حديثي الولادة حنوني التثقيب الكهربائي السطحية

الهدف العام من هذا الإجراء هو تسمية الأسلاف العصبية لسطح التقشير ومعالجتها وراثيا. يتم تحقيق ذلك عن طريق إدخال ماصة زجاجية مملوءة بمحلول الحمض النووي للبلازما أولا في منطقة سطح التقشير. الخطوة الثانية هي حقن الحمض النووي في الفضاء السحائي ، مع تغطية سطح القشرة.

بعد ذلك ، يتم توجيه الأقطاب الكهربائية لتوصيل التيار بشكل مناسب إلى سطح التقشير. الخطوة الأخيرة هي أن الحمض النووي يتم تكوينه بالكهرباء إلى أسلاف سطح التقشير عن طريق تطبيق التيار. في النهاية ، يمكن دمج هذه الطريقة مع تقنيات أخرى لإظهار التاريخ الطبيعي والمحددات الجزيئية لسطح التقشير ، وتكاثر السلف العصبي ، والهجرة ، و / أو التمايز.

تتمثل المزايا الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل التنبيغ الفيروسي في أن التثقيب الكهربائي أكثر أمانا ومرونة ولا يتطلب إنشاء جزيئات أو عبوات فيروسية. يمكن لهذه الطريقة الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الخلايا الجذعية العصبية والخلايا السلفية ، مثل مساهمة أسلاف سطح التقشير في الأنسجة ، ونشأة الأنسجة ، ووظيفة الدائرة العصبية. للبدء ، استخدم مجتذب الماصة لتشكيل ماصات من أنابيب شعرية زجاجية بمجرد سحبها ، قم بقص الحافة بمقص حاد.

بعد ذلك ، قم بإعداد محلول مخزون أخضر سريع بنسبة 1٪ باستخدام الماء الخالي من النوكلياز المصفى. بعد تخفيف المخزن المؤقت EDTA للحمض النووي في البلازما الخالي من السموم الداخلية ، قم بدمجه بالنسب المناسبة للمحلول الأخضر السريع بنسبة 1٪. باستخدام ماصة قياسية ، ضع الكمية المطلوبة من مزيج البلازميد المراد حقنها على قطعة من غشاء شمع البارافين كمرجع.

بعد ذلك ، باستخدام حاقن دقيق ، أدخل الماصة الزجاجية المجمعة بعناية في الأنبوب الذي يحتوي على خليط البلازميد. تجنب لمس الطرف على حواف الأنبوب لمنع الانكسار. قم بشفط المحلول في الماصة عن طريق الاتصال بقرص النقل ببطء.

بمجرد تحميل مستوى صوت كاف ، اطلب للأمام حتى يعود الضغط إلى الوضع المحايد للصفر. هيكتور باسكالز. بعد ذلك ، ضع الطرف بجوار الحقن المرجعي واستخدم دواسة القدم من الحاقن الصغير لإخراج حجم واحد.

اضبط الضغط حتى يساوي الكمية الحجم المرجعي الذي تم سحب ماصاته مسبقا. بعد معايرة حجم الحقن ، استرجع لحقن البلازميد. بمجرد تأكيد عمق التخدير ، أمسك الجرو باستخدام الإبهام والسبابة لليد الأقل هيمنة.

استخدم اليد المهيمنة لاستهداف المنطقة المرغوبة ، ويجب أن تكون نصفي الكرة القشرية والهياكل السطحية الأخرى مثل القولون العلوي مرئية بسهولة. بمجرد تحديد الموقع الصحيح، أدخل الماصة خلف الجلد والجمجمة. الحرص على تجنب الشرايين الدماغية.

لاستهداف سطح التقشير ، توقف فورا عن تقدم الماصة بمجرد اختراق الجمجمة بطرف الماصة في الموضع الصحيح ، قم بحقن محلول البلازميد باستخدام دواسة القدم للحاقن الصغير بعد الحقن ، قم بإزالة الماصة بعناية. امنع الطرف من الجفاف والانسداد بين الحقن عن طريق وضعه في قطرات الاختبار الموجودة على طبقة البارافين. كرر هذه الخطوات حتى يتم حقن جميع الجراء لزيادة التوصيل ومنع حرق الجلد.

قم بتغطية الملقط البلاتيني بثلاثة ملليمترات بهلام التثقيب الكهربائي. بعد ذلك ، اضبط الإعدادات الكهربائية للحقن في القشرة. ضع المسبار سالب الشحنة فوق المنطقة المحقونة والمسبار موجب الشحنة حول المنطقة المقابلة أسفل العين.

يجب أن يكون اتجاه القطب بزاوية 45 إلى 60 درجة بالنسبة لخط الوسط. استخدم دواسة القدم لتشغيل التيار وتثبيت الملقط في مكانه لمدة ثلاث إلى خمس نبضات. اعتمادا على عمر الجرو ووزنه ، يجب أن تستهدف النبضات الحمض النووي في خلايا سطح التقشير الأساسية.

يمكن اجتياح القطب السالب فوق منطقة الحقن. بين النبضات أو يمكن استخدام قطب كهربائي أكبر لزيادة المساحة الكهربائية مباشرة بعد التثقيب الكهربائي ، وتنظيف الجل بعناية من الجراء ووضعه تحت مصباح حراري لمدة خمس دقائق تقريبا. سوف تفقد الجراء الخنصر المحمر الطبيعي بشكل حاد في الدقائق التي تلي التثقيب الكهربائي بسبب الزرقة.

راقب الجراء لاستعادة اللون الطبيعي وبدء الحركة الطبيعية قبل إعادتها إلى أقفاصها أو حقنها في القولون العلوي. حدد موقع المنطقة المستهدفة خلفيا وجانبيا فقط ل Lambda وتقريبا عند خط الوسط ، اتبعت نفس الخطوات الموضحة للتو. مع الحقن الناجحة ، يملأ مزيج البلازميد بشكل طبيعي ملامح القولون العلوي.

عند التشغيل الكهربائي بعد حقن القولون الفوقية ، ضع مسبار القطب سالب الشحنة على المنطقة المحقونة والمسبار موجب الشحنة حول العين أو الخطم أو الذقن. في هذه الحالة ، يكون اتجاه القطب بزاوية 25 إلى 40 درجة بالنسبة لخط الوسط. تظهر هذه الصورة القشرة الجانبية الظهرية بعد التثقيب الكهربائي لبلازميدات مراسل الفلورسنت التي تعبر عن البرسيم الموسوم بالغشاء باللون الأخضر وعلامة bfp.

اثنين من البروتينات النووية موضحة هنا باللون الأحمر. تم العثور على التشعبات الواسعة في هذه الخلايا العصبية القشرية بعد شهرين تقريبا من التثقيب الكهربائي. الخلايا الإيجابية ل EGFP إيجابية BRDU مما يشير إلى أنها كانت تتكاثر أثناء إجراء التثقيب الكهربائي.

عند محاولة هذه التقنية، من المهم التركيز على الاستهداف الصحيح لسطح التقشير لتجنب تعطيل القشرة الأساسية و / أو الأوعية الدموية.