Name: تحليل الاكسدة في الزرد الأجنة (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 5 s
Description: تعلم قياس الإجهاد التأكسدي في أجنة سمك الزرد الحية باستخدام مجهر الملاحظة المجهري والتحليل الخلوي التدفقي. تتيح هذه الطريقة الكشف الكمي والنوعي عن الجذور الحرة في الأنسجة الكاملة والخلايا الفردية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

يأتي الدعم في مختبر Massimo Santoro من HFSP و Marie Curie Action و Telethon و AIRC. نشكر دافني جايس وإميليانو بانيري على القراءة النقدية للمخطوطة.

1. إعداد أدوات وحلول العامل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الحل أسماك المياه. جعل حل الأسهم عن طريق إذابة 2 غرام من أملاح البحر &quot;المحيط الفوري&quot; في 50 مل من الماء المقطر. إضافة 1.5 مل من الماء الأسماك الأسهم إلى 1 L الماء المقطر لإعداد جاهزة للاستخدام أسماك المياه (60 ميكروغرام / مل تركيز أملاح البحر النهائي). الأوتوكلاف جاهزة للاستخدام أسماك المياه قبل الاستخدام. يستخدم هذا الحل كما الزرد المتوسطة الجنين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد لميثيل الجنين في تصاعد مستمر. حل 1.5 غرام من ميثيل في 50 مل من الماء الأسماك العقيمة. تسهيل حل باستخدام المغناطيس على طبق من ضجة. قد تتطلب حل كاملة من مسحوق عدة ساعات. تحقق من الحل بالنسبة الوضوح وقسامة في أنابيب صغيرة. تخزينها في -20 درجة مئوية لمدة أشهر وذوبان الجليد من aliquots في الاستخدام. أجهزة الطرد المركزي في 950 x ج ميثيل في لمدة 5 دقائق قبل استخدام. تجنب تجميد أذاب دورات من مأخوذة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 50 مل من تريكين / إيثيل 3 أمينوبنزوات مالملح ethanesulphonate (محلول المخزون) عن طريق إذابة 200 ملغ من تريكين في 100 مل من الماء وضبط درجة الحموضة إلى 7.0 باستخدام تريس، حمض الهيدروكلوريك 1 M (الرقم الهيدروجيني 9). تخزين هذا السهم عند 4 درجة مئوية لمدة لا تزيد عن 30 يوما. تنبيه: تريكين سامة. استخدام فقا للمبادئ التوجيهية التعامل المناسبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حمل الاكسدة في الأجنة الزرد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الحل أكسدة لعام الحث الاكسدة: جعل 50 مل من محلول أكسدة بإضافة H 2 O 2 حل الأسهم (بيروكسيد الهيدروجين؛ 100 ملم) لأسماك المياه. استخدام H 2 O 2 من تركيز النهائي بين 2 مم و 100 ميكرومتر. إعداد هذا الحل قبل الاستخدام بفترة وجيزة. الحل أكسدة يمكن تطبيقها على كل من جبل بأكمله ROS-كشف وحيدة الخلية أساليب ROS-الكشف. لا تقم بتخزين هذا الحل. تنبيه: H 2 O 2 أمر خطير، وضار عن طريق الإستنشاق وإن بلع. اتصال مع المواد القابلة للاحتراق قد يسبب الحريق. التعامل تحت غطاء الدخان وارتداء بيرس المناسبةمعدات الوقاية اونال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعد حل للأكسدة المستمدة من الميتوكوندريا الاكسدة الاستقراء: جعل حل الأسهم أكسدة (5 ملم) عن طريق إذابة 3.9 ملغ من روتينون في 2 مل من ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO). إبقاء هذا الحل في درجة حرارة الغرفة في الظلام. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل روتينون محلول المخزون إلى 10 مل من الماء الأسماك لجعل جاهزة للاستخدام الحل. استخدام روتينون بتركيز بين 5-50 ميكرومتر. لا تستخدم روتينون بتركيزات أعلى من 100 ميكرومتر. بتركيزات مناسبة، وهذا الحل أكسدة يمكن تطبيقها على كل من جبل بأكمله ROS-كشف وحيدة الخلية أساليب ROS-الكشف. تنبيه: روتنون سامة وخطرة. التعامل مع البيانات التحذيرية وفقا المناسبة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حمل الاكسدة عن طريق الجينات تدق إلى أسفل: تدق إلى أسفل nrf2a التعبير الجيني في الأجنة الزرد بواسطة morpholino حقن مكروي كما ذكرت سابقا من قبل Timme-Laragy A. وآخرون، 2012 38. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حمل OXIDاطر النسبية الإجهاد بعد تلف الأنسجة: توليد هامش الجرح في زعنفة الذيل من الأجنة الزرد في 72 HPF كما هو موضح سابقا من قبل Niethammer وآخرون، 2009 39. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 5 مل من محلول ROS-الكشف عن خلية واحدة طريقة ROS-الكشف: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحل لعام كشف ROS: ذوب التحقيق الجزيئية ROS-الحساسة عامة في HBSS (محلول الملح المتوازن هانكس و) من أجل إعداد حل العاملة (نطاق التركيز: 2،5 حتي 10 ميكرومتر). يجب أن يكون مستعدا هذا الحل قبل الاستخدام بفترة وجيزة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحل للكشف محددة ROS الناجمة عن الميتوكوندريا: قبل الاستخدام بفترة وجيزة، حل مسبار ROS-الحساسة الميتوكوندريا مع DMSO صنع محلول المخزون 5 ملم. حل حل الأسهم في HBSS من أجل إعداد حل العاملة (مجموعة تركيز: 2،5 حتي 10 ميكرومتر). ملاحظة: تجنب الضوء والأكسجين تعرض حلول العمل ROS-كشف والحلول الأوراق المالية الخاصة بكل منها. حماية أنبوب من الضوء باستخدامورقائق الألومنيوم. لا تخزن أو تحقيقات إعادة استخدام الذائبة في HBSS. تخزين حلول السهم عند -20 درجة مئوية لمدة شهر. تنبيه: التعامل مع تحقيقات الجزيئية وDMSO تحت غطاء الدخان وفقا للمبادئ التوجيهية المناسبة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 5 مل من محلول ROS-كشف لكامل طريقة جبل ROS-الكشف: ذوبي عام ROS-الحساسة محلول المخزون التحقيق (استقرت في DMSO) في HBSS من أجل إعداد حل العاملة (نطاق التركيز: 2.5-5 ميكرومتر). تجنب الضوء والتعرض للاكسجين. حماية أنبوب من الضوء. إعداد هذا الحل قبل الاستخدام. لا تخزن أو إعادة استخدام هذا الحل. تنبيه: التعامل مع تحقيقات الجزيئية تحت غطاء الدخان وفقا للمبادئ التوجيهية المناسبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل 25 مل من وقف الحل بإضافة 10 مل من مصل بقري جنيني إلى 15 مل من برنامج تلفزيوني 1X. الحفاظ على محلول معقم. تخزين هذا الحل في 4 درجات مئوية. مطلوب هذا الحل الوحيد لخلية واحدة - ROS طريقة الكشف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين حاضنة الهواء الزرد في 28 و# 176؛ C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين أجهزة الطرد المركزي في 4 درجة مئوية لخلية واحدة طريقة ROS-الكشف. </li></ol> 2. التزاوج من أسماك الكبار واختيار الأجنة الزرد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعبر انشاء الكبار الزوج الزرد وفقا لبروتوكولات القياسية 40. حدد الخط المعدلة وراثيا المناسبة وفقا للاحتياجات المحددة التجريبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع البيض ووضعها في طبق 90 ملم مع أسماك المياه / الجنين المتوسط. الحفاظ على البيض عند 28 درجة مئوية حتى الأجنة وسوف تتطور وتنمو إلى مرحلة المرجوة التنموية (على سبيل المثال، 48 HPF، 72 HPF؛ HPF: التسميد آخر ساعة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شاشة لتطوير الأجنة. استبعاد كل بويضة غير مخصبة أو الأجنة المتخلفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الأجنة عن طريق إضافة 1 مل من تريكين (محلول المخزون) في 50 مل من الماء الأسماك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد تيراغرام الأجنة الفلورسنت تحت stereomicroscope. </li></ol> 3. معالجة الأجنة مع مؤكسد عامل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام لا يقل عن 30 الأجنة بين 48 ساعةالجبهة الوطنية و72 HPF في حالة مختلفة. غسل الأجنة مرتين مع المياه العذبة الأسماك من أجل إزالة تريكين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقسيم الأجنة الفلورسنت إلى ثلاثة أطباق. وضع ما لا يزيد عن 30 الأجنة / الطبق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة حل الغسيل وإضافة 10 مل من محلول أكسدة أو 10 مل من الماء الأسماك كحل السيطرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الأجنة لمدة 10 دقيقة إلى 1 ساعة عند 28 درجة مئوية. فترة الحضانة يعتمد من مستوى الإجهاد التأكسدي للأن يتسبب في أنسجة معينة. فترات قصيرة هي أفضل ما تتأثر الخلايا الاكسدة الخضوع تدريجيا موت الخلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الأجنة في طبق جديدة تحتوي على HBSS والأجنة يغسل يحوم. HBSS قبل دافئ عند 28 درجة مئوية. </li></ol> 4. الجامع جبل ROS طريقة الكشف <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الأجنة بعد العلاج أكسدة ووضع ما لا يزيد عن 10 الأجنة في أنبوب صغير. شطف مع HBSS قدر الإمكان. حماية أنبوب من الضوء باستخدام رقائق الألومنيوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1 مل من محلول ROS-الكشف عنكل أنبوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الأجنة في الظلام لمدة 15 دقيقة عند 28 درجة مئوية لتجنب التعرض للضوء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلال فترة حضانة إعداد شريحة زجاجية لتحليل الجنين كله. وضع 300 ميكرولتر من ميثيل على &quot;الاكتئاب&quot; شريحة زجاجية وانتشاره على سطح الزجاج مع تلميح ماصة. تجنب فقاعات في حين الافراج عن ميثيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في نهاية فترة حضانة، وإزالة فورا الحل ROS-كشف ويغسل مرتين مع 2 مل من HBSS. غسل الأجنة عن طريق عكس الأنبوب عدة مرات. لا ماصة أو الدوامة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأجنة نضح يصل الى ماصة باستير الزجاج. الأجنة موقف قرب افتتاح ماصة بلطف وإخراج لهم في ميثيل. توجيه الأجنة بشكل مناسب مع خط النايلون غرامة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقارنة مضان الأجنة التحكم مع الأجنة المعالجة. بدلا من ذلك، وتحديد معالم stereomicroscope مضان أو متحد البؤر المجهر بحيث يتم تصوير جميع الأجنة باستخدام نفسإعدادات التصوير. </li></ol> 5. وحيد الخلية الطريقة ROS-الكشف <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نبدأ من الخطوة: 3.5. تأكد من أن يكون لا يقل عن 35 الأجنة لكل حالة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الأجنة في طبق جديد. إزالة أسماك المياه قدر الإمكان. إضافة 10 مل من الجليد الباردة PBS 1X و 400 ميكرولتر من مثبطات البروتياز كوكتيل. dechorionate يدويا الأجنة مع ملقط وإزالة كيس الصفار مع إبرة رفيعة. ملاحظة: إزالة صفار كيس يضمن عينات نظيفة لتحليل نظام مراقبة الأصول الميدانية التالية. ويمكن تجنب هذه الخطوة وفقا لنظام مراقبة الأصول الميدانية الصك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل-yolked دي الأجنة في 24 لوحة جيدا multiwell (15 / الأجنة أيضا)، وإزالة جميع المياه الأسماك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 300 ميكرولتر من HBSS، 30 ميكرولتر كولاجيناز P، 50 ميكرولتر التربسين EDTA-في كل بئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التجانس الأجنة بواسطة pipetting بلطف صعودا وهبوطا مع طرف ماصة ضيق (1،000 ميكرولتر). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان عند 28 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة، والتجانس العينات بواسطة pipetting كل 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق disr الأنسجةuption من خلال مراقبة قسامة من جناسة في المجهر المركب. تسهيل تعليق خلية واحدة بواسطة pipetting. لا احتضان الأجنة لأكثر من 30 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقف رد الفعل من خلال إضافة 200 ميكرولتر من وقف الحل. مزيج من قبل pipetting بلطف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل تعليق الخلية في أنبوب قبل المبردة مع أسفل ضيقة. الحفاظ على أنبوب على الجليد وتجنب التعرض للضوء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 250 XG في 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة المرحلة العليا واعادة تعليق الخلايا مع الجليد الباردة HBSS بواسطة pipetting بلطف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عد الخلايا وتأكد أن لديك نفس العدد من الخلايا في كل من العينات الخاصة بك. لا تستخدم أقل من 2 × 10 6 خلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلايا الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 250 XG في 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة طاف ووقف بيليه مع 1 مل من الجليد برود HBSS تحتوي التحقيق ROS-حساسة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الأنبوب في درجة حرارة الغرفة لمدة 3 دقائق في الظلام. تختلف فترة حضانة وفقا لمستوى الاكسدة ولرانه حساسية من التحقيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الخلايا إلى أنبوب FACS. إبقاء الأنابيب على الجليد وتجنب التعرض للضوء قبل تحليل نظام مراقبة الأصول الميدانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فرز الخلايا مع خلية فارز مضان تنشيط (نظام مراقبة الأصول الميدانية). مجموعة موجات وفقا تيراغرام مضان الأنسجة (على سبيل المثال، GFP) وأطياف الإثارة / الانبعاثات من التحقيق الجزيئية المستخدمة للكشف عن ROS (على سبيل المثال، تحقيقات محددة ROS-الحساسة الميتوكوندريا، تحقيقات عامة ROS-الحساسة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل حالة، وقياس جميع العينات ضمن نفس الدورة التجريبية خلال تطبيق إعدادات نظام مراقبة الأصول الميدانية نفسها. حساب النسبة المئوية للخلايا الفلورسنت مثل متوسط ​​مكررات البيولوجية المختلفة. تحليل اثنين على الأقل مكررات لكل حالة. </li></ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

خطوات حاسمة ويتألف الإجراء للكشف الاكسدة في الأجنة الزرد الموصوفة هنا طريقتين مختلفتين. كلها طريقة التحميل ROS-الكشف هو أساسا فحص النوعية لROS-كشف، في حين يسمح للخلية واحدة طريقة ROS-كشف القياسات الكمية أكثر تحديدا (الشكل 1). كلتا الطريقتين توفر وسيلة سريعة وسهلة للتقييم في الجسم الحي ROS-الكشف على الأجنة الزرد. ومع ذلك، وكلاهما يقدم بعض الخطوات الحاسمة. <p class="jove_step" style=";te...

يتم تعريف الاكسدة تحديدا كشرط التي تنتج من الأكسدة الخلوية دولة غير متوازن. في تفاعلات الأكسدة والاختزال التي تحدث بشكل روتيني معقدة داخل الخلايا تحديد للدولة الأكسدة الخلوية. تتكون تفاعلات الأكسدة والاختزال لجميع التفاعلات الكيميائية التي تتكون في نقل الإلكترونات بين الذرات من الجزيئات البيولوجية المنتجة والحد من أكسدة الجزيئات (أي تفاعلات الأكسدة والاختزال). وحفزت هذه التفاعلات حسب الأنواع تفعيلها إلكترونيا (أي الأنواع الموالية للأكسدة)، والتي تتميز عدم الاستقرار الهيكلي المدقع وتفعيل عفوية من الإلكترونات غير متوازن التي تتبادل مع الجزيئات الحيوية المجاورة. ردود الفعل هذه غير منتظمة يؤدي إلى تلف الحمض النووي والبروتين كرسلة، وأكسدة الدهون، ويؤدي في نهاية المطاف إلى موت الخلايا 1. وقد ارتبطت زيادة مستويات الاكسدة مع الشيخوخة والتقدم من مختلف الحالات المرضية 2. الاكسدة لهاتم الإبلاغ عن أن تكون مسؤولة عن التعديلات الأوعية الدموية في مرض السكري وأمراض القلب والأوعية الدموية 3،4. إنها تلعب أيضا دورا حاسما في تنكس الخلايا العصبية في مرض الزهايمر ومرض باركنسون 5. وعلاوة على ذلك، فقد ثبت الاكسدة باعتبارها عاملا حاسما في تطور سرطان تنظم والأحداث النقيلي 6،7. بالإضافة إلى ذلك، قد الالتهاب والاستجابات المناعية انتزاع والإجهاد التأكسدي 8 مزيد من الدعم. في الخلايا الحية، وتستمد الأنواع الموالية للأكسدة من الأكسجين (ROS؛ أنواع الاكسجين التفاعلية) أو النيتروجين (RNS؛ الأنواع النيتروجين التفاعلي). ROS تشمل شق الهيدروكسيل، وأنيون الفائق (OH) (O 2 -)، وبيروكسيد الهيدروجين (H 2 O 2). وRNS الأساسي هو أكسيد النيتروز (NO). يمكن إنشاء سلسلة من الأنواع رد الفعل الثانوي بحلول التفاعلات عفوية بين:ن ROS وRNS أو المعادن الحرة أيونات 9. على سبيل المثال، وأنيون الفائق يتفاعل مع أكسيد النيتروز لتشكيل peroxynitrate (ONOO -)، في حين H 2 O 2 التفاعل مع الحديد 2 + يولد جذور الهيدروكسيل. ، وذلك بسبب قدرتها على التفاعل مع العديد من الجزيئات الحيوية، تعتبر ROS وRNS تهديدا خطيرا للحفاظ على الدولة الأكسدة الفسيولوجية 10. للحفاظ مجهزة الخلايا الدولة الأكسدة مع سلسلة من الجزيئات إزالة السموم المضادة للأكسدة والانزيمات. وديسموتاز الفائق (الاحمق)، كتالاز، الجلوتاثيون البيروكسيداز وPeroxiredoxins تشكل أساسا مضادة للأكسدة الأنزيمية-الترسانة الخلوية التي توفر الحماية من الأنواع الموالية للأكسدة بما في ذلك H 2 O 2، OH وOONO - 11. أيضا الجزيئات المضادة للأكسدة مثل فيتامين C و E، البوليفينول وCoenzymeQ10 (CoQ10) هي ذات أهمية حاسمة لإرواء ROS وخطيرة رفع أسمائهمrivatives 12،13. ومع ذلك، والإنتاج المفرط للROS وRNS، أو اختلال وظيفي في النظام المضاد للأكسدة، وينقل للدولة الأكسدة الخلوية نحو 14 الاكسدة. إلى جانب دلالة سلبية، ويمكن ROS تلعب مختلف الأدوار الفسيولوجية في خلايا المنشأ مختلفة. الخلايا تنتج عادة ROS كما يشير الجزيئات البيولوجية للتوسط الأحداث العادية مثل دفاع المضيف وإصلاح الجرح 15-17. ويتم إنتاج أنواع رد الفعل عادة في الخلايا عن طريق الانزيمات داخل الخلايا مثل أكاسيد النيتروجين (NADPH أوكسيديز) وXO (Xantine أوكسيديز) استجابة لعوامل إشارة، عوامل النمو، وتقلبات داخل الخلايا لمستويات الكالسيوم 18،19. وقد أفيد أن ROS قد تعدل تفاضلي النشاط من العوامل النووية الهامة مثل البروتين p53 أو المكونات الخلوية مثل ATM-كيناز، وهو المنظم الرئيسي للاستجابة لأضرار الحمض النووي 20. بالقياس ROS تؤثر بشدة الإشارات الخلوية عن طريق التوسط عشره الأكسدة وتثبيط البروتين phosphatases التيروزين (PTPs)، التي أنشئت كما المنظمين الحرجة من نقل الإشارة 21. وعلاوة على ذلك، ومنهجيات البروتين على أساس إثبات أن RNS مسؤولة أيضا عن التعديلات والتغييرات بروتين معين من الإشارات الجزيئية. RNS تتفاعل مع مجموعات ثيول السيستين تعديلها إلى S-nitrothiols (SNO) واثار المسارات الجزيئية يصاحب ذلك مع الحالات المرضية مثل أمراض المناعة الذاتية والتهابات 22،23. منذ تجارب زراعة الخلايا تتكاثر إلا جزئيا في العديد من العوامل التي تعمل في الجسم الحي، هو ذات أهمية كبيرة لإجراء دراسات الأكسدة في النماذج الحيوانية 24،25. لتحقيق هذا، وقد اعتبر الزرد نموذج حيواني الفقاريات مناسبة لدراسة ديناميات الاكسدة 26. الزرد هو نظام النموذج الجديد الذي يمنح العديد من المزايا لدراسة الأحداث الخلوية والجينية خلال الفقاريات ديفelopment والمرض. يمكن أن تتولد مجموعات كبيرة من الأجنة والمتاحة لتلبية الاحتياجات الأسبوعية التجريبية. وعلاوة على ذلك وضوح بصرية غير عادية من الأجنة الزرد، وكذلك صغر حجمها، وتمكن التصوير خلية واحدة وتتبع دينامية في الكائنات كلها 27. في العقد الماضي، تم إنشاء عدد كبير من المسوخ الزرد لنموذج الإنسان الحالات المرضية مثل السرطان والأمراض الوراثية 28-31. الأهم من ذلك، وقد تم إنتاج العديد من خطوط المعدلة وراثيا للسماح فرص واسعة من التلاعب الجيني والبيولوجي 32. على سبيل المثال، تستخدم خطوط الزرد المعدلة وراثيا الأنسجة محددة بانتظام لفي الدراسات المجراة. هذه السطور التعبير عن بروتين فلوري تحت سيطرة المروج المحدد، توفر القدرة على تحديد الخلايا واحد في الجسم الحي، فضلا عن التركيب التشريحي أنهم يشكلون. وقد استخدمت العديد من الدراسات السمية بالفعل رانه الزرد لتقييم تأثير المواد الكيميائية في الجسم الحي من على التوازن الأكسدة، مما يشير إلى مدى ملاءمة هذا الفقاريات بمثابة نموذج حيواني لمجال اكتشاف الأدوية والاكسدة 33-35. على الرغم من أن قد تم اختبارها بعض تحقيقات الفلورسنت لرصد الاكسدة في اليرقات الزرد 36،37، لا توجد فحوصات أنشئت لكشف وقياس مستويات الاجهاد التأكسدي في الأنسجة والخلايا الحية الزرد. نحن هنا وصف الإجراء لفي الجسم الحي الكمي الاكسدة في الخلايا من الأجنة الزرد الحية. أدوات التصوير، FACS الفرز، تحقيقات الفلورسنت والظروف المؤيدة للأكسدة يتم الجمع بين جميع لتوليد مقايسة بسيطة للكشف وتقدير من الأنواع المؤكسدة في الأجنة والأنسجة الزرد.

<table><tbody><tr><td>محلول بيروكسيد الهيدروجين</td><td>SIGMA</td><td>516813</td><td>لا تخزن التمييع</td></tr> محلول <tr><td>الملح المتوازن من هانك 1x</td><td>GIBCO</td><td>14025</td><td></td></tr><tr><td>ميثيل السليلوز</td><td>SIGMA</td><td>M0387</td><td></td></tr><tr><td>خليط ملح البحر الفوري لحوض السمك في المحيط</td><td>فوري INSTANT OCEAN</td><td>SS15-10</td><td></td></tr><tr><td>Tricaine</td><td>SIGMA</td><td>A5040</td><td></td></tr><tr><td>مسبار حساس ل ROS العام: كاشف أحمر غامق CellROX</td><td>INVITROGEN</td><td>C10422</td><td></td></tr><tr><td>مسبار حساس للرياضيات التفاعلية المحددة: MitoSOX & nbsp ؛</td><td>INVITROGEN</td><td>M36008</td><td>يذوب قارورة واحدة مع 13 & ل من DMSO</td></tr><tr><td>Hydroethidine</td><td>INVITROGEN</td><td>D23107</td><td></td></tr><tr><td>Rotenone</td><td>SIGMA</td><td>R8875</td><td>تحضير محلول مخزون 5 ملي مولار في DMSO.</td></tr><tr><td>ثنائي ميثيل سلفوكسيد</td><td>SIGMA</td><td>D2650 VAS2870</td><td></td></tr><tr><td>؛ 3-بنزيل -7- (2-بنزوكسازوليل) ثيو-1،2،3-تريازولو (4،5-د) بيريميدين</td><td>إنزولايف ساينس</td><td>BML-EI395</td><td>يذوب المسحوق في DMSO ؛ ديلويت في مياه السمك</td></tr><tr><td>بروبيديوم يوديد &nbsp ؛</td><td>المجسات الجزيئية (تقنيات الحياة)</td> <td>P3566</td><td></td></tr><tr><td>7-أمينواكتينومايسين د (7-AAD) &nbsp ؛</td><td>المجسات الجزيئية (Life Technologies)</td> <td>A1310</td><td></td></tr><tr><td>Nrf2a Morpholino</td><td>GeneTools</td><td>5'-CATTTCAATCTCCAT CATGTCTCAG-3'Ref</td><td>: Timme-LaLaragy et al.; 2012 (PMID: 22174413); Kobayashi et al.; 2002 (PMID: 12167159)</td></tr> <tr><td>كولاجيناز بي</td><td>روش</td><td>11213857001</td><td>قم بإذابة المسحوق عند 100 مجم / مل في HBSS المعقم. تخزين الكميات عند -20 درجة ؛ C</td></tr><tr><td>محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)</td><td>GIBCO</td><td>10010-056</td><td></td></tr><tr><td>مصل الأبقار الجنينية&nbsp;</td><td>جيبكو</td><td>10082-147</td><td></td></tr><tr><td>أقراص كوكتيل مثبطة للبروتياز كاملة</td><td>ROCHE</td><td></td><td>قم بإذابة قرص واحد في 1 مل من الماء</td></tr><tr><td>0.5٪ Trypsin-EDTA (10x) ، بدون فينول أحمر</td><td>GIBCO</td><td>15400-054</td><td>تحضير محلول عمل 1x قبل الاستخدام</td></tr><tr><td>مجهر مركب &nbsp ؛</td><td>ZEISS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>مجهر ستيريو مع إضاءة الفلورسنت</td><td>كاميرا نيكون</td><td>AZ100</td><td></td></tr><tr><td></td><td>برنامج ZEISS</td><td>AxioCamMRm</td><td></td></tr><tr><td>للحصول على الصور الفلورية</td><td>ZEISS</td><td>ZEN 2011</td><td></td></tr><tr><td>فارز الخلايا المنشط</td><td>بالفلورة BD FACSCalibur</td><td></td><td></td></tr><tr><td>الطرد المركزي&nbsp;</td>أنابيب <td>Eppendorf</td><td>5417R</td><td></td></tr><tr><td>FACS&nbsp;</td><td>BD</td><td>342065</td><td></td></tr><tr><td>لوحة Multiwell&nbsp;</td><td>BD Falcon</td><td>353047</td><td></td></tr><tr><td>أطباق بتري معقمة وغير معالجة 90 مم</td><td>VWR</td><td>391-1915</td><td></td></tr><tr><td>مجهر متحد البؤر</td><td>لايكا</td><td>لايكا SP5</td><td></td></tr></tbody></table>

تحليل الاكسدة في الزرد الأجنة

Analysis of Oxidative Stress in Zebrafish Embryos

مستويات عالية من أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) قد يسبب تغييرا في دولة الأكسدة الخلوية نحو حالة الاكسدة. يسبب هذا الوضع أكسدة الجزيئات (الدهون والحمض النووي، والبروتين)، ويؤدي إلى موت الخلية. الاكسدة كما يؤثر على تطور العديد من الحالات المرضية مثل مرض السكري، retinopathies، تنكس عصبي، والسرطان. وبالتالي، فمن المهم تحديد الأدوات اللازمة لتحقيق ظروف الإجهاد التأكسدي ليس فقط على مستوى الخلايا واحد ولكن أيضا في سياق الكائنات كلها. هنا، ونحن نعتبر الجنين الزرد باعتبارها مفيدة في نظام الجسم الحي لأداء مثل هذه الدراسات وتقديم بروتوكول لقياس الإجهاد التأكسدي في الجسم الحي. الاستفادة من الفلورسنت تحقيقات ROS وخطوط الفلورسنت المعدلة وراثيا الزرد، ونحن نطور طريقتين مختلفتين لقياس الاكسدة في الجسم الحي: ط) و&quot;الجنين كله طريقة ROS-كشف&quot; لقياس النوعية من الاكسدة والثاني) ل&quot;وحيدة الخلية ROS طريقة الكشف &quot;عن القياسات الكمية من الاكسدة. هنا، علينا أن نظهر مدى فعالية هذه الإجراءات عن طريق زيادة الاكسدة في الأنسجة من قبل وكلاء أكسدة والأساليب الفسيولوجية أو وراثية. هذا البروتوكول هو قابلة للشاشات الوراثية إلى الأمام، وسوف تساعدك العلاقات عنوان السبب والنتيجة من ROS في النماذج الحيوانية من الأمراض المرتبطة الاكسدة مثل الاضطرابات العصبية والسرطان.

من خلال تطبيق الأسلوب هنا وصفها، ويمكن قياس بسهولة وكشف الاكسدة (ومستويات ROS) في الأنسجة الجنينية الزرد. بعد عبور الزرد الكبار، يتم جمع البيض ويسمح لتطوير عند 28 درجة مئوية إلى 72 ساعة بعد الإخصاب (HPF). من أجل حمل الاكسدة، نقترح نهجين مختلفين: 1) معالجة الأجنة مع الكواشف قوية مؤيدة للأكسدة أو 2) تشجيع تشكيل ROS بعد إصابة الأنسجة. في النهج الأول، قمنا بتوظيف اثنين من الكواشف مختلفة وفقا للاحتياجات المحددة: بيروك...

هنا نبلغ عن بروتوكول لقياس الإجهاد التأكسدي في أجنة أسماك الزرد الحية. يسمح هذا الإجراء بالكشف عن أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) في كل من أنسجة الجنين الكاملة ومجموعات الخلايا الواحدة. سيقوم هذا البروتوكول بإجراء تحليلات نوعية وكمية.

High levels of reactive oxygen species (ROS) may cause a change of cellular redox state towards oxidative stress condition. This situation causes ...

الهدف العام من التجربة التالية هو قياس الإجهاد التأكسدي نوعياً وكمياً في أجنة سمك الزيبرا الحية. ويتم تحقيق ذلك عن طريق إضافة محلول مؤكسد إلى الأجنة المجهزة لاستحثاث الإجهاد التأكسدي، أو عن طريق إحداث جرح عند حافة الزعنفة الذيلية للجنين. بعد ذلك، يتم معالجة الأجنة للكشف عن الإجهاد التأكسدي إما بطريقة الخلية الواحدة أو بطريقة التثبيت الكامل.بعد ذلك، يتم تحضين التحضيرات مع مسبار كشف Ross. ويمكن أن تُظهر النتائج مقدار الإجهاد التأكسدي ومستوى Ross بناءً على المجهر confocal للعينات الكاملة أو تحليل التدفق الخلوي الفلوري للخلايا المفردة. وتتمثل الميزة الرئيسية لهذه التقنية مقارنة بالطرق الحالية مثل immuno Fluor لعلامات الإجهاد التأكسدي في أنها تتيح الكشف الخام في سياق كائن حي والتقدير الكمي على مستوى الأنسجة المفردة.يمكن لهذه الطريقة أن تساعد في الإجابة على أسئلة رئيسية في مجال الأبحاث الأساسية، مثل استكشاف ظروف الإجهاد التأكسدي في سياق حالة مرضية. قد يواجه الأفراد الجدد في هذا الإجراء صعوبات بسبب التلف العرضي للأنسجة، لأن المجسات الجزيئية الخام الحساسة قد تكون مصدراً غير مقصود للحموضة. ونظراً لأن المستويات العالية من الإجهاد التأكسدي تؤدي إلى موت الخلايا، بينما قد يصعب اكتشاف المستويات المنخفضة جداً من خلال الممارسة والتجريب، فإن هذه المشكلات لن تظهر إلا عند تحضير محلول تحفيز الإجهاد التأكسدي للميتوكوندريا المكون من rot known في DMSO؛ حيث يجب تحضيره باستخدام مخزون rot known بتركيز يتراوح بين 5 و 50 µM ولا يتجاوز أبداً 100 µM، لأن rotten known سام وخطير.يرجى مراعاة الاحتياطات الموضحة. يجب ألا يتعرض محلول المسبار الخاص بالكشف عن ثقب Mount Ross لأي ضوء أو أكسجين أثناء تحضيره، كما يجب تحضيره حديثاً لطريقة الكشف عن Ross في خلية واحدة. كما يجب تحضير محلول إيقاف مكون من FBS في PBS وحفظه عند درجة حرارة أربعة درجات مئوية.تشمل التجهيزات الأخرى ضبط حاضنة هواء أسماك الزيبرا على 28 درجة مئوية، وبالنسبة لطريقة الخلية الواحدة، يتم تبريد جهاز الطرد المركزي إلى أربع درجات مئوية. يتم إجراء عمليات تهجين أسماك الزيبرا وجمع الأجنة والتخدير. وباستخدام المنهجية القياسية، يتم جمع الأجنة المطلوبة في الفترة ما بين 48 و 72 ساعة بعد الإخصاب.بعد تخدير الأجنة، اغسل المخدّر مرتين، ثم ضع الأجنة في ثلاثة أطباق بحيث لا يتجاوز عدد الأجنة 30 في الطبق الواحد للكشف المباشر عن الخلايا المفردة. اجمع ما لا يقل عن 35 جنيناً لكل حالة في أطباق متعددة. بعد ذلك، أضف 10 milliliters من محلول المؤكسد أو استخدمه كعنصر تحكم سلبي.أضف 10 milliliters من الماء، ثم انتظر من 10 إلى 60 دقيقة بينما يتم تحضين الأجنة عند 28 degrees Celsius. قم أيضاً بتسخين HBSS مسبقاً إلى 28 degrees Celsius من أجل عملية الغسل. بعد التحضين، انقل الأجنة إلى طبق جديد يحتوي على HBSS دافئ وقم بتحريكه بحركة دائرية.بعد ذلك، ابدأ إما بعملية الكشف عن Ross في العضو كاملاً أو على مستوى الخلية الواحدة. وهناك خيار أكثر محاكاة للوظائف الفسيولوجية وهو توليد الإجهاد بعد تلف الأنسجة باستخدام تقنية جرح الزعنفة الذيلية التي وصفها NI Tomer وزملاؤه. بعد المعالجة بالمؤكسدات، انقل مجموعات تصل إلى 10 أجنة إلى أنابيب صغيرة.اشطفها جيداً باستخدام HBSS واحمهِا من الضوء باستخدام ورق القصدير. بعد ذلك، أضف مليلتراً واحداً من محلول الكشف الخام إلى كل أنبوب، واترك الأنابيب لتحضن لمدة 15 دقيقة عند 28 درجة Celsius أثناء عملية التحضين. قم بتجهيز شريحة زجاجية لتشمل كلاً من الحالة الضابطة والحالة التجريبية.قم بتغطية شريحة ذات تجويف بـ 300 µL من ميثيل السليلوز. تجنب تكوين فقاعات عند إخراج ميثيل السليلوز. بعد تحضين الأجنّة، استبدل المحلول الموجود في الأنابيب بسرعة بـ 2 mL من HBSS، ثم اقلب الأنابيب عدة مرات لغسل الأجنّة.بعد ذلك، يتم سحب الأجنة إلى طرف الماصة الدقيقة (micro pipette) ثم دفعها برفق إلى الشريحة المعالجة. يتم توجيه الأجنة باستخدام خيط نايلون رفيع، ثم البدء في استخدام مجهر مسح فلوري أو مجهر كونفوكال (confocal scanning microscope) للتحليل. تأكد من تحليل جميع الأجنة باستخدام نفس الإعدادات.انقل الأجنة من محلول غسيل HBSS إلى طبق جديد، مع إزالة أكبر قدر ممكن من المحلول. الآن، قم بإزالة الغلاف الخارجي للأجنة يدويًا. هذه الخطوة ضرورية حقًا لتفكيك الأجنة إلى خلايا مفردة.بعد ذلك، انقل الأجنة إلى طبق يحتوي على 24 بئراً، مع وضع 15 جنيناً في كل بئر. ومن الأفضل ملء ثلاث آبار لكل حالة تجريبية. بعد ذلك، قم بإزالة جميع المحاليل واستبدلها بـ 300 microliters من HBSS و 30 microliters من collagenase p و 50 microliters من trypsin EDTA.باستخدام طرف ماصة سعة 1 مل، قم بتجانس الأجنة عن طريق التقطير. وبمجرد تحضير جميع الآبار، انقل الطبق إلى درجة حرارة 28 °C لمدة 20 دقيقة على الأقل، مع إجراء عملية التقطير للعينات كل خمس دقائق لضمان التجانس الجيد. ضع أيضاً بعض أنابيب الطرد المركزي الدقيقة على الثلج لجمع الأنسجة عندما تصبح جاهزة.عند الدقيقة 20، خذ عينة وافحص تحت المجهر ما إذا كان النسيج قد تفكك إلى معلق من الخلايا المفردة. إذا لم يحدث ذلك، استمر في الحضن لمدة تصل إلى 30 دقيقة إجمالاً. عندما يصبح النسيج جاهزاً، أوقف التفاعل بإضافة 200 µL إضافية من محلول الإيقاف.امزج هذا مع TRI باستخدام رأس ماصة سعة 1 mL. بعد ذلك، انقل محتويات كل بئر إلى أنبوب طرد مركزي دقيق مبرد مسبقاً، واحفظ هذه الأنابيب على الثلج بعيداً عن الضوء. ثم قم بطرد العينات مركزياً عند 250 ×g لمدة خمس دقائق عند درجة حرارة 4 °C.ثم يتم إزالة الطافي عن طريق الشفط. أعد تعليق كتلة الخلايا في محلول HBSS مبرد بالثلج مع الرج اللطيف، وتحقق من أن المعلق يحتوي على 2 مليون خلية على الأقل. بعد ذلك، أعد تعليق الخلايا في ملليلتر واحد من محلول المسبار الحساس الخام.حضنها في درجة حرارة الغرفة وفي الظلام لمدة ثلاث دقائق تقريبًا. يتم ضبط وقت التحضين هذا تجريبيًا. بعد ذلك، انقل الخلايا إلى أنابيب fax محمية من الضوء.باشر بإجراء تحليلات faxes للكشف عن العلامة المعدلة وراثياً. استخدم الفلورة وفلورة مسبار Ross أثناء التحليل. احسب دائماً مستويات الفقد كزيادات مضاعفة (fold increases) مقارنة بالعينات الضابطة من أجل معايرة الفلورة الخلفية.استُخدم كشف Mount Ross لفحص تراكم بيروكسيد الهيدروجين في موقع الجرح. وتمت مقارنة الذيول السليمة والمصابة بعد 20 دقيقة من المعالجة بالمؤكسد. وقد رُصدت إشارة غير نوعية في كلتا الحالتين.أُجريت التجربة ذاتها مع معالجة الأجنة مسبقاً لخفض مستويات بيروكسيد الهيدروجين. وقد كشف استخدام مثبط OX VAs 28 70 أن الإشارات المكتشفة كانت بالفعل تعتمد على تراكم Ross rot. كما تم فحص الأجنة المعالجة المعروفة عن طريق التثبيت الكامل (whole mount).يمكن تحديد المناطق التشريحية تحت تكبير عالٍ. وقد أنتج ذلك Ross كما هو موضح من خلال عد الخلايا الموجبة لـ Ross عن طريق الفاكس، حيث تم إجراء ذلك للكشف عن Ross في خلية واحدة. أُجري هذا التحليل دون إدراج الخلايا الميتة. مجموعة الضبط.تم أيضاً تحليل الخلايا غير المعالجة. وقد جعلت مقارنة هذه النتائج عملية تقدير كمية تراكم Ross سهلة للغاية. كما أثبت هذا الاختبار كفاءة ممتازة لاختبار أي عدد من التلاعبات التجريبية.بمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن إتمامها في غضون 90 دقيقة إذا نُفذت بشكل صحيح. يجب تذكر أن العمل باستخدام المجسات الجزيئية قد يكون خطيرًا للغاية ويتطلب اتخاذ الاحتياطات اللازمة؛ لذا يجب دائمًا ارتداء القفازات أثناء تنفيذ هذا الإجراء.

analysis-of-oxidative-stress-in-zebrafish-embryos

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

الزرد الفقاريات تمثل نموذجا القوية التي كانت غير مستغلة للدراسات التمثيل الغذائي. نحن هنا وصف وسيلة سريعة...

الأيض تحليل الملف من الأجنة الزرد

يوضح هذا الفيديو فحصا قائما على التألق المناعي شديد الحساسية للكشف عن الضرر التأكسدي الناجم عن PM2.5 في قلوب أجنة أسماك الزرد عن طريق قياس مستويات 8-OHdG و γH2AX ، والتي تشير إلى تلف الحمض النووي وفواصل الحمض النووي المزدوجة ، على التوالي.

مقايسة التألق المناعي للكشف عن تلف الحمض النووي بوساطة PM2.5 في أجنة الأسماك

يمكن أن تؤدي بعض الاضطرابات الجينية أو التعرض للسموم إلى تعطيل عمليات النمو الطبيعية مما يؤدي إلى موت أنواع معينة من الخلايا. يكشف تحليل Caspase 3 المنشط عن طريق التألق المناعي الكامل في أجنة أسماك الزرد عن توطين خاص بالمرحلة والأنسجة للخلايا التي تخضع لموت الخلايا المبرمج على وجه التحديد.

تحليل موت الخلايا المبرمج في أجنة أسماك الزرد عن طريق التألق المناعي الكامل للكشف عن الكاسباز المنشط 3

Zebrafish هي كائن حي نموذجي مهم لدراسة توازن الطاقة.  من خلال استخدام مؤشر الأكسدة والاختزال الحساس NADH2 ، alamar Blue ، قمنا بتطوير اختبار يقيس معدل الأيض ليرقات الزرد في شكل 96 لوحة بئر ويمكن تطبيقه على اكتشاف الأدوية أو الجينات.

عالية الإنتاجية<em&gt; دانيو Rerio</em&gt; طاقة الإنفاق الفحص

التعرض لteratogens قد يسبب تشوهات خلقية. الزرد مفيدة لتحديد إمكانية ماسخة للمواد الكيميائية. ونحن لشرح فائدة الزرد عن طريق تعريض الأجنة إلى مستويات مختلفة من النتريت وأيضا في أوقات مختلفة من التعرض. وتبين لنا أن النتريت يمكن أن تكون سامة وتسبب تشوهات تنموية حادة.

الزرد نموذجا لتقييم إمكانات المسخية من النطرون

وتستخدم أجنة سمك الحمار الوحشي لتقييم سمية المركبات الكيميائية. وهي تتطور خارجيا وحساسة للمواد الكيميائية، مما يسمح بالكشف عن التغيرات الفينوتية خفية. تتطلب التجربة فقط كمية صغيرة من المركب، والتي تضاف مباشرة إلى لوحة تحتوي على الأجنة، مما يجعل نظام الاختبار فعالة وفعالة من حيث التكلفة.

التقييم السريع لسمية المركبات الكيميائية باستخدام أجنة سمك الحمار الوحشي

يستخدم هذا البروتوكول فحص المناعة للكشف عن تلف الحمض النووي الناجم عن PM2.5في القلوب التشريحية لأجنة حمار وحشي.

باستخدام Immunofluorescence للكشف عن PM2.5-الناجم عن تلف الحمض النووي في قلوب الأجنة حمار وحشي

تم استغلال الزرد مؤخرا كنموذج للتحقق من صحة معدلات الإشعاع المحتملة. يصف هذا البروتوكول الخطوات التفصيلية لاستخدام أجنة الزرد في تجارب الفحص القائمة على الإشعاع وبعض النهج القائمة على الملاحظة لتقييم تأثير العلاجات والإشعاع المختلفة.

يرقات الزرد كنموذج لتقييم المحسسات الإشعاعية المحتملة أو الواقيات

يصف هذا البروتوكول إجراء فحص الأدوية في يرقات الزرد بعد 3-7 أيام من الإخصاب متبوعا بالتقييم المورفولوجي.

فحص الجزيئات الصغيرة واختبار السمية في يرقات الزرد في المراحل المبكرة

اعتلالات RASopathies هي متلازمات وراثية متعددة الأجهزة ناتجة عن فرط تنشيط مسار RAS-MAPK. تظهر المتغيرات المسببة للأمراض التي يحتمل أن تنتظر التحقق من الصحة باستمرار بينما تحد البينات قبل السريرية الضعيفة من العلاج. هنا ، نصف بروتوكولنا في الجسم الحي لاختبار مستويات تنشيط ERK المرتبطة ب RASopathy والتحقق من صحتها وتعديلها الدوائي أثناء التطور الجنيني عن طريق التصوير الحي FRET في أسماك الزرد الصحفية في سن المراهقة.

بروتوكول فعال لتقييم تعديل نشاط ERK في نماذج متلازمة نونان المبكرة لأسماك الزرد عبر الفحص المجهري الحي FRET والتألق المناعي

يصف هذا البروتوكول طريقة الفحص المجهري الضوئي منخفضة التكلفة لتقييم مورفولوجيا القلب ووظيفته في أجنة الزرد ، مما يتيح تقييما قابلا للتكرار لسمية القلب التنموية دون الحاجة إلى أنظمة تصوير متقدمة.

التصوير الوظيفي للقلب في أجنة أسماك الزرد باستخدام الفحص المجهري القياسي وتحليل الفيديو: تطبيقات في البحوث البيئية والطبية الحيوية

تعلم قياس الإجهاد التأكسدي في أجنة سمك الزرد الحية باستخدام مجهر الملاحظة المجهري والتحليل الخلوي التدفقي. تتيح هذه الطريقة الكشف الكمي والنوعي عن الجذور الحرة في الأنسجة الكاملة والخلايا الفردية.

تحليل الاكسدة في الزرد الأجنة

استكشف المزيد من الفيديوهات