A High Throughput MHC II Binding Assay for Quantitative Analysis of Peptide Epitopes

Regina Salvat; Leonard Moise; Chris Bailey-Kellogg; Karl E. Griswold

doi:10.3791/51308

A تجليد الفحص إنتاجية عالية MHC II لتحليل الكمي لالببتيد الحواتم

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

A High Throughput MHC II Binding Assay for Quantitative Analysis of Peptide Epitopes

A تجليد الفحص إنتاجية عالية MHC II لتحليل الكمي لالببتيد الحواتم

Full Text

15,642 Views

07:59 min

March 25, 2014

DOI: 10.3791/51308-v

Regina Salvat¹, Leonard Moise², Chris Bailey-Kellogg³, Karl E. Griswold¹

¹Thayer School of Engineering,Dartmouth College, ²Institute for Immunology and Informatics,University of Rhode Island, ³Department of Computer Science,Dartmouth College

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

يمكن فحوصات البيوكيميائية مع المؤتلف الإنسان جزيئات MHC II تقديم سريع، رؤى الكمي في تحديد حاتمة المناعية، الحذف، أو التصميم. هنا، يوصف مقايسة ملزمة الببتيد-MHC II تحجيم لوحات 384 جيدا. هذا الشكل فعالة من حيث التكلفة يجب أن تكون مفيدة في مجالات deimmunization البروتين وتصميم لقاح والتنمية.

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحديد ارتباط الببتيدات القصيرة ب معقد التوافق النسيجي الكبير البشري ، واثنين من البروتينات المناعية باستخدام مقايسة لوحة البئر 3 84 عالية الإنتاجية. يتم تحقيق ذلك من خلال إجراء فحوصات ملزمة لمنافسة مرحلة الحل الأولى مع الببتيدات ذات الاهتمام. في الخطوة الثانية ، يتم التقاط معقدين من الببتيد المعقد الكبير المتوازن بجسم مضاد لمعقد التوافق النسيجي الكبير تم تجميدهما على ألواح ELIZA عالية الارتباط.

بعد ذلك ، يتم تحضين المجمعات التي تم التقاطها بالأفيون المسمى ستربتافيدين ثم يتم غسل الستربتافيدين غير المرتبط ويتم تنشيط الأفيون الملتقط. في النهاية ، يمكن استخدام القياس الفلوري الذي تم حله بالوقت لتحديد مستويات معقد التوافق النسيجي الكبير اثنين من ببتيد التحكم الملتقط. يمكن أن توفر هذه الطريقة رؤى أولية حول الإمكانات المناعية للبروتينات المستهدفة.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos