والتعديل في المختبر الغزو الفحص لتحديد الدور المحتمل للالهرمونات، السيتوكينات و / أو عوامل النمو في التوسط السرطان غزو الخلايا

يصف مقال الفيديو هذا طريقة معدلة في المختبر لفحص دور الهرمونات و / أو السيتوكينات و / أو عوامل النمو في دفع غزو الخلايا السرطانية.

الهدف العام من التجربة التالية هو إنشاء اختبار في المختبر لفحص دور الهرمونات والسيتوكينات و / أو عوامل النمو في دفع غزو الخلايا السرطانية. يتم تحقيق ذلك من خلال تحديد ما إذا كان هناك فرق بين مؤشر الغزو لمتغيرات الخلايا المختلفة أو الطفرات كخطوة ثانية. يتم تكرار اختبار الغزو باستخدام وسائط مجردة من الفحم ، والتي تزيل أي هرمونات أو عوامل نمو أو سيتوكينات من المصل.

ثم يتم تكرار اختبار الغزو بإضافة عامل معروف محدد إلى الوسط المجرد من الفحم لتحديد ما إذا كانت الهجرة نحو هذا العامل تعزز أو تمنع الغزو. تظهر النتائج التغيرات في مؤشر الغزو لمجموعات خلايا معينة تحدث أثناء الهجرة نحو عوامل تجريبية معروفة بناء على تطبيع النتائج مقابل المؤشر الغازي لمجموعات الخلايا غير الغازية. خطرت لي فكرة هذه الطريقة لأول مرة عندما كنت أقوم بإجراء اختبار غزو تقليدي ، ولاحظت أن هناك فرقا كبيرا بين مؤشرات الغزو للطفرات الخلوية المختلفة.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الأساليب الحالية مثل مقايسة الغزو التقليدية ، هي أنه باستخدام هذه التقنية يمكن التحقيق على وجه التحديد في دور الهرمونات وعوامل النمو المحددة والسيتوكينات في تعزيز أو تثبيط غزو الخلايا. قد تكون هذه الطريقة مفيدة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال أبحاث السرطان ، بما في ذلك العوامل التي تؤدي إلى ورم خبيث للسرطان. قد توفر الآثار المترتبة على هذه التقنية نهجا علاجيا لتصميم الدواء في المستقبل لكل خط خلوي يتم اختباره ، استخدم صفيحة 24 بئرا مع 12 إدخالا.

ثم قم بتسمية اللوحات وفقا للشروط المراد تحليلها. بعد ذلك ، قم بتوزيع 75 ميكرولترا من محلول مصفوفة الكولاجين المعد حديثا في كل ملحق سيتم استخدامه في فحص الغزو مع الحرص على عدم صنع الفقاعات. ثم احتضان الألواح بإدخالات الكولاجين المطلية عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 30 دقيقة للسماح للجل بالتصلب.

بعد فصل الخلايا التجريبية بالتربسين ، أضف وسيطا مكملا بنسبة 10٪ FBS لتعطيل الإنزيم وغسل الخلايا ثلاث مرات في PBS. ثم أعد تعليق الحبيبات في وسط خال من المصل وعد الخلايا. أضف وسائط خالية من المصل إلى تركيز نهائي يبلغ 50،000 خلية لكل مليلتر عندما تصلب مصفوفة الكولاجين.

بعد 30 دقيقة، أضف 700 ميكرولتر من الوسط إما مع FBS محدد بنسبة 2٪ أو FBS مقطوع من الفحم بنسبة 2٪ أو FBS مجردا من الفحم بنسبة 2٪ بالإضافة إلى المكون الإضافي في كل منها. حسنا ، أضف 500 ميكرولتر من تعليق الخلايا في وسط خال من المصل في الجزء العلوي من كل هجرة أو غزو. أدخل واحتضان المقايسات لمدة 22 ساعة عند 37 درجة مئوية.

ثم أضف الميثانول ، والمثبت ، والإوين ، والهيماتين في ثلاثة من الآبار الفارغة للوحة الغرفة. بعد ذلك ، قم بإزالة الخلايا والمصفوفة من أعلى كل ملحق باستخدام مسحة قطنية متسلسلة. ثم باستخدام الملقط.

اغمس كل ملحق خمس مرات لمدة ثانية واحدة في كل مرة في كل من محاليل التلوين الثلاثة على التوالي ، واترك الإدخالات تجف طوال الليل مقلوبة. في اليوم التالي. استخدم هدفا 20 × للحصول على صور للخلايا الموجودة على الإدخالات من خلال عرض الإدخالات الملطخة مباشرة.

يتم التقاط خمس صور لكل عينة بما في ذلك أربع صور من الحقول الخارجية للغشاء وواحدة من المركز. أخيرا ، باستخدام برنامج الصورة J ، قم بحساب الخلايا لكل صورة وحساب مؤشر الغزو كما هو طبيعي إلى خط خلية غير جراحي. يوضح هذا النموذج النتائج المحتملة التي قد تتم مواجهتها أثناء اختبار الغزو وكيفية تفسير البيانات المقابلة.

توضح كل دائرة نتيجة تمثيلية لمرشح ملون من أحد الشروط الثلاثة التي تم اختبارها ، وتمثل كل نقطة خلية مرت عبر مصفوفة الغزو وتم تلطيخها في الجزء السفلي من الغشاء. ثم يتم حساب مؤشر الغزو لكل حالة وفقا لتطبيعها إلى خط خلوي غير جراحي. على سبيل المثال ، في هذه التجربة التمثيلية ، تم اختبار ثلاثة هرمونات لتحديد عامل x محتمل.

لم يكن لاثنين من الهرمونات أي تأثير على مؤشر الغزو ، ولكن تم تحديد أحدهما ليظهر خصائص مثبطة بمجرد إتقانه. يمكن إجراء هذه التقنية في حوالي أربع ساعات في اليوم الأول وساعة واحدة في اليوم الثاني إذا تم تنفيذ جميع الخطوات بشكل صحيح. أثناء استخدام هذه التقنية ، من المهم تسمية كل إدراج خلية على حدة بعناية بشكل صحيح.

استخدمنا نظاما مشفرا بالألوان ونقاطا مختلفة لتسمية كل إدراج خلية بعناية بعد ذلك. يمكن استخدام طرق أخرى مثل نماذج الفئران في الجسم الحي للورم الخبيث للتحقق من صحة النتائج في المختبر. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية فحص الأهمية الفسيولوجية لعوامل مثل الهرمونات وعوامل النمو والسيتوكينات إما كمعززات أو مثبطات لغزو الخلايا في نموذج في المختبر.

شكرا لك على اهتمامك بالفيديو الخاص بنا ونتمنى لك التوفيق في تجاربك.