Carlson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+olfactory+behavior+in+Drosophila%3A+a+new+screen+yields+the+ota+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of olfactory behavior in Drosophila: a new screen yields the ota mutants.</a> Genetics. 123, 315-326 (1989).</li>
<li>Semmelhack, J. L., Wang, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Select+Drosophila+glomeruli+mediate+innate+olfactory+attraction+and+aversion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Select Drosophila glomeruli mediate innate olfactory attraction and aversion.</a> Nature. 459, 218-223 (2009).</li>
<li>Budick, S. A., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Free-flight+responses+of+Drosophila+melanogaster+to+attractive+odors%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Free-flight responses of Drosophila melanogaster to attractive odors.</a> The Journal of Experimental Biology. 209, 3001-3017 (2006).</li>
<li>Martin, F., Charro, M. J., Alcorta, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+affecting+the+cAMP+transduction+pathway+modify+olfaction+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Mutations affecting the cAMP transduction pathway modify olfaction in Drosophila.</a> J. Comp. Physiol. A. 187, 359-370 (2001).</li>
<li>Barron, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anaesthetising+Drosophila+for+behavioural+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">Anaesthetising Drosophila for behavioural studies.</a> Journal of Insect Physiology. 46, 439-442 (2000).</li>
<li>Ai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acid+sensing+by+the+Drosophila+olfactory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Acid sensing by the Drosophila olfactory system.</a> Nature. 468, 691-695 (2010).</li>
<li>Becher, P. G., Bengtsson, M., Hansson, B. S., Witzgall, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flying+the+fly%3A+long-range+flight+behavior+of+Drosophila+melanogaster+to+attractive+odors%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Flying the fly: long-range flight behavior of Drosophila melanogaster to attractive odors.</a> J. Chem. Ecol. 36, 599-607 (2010).</li>
</ol>

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

ويستند لدينا بروتوكول Y-متاهة على البروتوكول هو موضح سابقا 9. ومع ذلك، ونحن نقدم اثنين من الاختلافات الرئيسية. الأولى، ونحن نستخدم نصائح ماصة ضيقة لمنع الذباب من العودة مرة واحدة قرروا دخول في قارورة تحتوي على مذيب أو المذيبات بالإضافة إلى الرائحة. هذه النصائح الضيقة هي أيضا مفيدة للحد من انتشار الرائحة في Y-المتاهة. الثانية، ونحن نستخدم أصغر قارورة التحميل لإجبار الذباب للدخول في Y-المتاهة. فمن المهم أن تكون هناك مشاركة عالية من هذه الذباب (80٪ الى 100٪ بعد 24 ساعة؛ Si...

استقبال كيميائي من خلال الذوق أو الشم هي الطريقة الحسية الرئيسية لبقاء الحيوان. أنه يعطي اشارات الحيوية اللازمة للكشف عن خطر أو مصادر الغذاء، فضلا عن التفاعلات الاجتماعية. كما أنه يساعد الحيوانات في العثور على شريك الجنس الضرورية لتكاثرها. لأكثر من 20 عاما، والبحوث المكثفة، بما في ذلك جائزة نوبل الحائز على العمل من قبل ريتشارد أكسيل وليندا باك في عام 2004 &quot;لاكتشافاتهم من مستقبلات الرائحة وتنظيم نظام حاسة الشم&quot;، وقد نفذت للكشف عن الأسس الجزيئية والخلوية لل 1،2 الشم. واحدة من النماذج الحيوانية المفضلة للعلماء لتشريح تصور حاسة الشم هي D. البطن. تشترك هذه الحشرة استراتيجية الترميز رائحة الخلوية والجزيئية مماثلة مع الثدييات. يستخدم المجتمع العلمي النماذج السلوكية المختلفة لدراسة دور عطر في هذا ذبابة الفاكهة. وتشمل هذه الاختبارات فحوصات متعدد الوسائط مثل courtshiع الاختبارات المختلفة حيث طرائق الحسية، بما في ذلك الشم، هي مهمة لانتزاع الخطوبة الذكور 3. كما وضعت فحوصات أخرى لمعالجة دور عطر بشكل أكثر تحديدا؛ وتشمل هذه T-متاهات، Y-متاهات، فخ المقايسات، الساحات أربعة الميدان والرياح والأنفاق 4،5،6،7،8. في هذه المقالة نقدم بسيطة تعديل مقايسة Y-المتاهة التي توفر الاستجابات حاسة الشم القوية باستخدام D. البطن. يستخدم لدينا مجموعة المتابعة نهاية النصائح في مخالفة للطريقة الموصوفة سابقا 9. وبالتالي، لدينا Y-متاهة ميزتان. الأولى، فإنه يتجنب أي عودة في النظام مرة واحدة جعلت الطاير خيارها. الثانية، أنه يحد من تبادل عطر في جميع مناطق Y-المتاهة. هذه الميزة الأخيرة لها أهميتها لأن ذبابة الفاكهة هي حساسة جدا لتدفق الهواء التي كثيرا ما تستخدم لتجنب التشبع الرائحة. لضبط التجريبية مجموعة المتابعة مع تدفق الهواء من شأنه أن يكون الوقت والتكلفة المستهلكة. لذلك، لدينا فحص Y-المتاهة يمثل EFficient وطريقة سريعة لاختبار أداء حاسة الشم من ذبابة الفاكهة.

<table><tbody><tr><td>ذبابة الفاكهة البوليسترين أنبوب</td><td>VWR أوروبا</td><td>734-2255</td><td>30 × 25 مم&nbsp; Y-maze</td></tr><tr><td>ذبابة الفاكهة أنبوب البورسليكات</td><td>ديجون فير</td><td></td><td>95 × 25 مم Y-متاهة</td></tr><tr><td>سدادة رغوة</td><td>Dutscher</td><td>999038</td><td> Y-maze</td></tr> Y <tr><td>موصل على شكل حرف</td><td>Y Europrix</td><td>11020605</td><td> Y-maze</td></tr><tr><td>100-1,000 & micro; l أطراف الماصة</td><td>Corning</td><td>4868</td><td>اربط أطراف الماصة التالية بالموصل على شكل حرف Y. قم بقص 2 من أطراف الماصة على بعد 65 مم من الطرف العريض ، وقم بتوصيل الطرف الضيق (باستخدام a &sim; فتح 2 مم) إلى 2 قارورة اختبار. ستحد هذه الفتحات من المنعطفات على شكل حرف U بمجرد دخول الذباب إلى الأنابيب التي تحتوي على الروائح. اقطع طرف ماصة واحد على بعد 35 مم من الطرف العريض ، وقم بتوصيله بقارورة التحميل. لمبة LED متاهة</td></tr><tr><td>Y-Far-Red</td><td>Rubin-Lacaque</td><td>0RB180238</td><td>625-630 نانومتر</td></tr><tr><td>حمض الخليك</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>45725</td><td></td></tr><tr><td>حمض فينيل أسيتيك</td><td>سيجما-ألدريتش</td><td>P16621</td><td></td></tr><tr>نكهات<td>الخميرة</td><td>الحساسة ستراسبورغ</td><td>1018880464</td><td></td></tr><tr><td>دقيق الذرة</td><td>Eurogerm</td><td>Farine de ma&iuml; s</td><td></td></tr><tr><td>أجار</td><td>كاليس</td><td>HP-697-25</td><td></td></tr><tr><td>ميثيل هيدروكسي 4 بنزوات</td><td>VWR 25605293</td><td></td><td></td> الدولية</tr></tbody></table>

تجريب<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الشم مع الفحص y-المتاهة

Testing Drosophila Olfaction with a Y-maze Assay

الكشف عن إشارات من البيئة أمر ضروري للحيوانات لضمان بقائها. لهذا الهدف، فإنها تستخدم الاشارات البيئية مثل الرؤية، mechanoreception، والسمع، وchemoperception من خلال الطعم، عن طريق الاتصال المباشر أو عن طريق الشم، والذي يمثل استجابة لجزيء متقلبة تعمل في مدى أطول. الجزيئات الكيميائية المتطايرة هي إشارات مهمة جدا بالنسبة لمعظم الحيوانات في الكشف عن الخطر، مصدرا للغذاء، أو للاتصال بين الأفراد. ذبابة الفاكهة السوداء البطن هي واحدة من النماذج البيولوجية الأكثر شيوعا للعلماء لاستكشاف أساس الخلوية والجزيئية من الشم. من أجل تسليط الضوء على قدرات الشم من هذه الحشرة الصغيرة، ونحن تصف بروتوكول خيار تعديل على أساس الاختبار Y-المتاهة المستخدمة تقليديا مع الفئران. البيانات التي تم الحصول عليها مع Y-متاهات تعطي معلومات قيمة لفهم أفضل لكيفية تعامل الحيوانات مع بيئتها المتغيرة على الدوام. ونحن نقدم بروتوكول خطوة بخطوة لدراسةأثر عطر على ذبابة استجابة استكشافية باستخدام هذه Y-متاهة الفحص.

ويبين الشكل 1D ردين ممثل باستخدام هذه Y-متاهة الفحص. كانتون-S الذكور تجنب بقوة حامض الخليك 10٪ الواحد في الماء المقطر، في حين أنها لا تجنب بشكل ملحوظ حمض فينيل الخل 10٪. وتستند هذه المقايسات في 10 ذكرا لكل تكرار وضعها معا في قارورة التحميل. هذا البروتوكول يمكن أن تؤدي أحيانا إلى الخطأ المعياري كبير من الوسط. إذا لزم الأمر، فمن الممكن للحد من هذا العيب باستخدام 20 ذكرا لكل مكررات بدلا من 10 فقط. رياضيا، واختيار فرد واحد له وزن أقل على قيمة المؤشر لأكبر حجم العينة. ...

نقدم اختبار الاختيار للكشف عن تأثير عطر على سلوك ذبابة الفاكهة باستخدام مقايسة Y-المتاهة.

تجريب<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الشم مع الفحص Y-المتاهة

Detecting signals from the environment is essential for animals to ensure their survival. To this aim, they use environmental cues such as vision, ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو توفير اختبار بسيط باستخدام متاهة Y لاختبار حاسة الشم لدى ذبابة Drosophila melanogaster. يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق تجويع الذباب لمدة تتراوح من 16 إلى 18 ساعة، ليكون لديها دافع لاستكشاف بيئات جديدة تحتوي على محفزات متطايرة. أما الخطوة الثانية من الإجراء فهي تجميع إعداد متاهة Y التي تحتوي على مصادر الروائح على ورق ترشيح، مثل حمض الأسيتيك في مذيب مقابل المذيب وحده.تتمثل الخطوة الثالثة في نقل الذباب بسرعة وبحذر إلى أنبوب التحميل. وبعد عدة ساعات، تكون الخطوة النهائية هي تسجيل موقع الذباب في المتاهة. وفي النهاية، يمكن أن تظهر النتائج استجابة تجاه المادة العطرية من خلال البيانات التي تم الحصول عليها باستخدام متاهة Y.تبادرَت إلينا فكرة هذه الطريقة عندما قررنا إيجاد وسيلة بسيطة وغير مكلفة لاختبار الاستجابة الشمية لدى الذباب. وتتمثل ميزة هذه التقنية مقارنة بالخيارات الأخرى في أنها تسمح للذباب باتخاذ قرار فيما إذا كان هناك قدر كبير من الإجهاد. ستقوم ميغان سايمون، طالبة الدكتوراه من مختبري، بشرح الإجراء. من أجل هذا البروتوكول، يجب تجهيز سلالة ذباب متجانسة ذات أنماط ظاهرية سلوكية مستقرة وقوية. وتصلح أي سلالة من هذا النوع كضابط مرجعي لاختبار الشم؛ وبالنسبة لكل سلالة وراثية ستُستخدم في التجربة، يتم تهجين السلالة عكسياً مع السلالة المرجعية لخمسة أجيال.قم بتزويج إناث السلالة التجريبية المنفردة مع عدد قليل من الذكور المتماثلة جينياً لكل عملية تهجين عكسي. وبالنسبة لتجارب الشم، يتم تربية ذباب الدروزوفيلا على وسط دقيق الذرة القياسي مع إضافة مضاد حيوي تحت دورة ضوئية 1212، وفي درجة حرارة 25 °C.يجب تنفيذ التجارب دائمًا عند 25 درجة Celsius وتحت إضاءة في أطياف الأحمر البعيد، والتي لا تراها ذبابة drosophila. كما يجب أن يكون من الممكن تهوية الغرفة بالكامل بين التجارب قبل إجراء المقايسة في صباح اليوم التالي. وفي نهاية اليوم، يتم نقل مجموعات مكونة من 10 إلى 20 خطًا تجريبيًا إلى قوارير زجاجية مع توفير الرطوبة من خلال منشفة مبللة.يجب اختبار الذباب في غضون 16 إلى 18 ساعة، وإلا فقد يموت نتيجة للجفاف أو الجوع في اليوم التالي. قم بتجميع متاهة Y. ابدأ بتوصيل الموصل الذي يتخذ شكل Y بأنبوبين زجاجيين باستخدام موصلات رغوية مثبت بها رؤوس ماصات مقصوصة، والتي تشكل القنوات؛ حيث يجعل شكلها المستدق من هذه القنوات ممرات ذات اتجاه واحد.يتم توصيل الفرع الثالث من وصلة Y بأنبوب تحميل مصنوع من الجزء الكبير من رأس ماصة، وهو ما يسمح بالمرور من قارورة التحميل إلى نقطة الاختيار في المتاهة. وتوجد قارورة زجاجية بعد كل نفق مستدق، حيث يجب تحميل إحداها بحمل عطري. تكون هذه الأحمال على شكل جرعات بحجم 40 µL مشربة في مربعات من ورق المناديل بمقاس 28 mm.يجب أن يتم التناوب عشوائياً بين أي من الأنبوبين يحتوي على المادة العطرية لإجراء الاختبار أولاً. قم بتبريد الذباب على الثلج لفترة وجيزة لإبطاء حركته. يجب أن تتم هذه العملية تحت ضوء أحمر بعيد من مصابيح LED، وفي درجة حرارة 25 degrees Celsius، قم بإسقاط مجموعة الذباب برفق في أنبوب التحميل ثم ضع ذباب الاختبار في متاهة Y.تجنب استخدام التخدير الغازي. من الضروري جداً نقل الذباب إلى أنبوب التحميل بسرعة وبرفق في آن واحد. تعد هذه الخطوة في الواقع الأصعب في هذه التجربة، إذ يجب أن يستيقظ الذباب بسرعة قبل انتشار الحشرات الأخرى في كتلة Y.يجب ترك الذباب لاستكشاف المتاهة لمدة 24 ساعة، لضمان انتقال أكبر عدد ممكن من الذباب إلى إحدى القارورتين الزجاجيتين. ويُستخدم عدد الذباب الموجود في الأنابيب المختلفة لحساب المؤشر الشمي. كما ينبغي تطبيق الطرق الإحصائية القياسية على هذه القيمة التي تم جمعها من سلوك ما يصل إلى 10 ذبابات.إذا لم تقدم 10 مجموعات من الذباب نتائج متسقة، يمكن إجراء التجارب باستخدام 20 مجموعة من الذباب. لتنظيف مكونات المتاهة، تُنقع المكونات وهي مفككة في RBS 35 MD طوال الليل. يتبع ذلك شطفها بماء الصنبور ثم شطفة نهائية بماء DI قبل تركها لتجف في الهواء.الاستجابات القياسية لمادة عطرية. باستخدام متاهة Y، تشمل هذه الاستجابات الانجذاب، أو عدم المبالاة، أو التجنب. على سبيل المثال، تتجنب ذباب cantons بشدة حمض acetic بتركيز 10%، بينما لا تتجنب حمض pheno acetic بتركيز 10%.أثناء محاولة تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر أن مقايسة الموجة هذه تمثل بيئة اصطناعية للذباب. يمكن اتباع هذا الإجراء كطريقة تكميلية، حيث يمكن إجراء مقايسات الساحة الممتلئة بالزملاء أو المقايسات الداخلية من أجل تأكيد الاستجابات الشمية للذباب والظروف المختلفة. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية اختبار الاستجابات الشمية لـ filano gaste ببساطة باستخدام مقايسة SW.

testing-drosophila-olfaction-with-a-y-maze-assay

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

في هذه المقالة الفيديو ، ونحن تصف طريقة جديدة تسمح للبناء التدرجات الرائحة مع هندستها مستقر وتحت السيطرة. باختصار نحن لتوضيح كيف يمكن استخدام هذه التدرجات للكشف عن العيوب الشمية (خشام الكامل والجزئي) ، ودراسة ملامح أكثر مكرا من السلوك الكيميائي.

عالية الدقة قياس سلوك رائحة يحركها يرقات ذبابة الفاكهة في

فحوصات لقياس وظائف السلوك الحركي والتعلم والذاكرة والقدرات...

يعاير الحركي ، والتعلم ، والذاكرة في العجز ذبابة الفاكهة نماذج من تنكس عصبي

ذبابة الفاكهة السوداء البطن هو وراثيا وسلوكيا نظام نموذج قابل للطرق التي استخدمت لفهم الأساس الجزيئي والخلوي من العديد من العمليات البيولوجية الهامة لأكثر من قرن 1. ذبابة الفاكهة قد تم استغلالها بشكل جيد للحصول على نظرة ثاقبة الأساس الجيني للسلوك الذباب.

طرق الفحص ذبابة الفاكهة سلوك

ذباب الفاكهة لديه نظام شمي معقد ، ويمكنه التمييز بين مئات الروائح ، واستخدام حاسة الشم لتوجيه القرارات السلوكية. يصف هذا الفيديو مقايسة مقياس الشم رباعي الاتجاهات ، وهي طريقة لدراسة الاستجابات السلوكية الشمية في الذباب. يوضح مقطع البروتوكول المميز كيفية التعامل مع ذباب الاختبار وما هي الخطوات الحاسمة أثناء إجراء الفحص.

مقايسة مقياس الشم رباعي الاتجاهات: طريقة لتقييم الاستجابات ذات الرائحة الكريهة في ذبابة الفاكهة

يصف هذا الفيديو طريقة لاختبار السلوك الاستكشافي الشمي في ذبابة الفاكهة، تسمى متاهة Y. يوضح مقطع البروتوكول المميز كيفية إعداد الفحص وإجرائه.

ذبابة الفاكهة فحص المتاهة Y: طريقة لتقييم الاستجابات الشمية في الذباب

يوصف طريقة لقياس الكبار ذبابة الفاكهة الذاكرة الجمعوية. ويستند الفحص على قدرة الذبابة لربط رائحة قدم مع معزز سلبي (الصدمة الكهربائية) ثم أذكر هذه المعلومات في وقت لاحق، مما يسمح الذاكرة المراد قياسها.

ذبابة الفاكهة الكبار الشم صدمة التعلم

ووصف العمودي، T-متاهة olfactometer لمعايرة الاستجابة السلوكية للالمفصليات. وolfactometer يسمح للمجرب لقياس الخيارات التي يؤديها اختبار المواضيع عندما تتعرض لحقلين رائحة المحتملة. ويمكن قياس كل من الجذب والتنافر لمن odorants مع هذا الجهاز.

الفحص العمودي اختيار T-متاهة للاستجابة لالمفصلي Odorants

في هذه المقالة الفيديو، ونحن تصف مقايسة الآلي لقياس تأثير الجوع أو الشبع على حاسة الشم التي تعتمد سلوك البحث الغذائية في الفاكهة الكبار يطير ذبابة الفاكهة السوداء البطن.

واحدة ذبابة الفحص لسلوك البحث عن الطعام في ذبابة الفاكهة

هنا ، نقدم بروتوكولا لتحديد تجنب الأفراد المجهدين. هذا النموذج قوي ولكنه سهل الاستخدام ويمكن استخدامه لتقييم تأثير الجينات والبيئة على نوع واحد من التفاعل الاجتماعي في ذبابة الفاكهة السوداء.

الفحص مباشرة للالكمي لتجنب الاجتماعي في ذبابة الفاكهة السوداء

نصف هنا طريقة الإعداد السلوكي وتحليل البيانات لفحص الاستجابات الشمية لما يصل إلى 100 ذبابة خل (ذبابة الفاكهة السوداء). يمكن استخدام هذا النظام مع محفزات شمية مفردة أو متعددة ، وقابل للتكيف مع التنشيط البصري الوراثي أو إسكات المجموعات الفرعية العصبية.

السلوكيات حاسة الشم يعاير التي تتبع الكمبيوتر<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; في Olfactometer أربعة رباعي

يرتبط اضطراب طيف التوحد (ASD) بضعف السلوك الاجتماعي والتواصلي وظهور السلوك المتكرر. لدراسة العلاقة المتبادلة بين جينات ASD والعجز السلوكي في نموذج ذبابة الفاكهة ، تم وصف خمسة نماذج سلوكية في هذه الورقة لفحص التباعد الاجتماعي ، والعدوان ، والمغازلة ، والاستمالة ، وسلوك التعود.

نماذج للتقييم السلوكي في نموذج ذبابة الفاكهة لاضطراب طيف التوحد

اكتشف طريقة بسيطة لاختبار الشم في ذباب الفاكهة Drosophila melanogaster باستخدام متاهة Y. تُستخدم هذه التقنية لتقييم الاستجابات السلوكية للروائح المختلفة في علم الأعصاب والسلوك.

تجريب

استكشف المزيد من الفيديوهات