Name: وهناك طريقة منخفضة التكلفة لتحليل مثل الاستيلاء آخر والحركة في ذبابة الفاكهة (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-19T15:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: اكتشف طريقة تحليل السلوك الحركي والنوبات في ذبابة الفاكهة Drosophila melanogaster باستخدام كاميرا ويب وبرامج تحليل متخصصة. تُمكّن هذه التقنية الباحثين من دراسة الآثار الوراثية والدوائية على الحركة بدقة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

يود المؤلفون أيضا أن أعرب عن الشكر لكريس الشعلة، ستيفن ماكيني، لورا توبين، جيني Gilbreath واشلي Olley، ميغان هوفر، وميغان هايد لعملهم في صقل هذا الاختبار.

1. إعداد الفرد للتنقل الذباب الفحص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الذباب من خلال استغلال برفق في قارورة فارغة الفردية وغطاء قارورة مع المكونات القطن. تسمح الذباب على الجلوس دون عائق 20-30 دقيقة قبل المراقبة. من المهم أن لا تخدير الذباب في غضون الساعات قبل الملاحظة السلوكية كما وجدت دراسات سابقة التعرض التخدير يمكن أن يغير السلوك بالمقارنة مع الذباب unanesthetized 14. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بلطف اضغط على ذبابة من القارورة ووضع الذباب الفردية تحت 5 سم القطر بيتري غطاء طبق (5 ملم عالية) مع الشقوق الصغيرة للسماح بمرور الهواء. تضيء من دون مراقبة والذباب باستخدام كاميرا ويب مثبتة فوق طبق بيتري. </li></ol> 2. إعداد الفردية الذباب عن الاستيلاء الفحص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إطعام القديمة الذباب الحساسة الاستيلاء لمدة يومين اما المعيار الإعلام الخميرة / الذرة / أجار أو وسائل الإعلام مختلطة القياسية مباشرة مع المخدرات. للبيانات المعروضة هنا، تم تغذية الذباب إما الذهاب 1و وسائل الاعلام القياسية أو 1 غرام من وسائل الاعلام القياسية مختلطة مع 25 ملغ من الميتفورمين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد أن غذت الذباب لمدة يومين على وسائل الإعلام أو وسائل الإعلام بالإضافة إلى المخدرات، ونقل لهم من قبل التنصت لطيف في قارورة فارغة الفردية وغطاء قارورة مع المكونات القطن. تسمح الذباب على الجلوس دون عائق لمدة 20 دقيقة قبل المراقبة. من المهم أن لا تخدير الذباب في غضون الساعات قبل الملاحظة السلوكية كما وجدت دراسات سابقة التعرض التخدير يمكن أن يغير السلوك بالمقارنة مع الذباب unanesthetized 14. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دوامة قارورة الفردية التي تحتوي على ذبابة واحدة على vortexer المختبر باستخدام أعلى الإعداد لمدة 10 ثانية. وضع ذبابة يجمد على ورقة بيضاء فارغة من الورق مباشرة تحت كاميرا ويب مثبتة فوق الورق. </li></ol> 3. تسجيل الفيديو <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل حركة جيش تحرير السودان أو باستخدام برنامج حاسوبي HandyAvi <a href="http://www.azcendant.com/download.htm">http://www.azcendant.com/download.htm</a> . يستخدم هذا البرنامج لكاميرا ويبالتقاط الصور بناء على إعدادات المستخدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد الخيار الصور الوقت الفاصل بين تحت علامة التبويب لقطة، عندما يفتح النافذة، حدد الكاميرا كجهاز التقاط. بالنسبة لمعظم التجارب حجم إطار الفيديو 640 × 480 كافية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختر إنتل IYUV الترميز للضغط واختيار 0.1 ثانية / الإطار لفحص الاستيلاء أو اختيار 0.1-0.5 ثانية / الإطار لفحص الحركة. ضمن علامة التبويب خيارات متقدمة، حدد إنشاء ملف صورة BMP. لكل التقاط وتحديد مجلد لبرنامج لتخزين الصور التي يستغرق (مكدس الصورة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع ذبابة ميتة على ورقة من الورق. انقر على مربع إعدادات الفيديو وضبط إعدادات تحت علامة التبويب إعدادات الجهاز حتى لا يكون هناك خلفية بيضاء مشرقة وتباين واضح مع الذبابة أكثر قتامة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر على زر البداية لبدء التسجيل. بمجرد الانتهاء من فترة التسجيل، انقر على زر التوقف. يجب أن تكون رزمة الصورة الآن في المجلد المحدد. ملاحظة: قبل التسجيل، تأكد من أن فلدير اختيارها للصورة مكدس فارغ. </li></ol> 4. تحليل البيانات باستخدام يماغيج <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الصورة البرمجيات الحرة ومفتوحة يماغيج تجهيز المعاهد الوطنية للصحة، والتي يمكن تحميلها في <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html">http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html</a> . ملاحظة: بالإضافة إلى تنزيل البرنامج، يجب تحميل Multitracker في المكونات وتركيبها كما هو مبين في <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html">http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html</a> . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استيراد صورة مكدس في يماغيج من خلال النقر على علامة التبويب ملف ثم تحديد استيراد → تسلسل الصور. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد المجلد الذي يحتوي على الصورة المكدس، تسليط الضوء على واحدة من الصور وحدد فتح. سيتم فتح مربع الحوار خيارات تسلسل. انقر أسماء ترتيب عدديا ثم اختر موافق وسيتم تحميل الصورة إلى كومة يماغيج. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عتبة جميع الصور بحيث يكون لكل يتكون من خلفية بيضاء مع الذبابة يجريتحويلها إلى نقطة سوداء. لبدء هذه العملية، تحويل الصورة إلى تنسيق 8 بت من خلال تحديد نوع → 8 بت ضمن علامة التبويب صورة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر فوق علامة التبويب صورة مرة أخرى وحدد ضبط → عتبة. سيؤدي هذا إلى فتح مربع الحوار عتبة الذي خفض عتبة إيقاف يمكن تعديلها نقطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح من خلال الصور لمعرفة ما إذا كان هناك نقاط سوداء إضافية أو إذا كان يفتقر إلى شريحة نقطة سوداء. إذا كان هذا هو الحال، وضبط عتبة للتخفيف من حدة المشكلة. عادة لا يحتاج إلى أن يتم ضبط عتبة كما الافتراضات البرنامج إلى قيمة كافية. ملاحظة: يجب على كل شريحة في كومة واحدة فقط نقطة سوداء تمثل موقف الطاير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد تطبيق في مربع الحوار عتبة وسوف تحويل إلى قناع مربع الحوار فتح. لا تقم بالنقر فوق أي من الخيارات ولكن ببساطة انقر فوق موافق لعتبة الصورة المكدس. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد مستوى العتبة الصورة مكدس، حدد Multitracker في المكونات تحت علامة التبويب الإضافات من أجلقياس حركة الطيران في بكسل. سوف يظهر مربع حوار كائن المقتفي. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر فوق كافة الخيارات الأربعة التي وردت في مربع الحوار ثم اختر موافق. سوف Multitracker في المكونات ثم نعلق الإحداثيات إلى نقطة سوداء في كل شريحة وأدرجها في إطار نتائج فضلا عن طول المسار الكلي في بكسل. يعطي إطار مسارات عرض رسومية من مسار استغرق الطاير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نسخ قائمة س و y-تنسيق من نافذة نتائج ولصق البيانات في جدول بيانات Excel. إذا لم يكن لديك أي شريحة في كومة نقطة سوداء في ذلك، سيقوم البرنامج Multitracker وقف في تلك الشريحة. إذا حدث هذا، فمن الضروري أن نعود إلى الخطوة 4.2 وإعادة عتبة المكدس للتأكد من أن سجلات الطيران باعتبارها نقطة سوداء في الشريحة المعنية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من أجل تحويل مسار أطوال من بكسل لسم، تأخذ صورة منفصلة اثنين من النقاط التي يتم متباعدة واحد سم بعيدا على قطعة بيضاء فارغة من الورق. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتبع أعلاهالخطوات (3.1-4.4.2)، لتحديد س، ص إحداثيات بكسل لاثنين من النقاط واستخدام هذه المعلومات لتحديد عدد وحدات البكسل المقابلة لسم. ويستخدم هذا العامل التحويل في الخطوة الخامسة إلى توليد بيانات الحركة في الطول. ملاحظة: حالما يتم ذلك، فمن المهم للحفاظ على الكاميرا الثابتة لجميع التسجيلات في المستقبل. في كل مرة يتم نقل الكاميرا أو تعديلها، واحد يحتاج إلى تكرار هذه الخطوة لتحويل بكسل لسم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طول المسار الذي تم إنشاؤه من قبل المكونات في Multitracker يغالي الحركة بسبب تقلبات طفيفة في وضع الجسم وشدة الضوء / انعكاس سيؤثر على حجم ووسط نقطة سوداء التي يتم إنشاؤها عند مستوى العتبة الصور. يجب إزالة هذا الضجيج من أجل الحصول على تقدير دقيق لحركة الطيران. </li></ol></li></ol> 5. تحليل البيانات باستخدام إكسل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الضجيج من البيانات المسجلة عن طريق استيراد سلسلة من X، Y إحداثيات الناتجة عن العلاقات العامة Multitrackerogram في تحليل يطير، وهو برنامج Visual Basic إكسل أنشأه. (البرنامج متاح عن طريق الاتصال الكتاب.) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر فوق الزر البيانات وتحديد قيمة العتبة وقف انتاج المواد الانشطارية. تحديد قيمة عتبة 0.5 سم / ثانية للتحليل جيش تحرير السودان أو تحديد قيمة بين 0،1-0،3 سم / ثانية للتحليل الحركة. انقر فوق موافق وسيقوم البرنامج حساب السرعة والوقت والمسافة للحركة. ملاحظة: يستخدم هذا البرنامج لتحليل نافذة انزلاق لتقييم البيانات في صناديق متتابعة 0.5-1.0 ثانية ويحسب سرعة خلال تلك النافذة. يتم التعامل مع أي شيء أعلى من القطع المعرفة من قبل المستخدم كما حركة الطيران. </li></ol>

<ol><li>Stone, B., Evans, L., Coleman, J., Kuebler, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+pharmacological+manipulations+that+alter+metabolism+suppress+seizure-like+activity+in%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Genetic and pharmacological manipulations that alter metabolism suppress seizure-like activity in.</a> 1496, 94-103 (2013).</li>
<li>Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+mutants+of+Drosophila+isolated+by+countercurrent+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Behavioral mutants of Drosophila isolated by countercurrent distribution.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 58, 1112-1119 (1967).</li>
<li>Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Resolution+Video+Tracking+of+Locomotion+in+Adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (24), (2009).</li>
<li>Spink, A. J., Tegelenbosch, R. A., Buma, M. O., Noldus, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+EthoVision+video+tracking+systema+tool+for+behavioral+phenotyping+of+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">The EthoVision video tracking systema tool for behavioral phenotyping of transgenic mice.</a> Physiol. Behav. 73, 731-744 (2001).</li>
<li>Kohlhoff, K. J., Jahn, T. R., Lomas, D. A., Dobson, C. M., Crowther, D. C., Vendruscolo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+iFly+tracking+system+for+an+automated+locomotor+and+behavioural+analysis+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Integr.+Biol%22%5BJournal%5D)">The iFly tracking system for an automated locomotor and behavioural analysis of Drosophila melanogaster.</a> Integr. Biol. 3, 755-760 (2011).</li>
<li>Gomez-Marin, A., Partoune, N., Stephens, G. J., Louis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+tracking+of+animal+posture+and+movement+during+exploration+and+sensory+orientation+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Automated tracking of animal posture and movement during exploration and sensory orientation behaviors.</a> PLoS ONE. 7, (2002).</li>
<li>Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Resolution+analysis+of+ethanol-induced+locomotor+stimulation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">High-Resolution analysis of ethanol-induced locomotor stimulation in Drosophila.</a> J. Neurosci. 22, 11035-11044 (2002).</li>
<li>Martin, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+portrait+of+locomotor+behaviour+in+Drosophila+determined+by+a+video-tracking+paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Processes%22%5BJournal%5D)">A portrait of locomotor behaviour in Drosophila determined by a video-tracking paradigm.</a> Behav. Processes. 67, 207-219 (2004).</li>
<li>Meunier, N., Belgacem, Y. H., Martin, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+feeding+behaviour+and+locomotor+activity+by+takeout+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulation of feeding behaviour and locomotor activity by takeout in Drosophila.</a> J. Exp. Biol. 210, 1424-1434 (2007).</li>
<li>Koudounas, S., Green, E. W., Clancy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reliability+and+variability+of+sleep+and+activity+as+biomarkers+of+ageing+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Biogerontology%22%5BJournal%5D)">Reliability and variability of sleep and activity as biomarkers of ageing in Drosophila.</a> Biogerontology. 13, 489-499 (2012).</li>
<li>Catterson, J. H., Knowles-Barley, S., James, K., Heck, M. M., Harmar, A. J., Hartley, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+modulation+of+Drosophila+sleep-wake+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Dietary modulation of Drosophila sleep-wake behaviour.</a> PLoS One. 5, (2010).</li>
<li>Donelson, N., Kim, E. Z., Slawson, J. B., Vecsey, C. G., Huber, R., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Resolution+positional+tracking+for+long-term+analysis+of+Drosophila+sleep+and+locomotion+using+the+%27%27Tracker%27%27+program%5BTitle%5D)+AND+%22PLos+ONE%22%5BJournal%5D)">High-Resolution positional tracking for long-term analysis of Drosophila sleep and locomotion using the ''Tracker'' program.</a> PLos ONE. 7, (2012).</li>
<li>Duboff, B., Fridovich-Keil, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mediators+of+a+long-term+movement+abnormality+in+a+Drosophila+melanogaster+model+of+classic+galactosemia%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Mediators of a long-term movement abnormality in a Drosophila melanogaster model of classic galactosemia.</a> Dis. Model Mech. 5, 796-803 (2012).</li>
<li>Seiger, M. B., Kink, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+anesthesia+on+the+photoresponses+of+four+sympatric+species+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Genet%22%5BJournal%5D)">The effect of anesthesia on the photoresponses of four sympatric species of Drosophila.</a> Behav. Genet. 23, 99-104 (1993).</li>
<li>Pavlidis, P., Ramaswami, M., Tanouye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+easily+shocked+gene%3A+a+mutation+in+a+phospholipid+synthetic+pathway+causes+seizure%2C+neuronal+failure%2C+and+paralysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The Drosophila easily shocked gene: a mutation in a phospholipid synthetic pathway causes seizure, neuronal failure, and paralysis.</a> Cell. 79, 2333 (1994).</li>
<li>Royden, C. S., Pirrotta, V., Jan, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tko+locus%2C+site+of+a+behavioral+mutation+in+D.+melanogaster%2C+codes+for+a+protein+homologous+to+prokaryotic+ribosomal+protein+S12%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The tko locus, site of a behavioral mutation in D. melanogaster, codes for a protein homologous to prokaryotic ribosomal protein S12.</a> Cell. 51, 165-173 (1987).</li>
<li>Parker, L., Padilla, M., Du, Y., Dong, K., Tanouye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+as+a+model+for+epilepsy%3A+bss+is+a+gain-of-function+mutation+in+the+para+sodium+channel+gene+that+leads+to+seizures%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Drosophila as a model for epilepsy: bss is a gain-of-function mutation in the para sodium channel gene that leads to seizures.</a> Genetics. , 187-534 (2011).</li>
<li>Hardie, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+AMP-activated+protein+kinase+in+the+metabolic+syndrome+and+in+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Role of AMP-activated protein kinase in the metabolic syndrome and in heart disease.</a> FEBS Lett. 582, 81-89 (2008).</li>
<li>Fulgencio, J. P., Kohl, C., Girard, J., Pegorier, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+metformin+on+fatty+acid+and+glucose+metabolism+in+freshly+isolated+hepatocytes+and+on+specific+gene+expression+in+cultured+hepatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Pharma%22%5BJournal%5D)">Effect of metformin on fatty acid and glucose metabolism in freshly isolated hepatocytes and on specific gene expression in cultured hepatocytes.</a> Biochem. Pharma. 62, 439-446 (2001).</li>
</ol>

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

عند دراسة الحركي أو أنماط الحركة في ذبابة الفاكهة، فمن المفيد أن تكون قادرة على استخراج معلومات تتعلق المسافة المقطوعة، وسرعة الحركة ونمط الحركة. من أجل استخراج هذه المعلومات، وقد جرت العادة على العاملين معدات باهظة الثمن التي غالبا ما تكون باهظة للمختبرات أصغر أو مختبرات التي ترغب في استخدام هذه المقايسات ماما 4،8،9. مقايسة الموصوفة هنا يمكن أن تستخدم لتحديد سافر مسافة (أرقام 2</stron...

نظرا مدة بقائه قصيرة والأدوات الجينية القوية المتاحة، ذبابة الفاكهة السوداء البطن هو نظام نموذجا ممتازا عن التحقيق في مسببات الأمراض المختلفة وعلم وظائف الأعضاء الكامنة وراء العمليات البيولوجية المختلفة. في كثير من الحالات، فإنه من المفيد لقياس الآثار التي التلاعب السلوكية أو وراثية أو الدوائية لها على تحرك في هذه الكائنات نموذج 1،2. وهناك مجموعة متنوعة من الأساليب التي تستخدم عادة لقياس حركة الطيران في يومين أبعاد 3-7. يمكن لهذه الأنظمة تدعم تتبع من الذباب متعددة في وقت واحد ويمكن قياس السرعة، وأطوال مسار السجل وتسجيل نسبة الوقت قد قضى ذبابة تتحرك. تم استخدامها لدراسة الحركة في مجموعة متنوعة من السياقات بما في ذلك آثار المخدرات على تحرك وطبيعة ديمبرافيك الجنسي للذبابة الحركة 6-9. العيب الرئيسي من هذه الأنظمة هو تكلفة تتبع أنظمةتيم أو البرامج المماثلة والكاميرا. في بعض الحالات، وهذا يمكن في تشغيل الآلاف من الدولارات. التكلفة هي مصدر قلق خاص للمختبر التي تحتاج فقط الاستخدام المحدود لمثل هذا النظام، على سبيل المثال، قياس أنماط قاطرة متحولة معزولة حديثا. وهناك طريقة أبسط ولكن أقل قوة هو استخدام أنظمة الحركة التي سجل استنادا إلى عدد المرات ذبابة يعبر الأشعة تحت الحمراء مسار شعاع ضوء التي يتم وضعها في منتصف أنبوب مغلقة 10،11. بينما مثل هذه الأنظمة يمكن أن تعطي معلومات قيمة عن الحركة ودورات النوم واليقظة، فإنها يمكن أن تزيد أو تنقص من حركة تقدير لأنها تفشل في التقاط المسار الفعلي للالطاير. على سبيل المثال، سوف الذباب الذي يحمل حركة كبيرة في نهايات الأنبوب تسجيل حركة منخفضة كما الذباب على الرغم من أن وسائل إضافية عالية الدقة وقد استخدمت لمحاولة الالتفاف على هذه القيود 12. أبسط وأرخص زالت الأجهزة التي تقيس geotaxi التسلقق، الحركة الصعودية من الذباب، من خلال أنبوب واحد أو سلسلة من الأنابيب 2،13. بينما مثل هذه الأنظمة هي رخيصة ويمكن التعرف بسهولة العيوب انجذاب بالجاذبية، فإنها تفشل في التقاط جوانب أخرى كثيرة من الحركة التي من شأنها أن تكون ذات فائدة للمحققين. بالنسبة للعديد من المعامل ومنخفضة التكلفة نظام تحليل قوي وهذا هو بسيطة لانشاء وتشغيل شأنها أن تكون أداة مفيدة لوصف الاختلافات السلوكية في البطن D. السلالات. نحن هنا تصف مقايسة التي يمكن انشاء لأقل من مائتي دولار وقادرة على إعطاء معلومات حول مسار والسرعة ومدة حركة الذبابة. للتدليل على فعالية الفحص، نقدم بيانات تظهر أنه يمكن أن تستخدم لتحديد؛ 1) خلل الحركي في متحولة بانج تراعي (BS) التي هي عرضة للنوبات و2) قدرة الميتفورمين المخدرات، والتي ويستخدم عادة لعلاج مرض السكري من النوع الثاني، للحد من شدة مثل الاستيلاء النشاط (SLA) طن اثنين من المسوخ BS.

<table><tbody><tr><td>كاميرا الويب</td><td>Logitech</td><td>Pro900</td><td>أي كاميرا ويب عالية الجودة ستكون كافية.</td></tr><tr>برنامج <td></td><td></td><td>HandiAVI لبرنامج الفاصل الزمني</td> يمكن <td>العثور على أحدث إصدار في http://www.azcendant.com/</td></tr> <tr><td>ImageJ</td><td>NIH</td><td></td><td>يمكن العثور على أحدث إصدار في http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html</td></tr><tr><td>Multiracker Plug-In</td><td>NIH</td><td></td><td>يمكن العثور على أحدث إصدار في http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html</td></tr><tr><td>Vortexer</td><td>VWR</td><td>Vortex Genie 2</td><td>تكفي معظم الدوامات ذات الحجم القياسي مثل Vortex Genie 2.</td></tr><tr><td>غطاء طبق بتري مقاس 5 سم</td><td>LabM Limited</td><td>D011</td><td>يمكن استخدام أغطية أطباق بتري الأصغر أو الأكبر في ساحة في فحص الحركة.</td></tr><tr><td>صندوق خفيف</td><td>مصنوع</td><td></td> حسب الطلب <td>مصنوع من مواد الخردة. يتم استخدام الإضاءة لمقايسة الحركة. اعتمادا على إضاءة الغرفة ، من الممكن إجراء الفحص بدون صندوق الإضاءة.</td></tr></tbody></table>

وهناك طريقة منخفضة التكلفة لتحليل مثل الاستيلاء آخر والحركة في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

A Low-cost Method for Analyzing Seizure-like Activity and Movement in Drosophila

وقد استخدمت نظم تتبع الفيديو على نطاق واسع لتحليل حركة البطن ذبابة الفاكهة والكشف عن مختلف شذوذ في السلوك الحركي. في حين أن هذه النظم يمكن أن توفر ثروة من المعلومات السلوكية، فإن تكلفة وتعقيد هذه الأنظمة يمكن أن تكون باهظة بالنسبة لكثير من المختبرات. وقد وضعنا مقايسة منخفضة التكلفة لقياس السلوك الحركي والحركة في الاستيلاء D. البطن. يستخدم نظام A-ويب كام لالتقاط الصور التي يمكن معالجتها باستخدام مزيج من البرامج غير مكلفة ومجانية لتتبع نقل المسافة، ومتوسط ​​سرعة الحركة ومدة الحركة خلال فترة زمنية محددة. للتدليل على فائدة هذا النظام، درسنا مجموعة من المسوخ D. البطن، الانفجار تراعي (BS) المشلولين، والتي هي 3-10 مرات أكثر عرضة لنشاط مثل ضبط (SLA) من الذباب نوع البرية. باستخدام هذا النظام الرواية، تمكنا من الكشف عن أن BS mutanر ضجة لا معنى لها (BSS) يسلك المستويات الدنيا للتنقل استكشافية في بيئة رواية من نوع البرية الذباب. بالإضافة إلى ذلك، تم استخدام نظام لتحديد أن الميتفورمين المخدرات، والذي يستخدم عادة لعلاج مرض السكري من النوع الثاني، ويقلل من شدة جيش تحرير السودان في المسوخ BS.

وقد استخدمت هذه التقنية الموصوفة هنا سابقا لتحليل الاختلافات في جيش تحرير السودان في ذبابة الفاكهة BS المسوخ 1. النتائج المعروضة هنا تشمل سلالات BS صدمت بسهولة (قمة شرق آسيا)، ضجة لا معنى لها (BSS)، وبالضربة القاضية الفنية (الضربة القاضية الفنية). موضع قمة شرق اسيا يشفر كيناز ايثانول تشارك في التوليف الفوسفاتيديل ايثانول 15 وموضع الضربة القاضية الفنية يشفر riboprotein الميتوكوندريا 16. الطفرة BSS هو أليل...

باستخدام كاميرا ويب، ومجموعة من البرامج المجانية وغير مكلفة، وأنماط قاطرة في ذبابة الفاكهة السوداء البطن يمكن تحليلها للكشف عن اختلافات في السرعة والمسافة والوقت من الأنشطة الحركية المختلفة.

Video tracking systems have been used widely to analyze Drosophila melanogaster movement and detect various abnormalities in locomotive behavior. While ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحديد التغيرات في سلوكيات الحركة أو النوبات التشنجية في ذبابة الدروزيلا drosophila. ويتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق فصل الذباب في قوارير فردية باستخدام التخدير. بعد ذلك، تُستخدم كاميرا ويب بسيطة لتسجيل حركة الذباب.يتم بعد ذلك استيراد البيانات إلى برنامج Image J لبدء التحليل. وأخيرًا، يُستخدم برنامج تحليل للذباب مصمم خصيصًا لتحديد المسافة والسرعة ومدة الحركة خلال فترة التسجيل. وفي نهاية المطاف، يمكن لهذا المقايسة أن تُظهر التغيرات في السلوك الحركي أو سلوك النوبات المرتبطة بالتلاعبات الجينية والدوائية.يمكن استخدام تقنية التسجيل منخفضة التكلفة هذه، التي سنقوم بوصفها، لتحليل كل من سلوك النوبات والحركة في ذباب الفاكهة. وبشكل خاص، استخدمناها لتحديد التدخلات الجينية والدوائية التي تعدل سلوك النوبات في هذا الذباب. ولكن اليوم، سيقوم كريس بيرنر، وهو مساعد بحث في مرحلة البكالوريوس في مختبري، باستعراض هذه التقنية. للبدء، قم بإعداد كاميرا الويب التي ستسجل الذباب خلال اختبارات الحركة والنوبات.بمجرد تثبيت الكاميرا في مكانها، افتح برنامج handy a VI. لضبط إعدادات التسجيل، اختر خيار time-lapse images ضمن علامة التبويب capture، وعندما تفتح النافذة الجديدة، اختر webcam كجهاز للالتقاط. بالنسبة لمعظم التجارب، يكون حجم إطار الفيديو 640 by 480 كافياً. تحت خيار compression، اختر Intel IUV codec واضبط عدد الثواني لكل إطار (seconds per frame) وفقاً للمقايسة.في علامة التبويب "متقدم" (advanced)، قم بإنشاء ملف صورة نقطية (bitmap) لكل لقطة، واختر مجلداً ليقوم البرنامج بتخزين مكدس الصور فيه بمجرد تسجيله. بعد ذلك، ضع ذبابة ميتة على ورقة. انقر على مربع إعدادات الفيديو، ومن علامة تبويب إعدادات الجهاز، اضبط الإعدادات حتى تصبح الخلفية البيضاء الساطعة في تباين واضح مع الذبابة الداكنة.انقر على زر البدء لبدء التسجيل. وبمجرد انتهاء فترة التسجيل، انقر على زر الإيقاف. يجب أن تكون مجموعة الصور الآن في المجلد المحدد لبدء مقايسة النشاط الحركي.انقل الذباب إلى أنابيب اختبار فردية مغطاة بسدادة قطنية. اترك الذباب دون إزعاج لمدة تتراوح من 20 إلى 30 دقيقة قبل المتابعة. بعد مرور هذا الوقت، انقر بلطف على الذبابة المراد اختبارها لإخراجها من الأنبوب ووضعها تحت غطاء طبق بتري.يجب أن يحتوي الغطاء على فتحات صغيرة للسماح بتدفق الهواء، ثم ضع الذبابة تحت كاميرا الويب التي تم إعدادها مسبقاً. عند الاستعداد، اضغط على زر البدء لبدء تسجيل النشاط الحركي. تتمثل الخطوة الأولى من اختبار النوبات في تغذية الذباب الحساس للنوبات، الذي يبلغ من العمر يومين، إما بوسط غذائي قياسي أو وسط غذائي مخلوط بالعقار المراد اختباره.بعد يومين من التغذية، انقل الذباب عن طريق النقر الخفيف إلى أنابيب فارغة فردية وأغلق الأنابيب بسدادة قطنية. اترك الذباب دون إزعاج لمدة 20 دقيقة قبل الملاحظة. وعندما تصبح جاهزاً، قم برج الأنبوب باستخدام جهاز الرج المخبري (vortex) أو باستخدام أعلى الإعدادات لمدة 10 ثوانٍ.ضع الذبابة المثبتة فوراً على ورقة بيضاء أسفل كاميرا الويب مباشرةً. وبمجرد وضعها في مكانها، ابدأ بتسجيل نشاط هذه الذبابة.ستقوم الذبابة بحركات سريعة غير منسقة تتخللها فترات من الشلل. وينتهي التسجيل بمجرد أن تستعيد الذبابة وضعيتها الصحيحة. لبدء تحليل البيانات، افتح برنامج معالجة الصور المجاني image J.استورد مجموعة الصور المطلوبة من خلال النقر أولاً على علامة تبويب الملف، ثم اختيار "استيراد" (import)، وأخيراً "تتابع الصور" (image sequence). حدد المجلد الذي يحتوي على مجموعة الصور وافتح صورة.عندما يفتح مربع حوار خيارات التسلسل، اختر فرز الأسماء عددياً ثم حدد "موافق". سيتم الآن تحميل مجموعة الصور في برنامج Image J. بعد ذلك، حدد علامة تبويب الصورة واضبط نوع القيمة على 8-bit. انقر على علامة تبويب الصورة مرة أخرى واختر العتبة (threshold) من قائمة خيار الضبط.يحدد هذا الإجراء عتبة التباين في جميع الصور بحيث تتكون كل منها من خلفية بيضاء مع تحويل الذبابة إلى نقطة سوداء. كما يؤدي ذلك إلى فتح مربع حوار العتبة حيث يمكن ضبط نقاط القطع. قم بفحص الصور للتأكد مما إذا كانت أي منها تحتوي على نقاط سوداء إضافية أو إذا كانت النقطة مفقودة.إذا لزم الأمر، قم بتعديل العتبة (threshold) للتخفيف من أي مشكلات. وبمجرد إجراء التعديلات، اختر "تطبيق" (apply) في مربع حوار العتبة. وعندما يفتح مربع حوار "التحويل إلى قناع" (convert to mask)، انقر فوق "موافق" (okay) لتطبيق العتبة على مجموعة الصور.لقياس حركة الذبابة بالبكسل، اختر ملحق multi tracker من علامة تبويب plugins. عند ظهور مربع حوار object tracker، انقر فوق جميع الخيارات الأربعة المتاحة، ثم اختر Okay. سيقوم ملحق multi tracker بعد ذلك بتعيين إحداثيات للجسم الأسود.في كل شريحة، وإدراج هذه البيانات في نافذة النتائج، بالإضافة إلى الطول الإجمالي بالبكسل. توفر نافذة المسارات عرضاً بيانياً للمسار الذي سلكته الذبابة. قم بنسخ قائمة إحداثيات X و Y من نافذة النتائج والصق البيانات في جدول بيانات Excel.إذا كانت أي شريحة في المجموعة لا تحتوي على لون أسود، سيتوقف برنامج التتبع المتعدد (multi tracker) عند تلك الشريحة. في حال حدوث ذلك، أعد تعيين عتبة المجموعة (threshold) للتأكد من تسجيل الذبابة كلون أسود.في الشريحة المعنية. لتحويل أطوال المسارات من البيكسلات إلى السنتيمترات، التقط صورة لنقطتين تفصلهما مسافة معروفة على ورقة بيضاء فارغة. حدد إحداثيات البيكسل XY للنقطتين، واستخدم هذه المعلومات لتحديد عدد البيكسلات المقابلة لسنتيمتر واحد للحصول على نتائج أكثر دقة.قم بإزالة الضوضاء من الصور عن طريق استيراد إحداثيات XY إلى برنامج مخصص لتحليل الذباب. وبمجرد فتح البرنامج، استورد البيانات من كل نمط جيني أو معاملة في جداول بيانات منفصلة. بعد ذلك، اختر علامة تبويب ورقة الملخص وانقر على زر "click me".حدد قيمة العتبة وفقاً لنوع التحليل، ثم انقر موافق، وسيقوم البرنامج بحساب السرعة والزمن ومسافة الحركة. تظهر هذه المسارات التمثيلية نشاطاً شبيهاً بالنوبات في الذباب الطافر مع وبدون العلاج بالميتفورمين. وقد انخفض نشاط النوبات مع العلاج في الطفرتين اللتين تم اختبارهما.أدى الميتفورمين إلى تقليل المسافة المقطوعة أثناء اختبار النوبات والمدة الإجمالية للنشاط الشبيه بالنوبات بشكل ملحوظ. وفي المقابل، لم يحدث أي تغيير في متوسط السرعة في مسارات الحركة الفردية هذه. ويظهر مسار ذبابة CS من النوع البري تركيزاً حول محيط الساحة الدائرية.بينما يُظهر مسار ذبابة BSS الطافرة نفس التركيز، ولكن مع حركة إجمالية أقل. وعند اختبار القدرة على التنقل في بيئة جديدة، أظهرت طفرات BSS انخفاضاً ملحوظاً في طول المسار مقارنة بذباب CS. كما رصد الاختبار أيضاً تغيرات في سرعة الحركة أثناء استكشاف ذبابة CS خلال اختبار التنقل.ظلت ذبابة BSS غير نشطة نسبيًا طوال التجربة باستثناء بعض نوبات النشاط القليلة. ومن أهم الأمور التي يجب مراعاتها عند إجراء أي من هذين المقايسين السلوكيين باستخدام هذه التقنية هو التأكد من عدم تخدير الذباب قبل إجراء التسجيلات؛ إذ تبين أن التخدير يؤثر على كل من سلوك النوبات والسلوك الحركي، ويمكن أن يغير نتائجك بشكل كبير.

a-low-cost-method-for-analyzing-seizure-like-activity-movement

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

دراسة السلوك الحركي المعقد...

عالية الدقة تعقب الفيديو للتنقل في الكبار ذبابة الفاكهة السوداء البطن

ويمكن استخدام التحفيز الكهربائية عالية التردد ، والاستيلاء على غرار النشاط أن يتسبب...

فحوصات Neurocircuit عن المضبوطات في المسوخ من الصرع ذبابة الفاكهة</em

في وقت واحد من تسجيل إشارات الكالسيوم من الخلايا العصبية التي تم تحديدها وسلوك التغذية من ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em

يصف هذا الفيديو كيفية تتبع الذباب الذي يمشي بحرية لتقييم قدرته العامة على الحركة. يوضح البروتوكول المميز إعداد الفحص وتحليل البيانات باستخدام برنامج تتبع الفيديو.

تتبع الذباب الذي يمشي بحرية: طريقة لتقييم الحركة في ذبابة الفاكهة

يصف هذا التقرير طريقة لقياس نشاط يرقات ذبابة الفاكهة باستخدام مراقب نشاط ذبابة الفاكهة TriKinetics. يستخدم الجهاز أشعة الأشعة تحت الحمراء للكشف عن حركات ما يصل إلى 16 فرديا. يمكن تحليل البيانات لتمثيل معلمات الحركة بما في ذلك معدلات ومواقع داخل غرف الفحص.

قياس اليرقات آخر في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; مراقبة النشاط

تحليل الجزيرة هو مقايسة جديدة نسبيا، وفعالة من حيث التكلفة التي يمكن استخدامها لتقييم السلوك الحركي الأساسية من melanogaster المورفولوجية. ويصف هذه المخطوطة خوارزميات لمعالجة البيانات الأوتوماتيكية والهدف الكمي للجزيرة تحليل البيانات، مما يجعل هذا الاعتداء قراءات الحساسة، الفائق لشاشات الجينية أو صيدلانية كبيرة.

تحليل الفائق للسلوك الحركي في مقايسة الجزيرة المورفولوجية

ويصف هذا البروتوكول وسيلة لتسجيل النشاط الكهربائي تنازلي للنظام العصبي المركزي melanogaster المورفولوجية لتمكين فعالة من حيث التكلفة ومريحة لاختبار وكلاء الدوائية، الطفرات الوراثية للبروتينات العصبية، و/أو دور مسارات الفيزيولوجية غير مستكشفة.

تسجيل الكهربية لنشاط الجهاز العصبي المركزي للطور الثالث Melanogaster المورفولوجية

يقيم هذا البروتوكول النشاط الحركي لذبابة الفاكهة من خلال تتبع وتحليل حركة الذباب في ساحة مصنوعة يدويا باستخدام برنامج مفتوح المصدر فيجي ، متوافق مع المكونات الإضافية لتقسيم وحدات البكسل لكل إطار بناء على تسجيل فيديو عالي الدقة لحساب معلمات السرعة والمسافة وما إلى ذلك.

تقنية بسيطة لفحص النشاط الحركي في ذبابة الفاكهة

هنا ، نقدم بروتوكولا لتصوير الكالسيوم خارج الجسم الحي في ذبابة الفاكهة البالغة التي تعبر عن GCaMP6 لمراقبة أنشطة الصرع. يوفر البروتوكول أداة قيمة للتحقيق في أحداث ictal في ذبابة الفاكهة للبالغين من خلال تصوير الكالسيوم خارج الجسم الحي ، مما يسمح باستكشاف الآليات المحتملة للصرع على المستويات الخلوية.

إكس فيفو تصوير الكالسيوم لنموذج ذبابة الفاكهة للصرع

يوضح هذا البروتوكول بالتفصيل استخدام ذبابة الفاكهة يرقات لتحديد المركبات الفريدة المضادة للنوبات لعلاج الصرع.

نشاط النوبة الناجم عن الصدمات الكهربائية في يرقات ذبابة الفاكهة

اكتشف طريقة تحليل السلوك الحركي والنوبات في ذبابة الفاكهة Drosophila melanogaster باستخدام كاميرا ويب وبرامج تحليل متخصصة. تُمكّن هذه التقنية الباحثين من دراسة الآثار الوراثية والدوائية على الحركة بدقة.

وهناك طريقة منخفضة التكلفة لتحليل مثل الاستيلاء آخر والحركة في

استكشف المزيد من الفيديوهات