والبقري الرئة في البحوث الطبية الحيوية: إذ تسترشد بصريا القصبات، داخل القصبة التلقيح و

يتمثل الهدف العام من التجربة التالية في دراسة التفاعلات بين المضيف والعامل الممرض في نموذج بقري للإصابة التنفسية. ويتحقق ذلك عن طريق إحداث عدوى تنفسية في العجول عبر التلقيح داخل القصبات بالعامل الممرض المستهدف خلال مسار المرض. يتم أخذ عينات من الحيوان بشكل متكرر عن طريق الغسل القصبات السنخي.

بعد ذلك، يتم الحصول على مسحات شعبية وخزعات رئوية عبر القصبات لاستعادة الخلايا الظهارية وعينات من الأنسجة السنخية أو الرئوية على التوالي. وفي نهاية المطاف، يمكن تأكيد المرض التنفسي النوعي لمسبب المرض، على سبيل المثال، من خلال التغيرات الالتهابية في الغسيل، والخلايا، وعن طريق الكشف الكيميائي النسيجي المناعي عن مسبب المرض. وفيما يتعلق بالخزعات الرئوية عبر القصبات، فإن الميزة الرئيسية لهذا النموذج الحيواني الكبير مقارنة بالنماذج الحيوانية الأخرى والقوارض هي أننا قادرون في نموذجنا هذا على دراسة مسار المرض على مدى فترة زمنية طويلة في نفس الفرد من خلال أخذ عينات متكررة.

بينما يمكن لهذه الطريقة أن توفر رؤية حول التفاعلات بين المضيف ومسببات الأمراض في الجسم الحي، يمكن تطبيقها أيضاً على أنظمة أخرى مثل مسببات أمراض بديلة أو أنواع أخرى من المضيفين. ستتولى فيشر، وهي طبيبة بيطرية من مختبرنا، الحفاظ على التخدير والمساعدة في عملية أخذ العينات. قبل البدء في الإجراء، املأ ثلاث محاقن بـ 1 و2 و5 ملليلتر من اللقاح.

بعد التأكد من تخدير الحيوان، اسحب لسانه ومد الرقبة. بعد ذلك، وباستخدام حركات تدوير خفيفة، ضع منظاراً معدنياً في فم الحيوان. ادفع المنظار للأمام مع مراقبة الموقع، واستخدم مصباحاً يدوياً لتحديد اللحظة التي يصبح فيها الحنجرة مرئياً.

بعد ذلك، أدخل أنبوب تيفلون في القناة العاملة للمنظار. يجب ألا يبرز الأنبوب من طرف المنظار. أدخل المنظار عبر المنظار المهبلي.

قد تكون بعض التعديلات الطفيفة على المنظار المهبلي ضرورية لتمكين المنظار الداخلي. ولتجاوز الحنجرة، استخدم القصبة الهوائية التي تتفرع إلى الجانب الأيمن من الرئة للمساعدة في محاذاة الصورة على الشاشة. بعد ذلك، قم بتوصيل المحقنة التي تحتوي على 5 mL من اللقاح بنهاية أنبوب التفلون.

قم بتوجيه الأنبوب إلى الفروع التي سيتم ترسيب اللقاح فيها ثم قم بإعطاء الكمية المناسبة من اللقاح. بعد ذلك، قم بتوصيل المحقنة التي تحتوي على 1 mL من اللقاح بالأنبوب. توجه إلى القصبات الهوائية وقم بترسيب اللقاح في الفرع المخصص.

قم بإزالة المنظار والموسع. بعد ذلك، قم بتوصيل المحقنة الأخيرة بمشغل ميكانيكي ورش 1 mL من اللقاح في كل فتحة أنف. أعد الحيوان إلى قفصه في وضع الانكفاء حتى يستيقظ.

يجب أن تكون إسطبلات النقاهة مكيفة الهواء، نظرًا لأن قدرة الحيوان على التنظيم الحراري تنخفض تحت تأثير التخدير العام. ولجمع عينات الصمام في النقطة الزمنية المحددة لأخذ العينات، يتم تدفئة خمس سرنجات تحتوي كل منها على 20 milliliters من المحلول الملحى المتساوي التوتر المعقم في حمام مائي عند درجة حرارة 38 °C. بعد ذلك، يتم إدخال قسطرة غسيل في القناة التشغيلية للمنظار، ثم إدخال المنظار في المنظار المعدني (speculum).

بعد ذلك، توغل للأمام في القصبة الرئيسية للرئة اليسرى حتى الوصول إلى وضعية الإسفين وعدم القدرة على دفع المنظار إلى الأمام أكثر من ذلك. ثم، وبالتتابع، قم بتوصيل المحاقن التي تحتوي على محلول كلوريد الصوديوم الدافئ بقسطرة الغسيل لغرض غمر السائل وشفطه مباشرة.

يُحفظ سائل غسيل القصبات والأسناخ في زجاجات زجاجية مُسيليكونة على الثلج فور استرجاعه لمنع التصاق البلاعم السنخية بسطح الزجاج. يجب تدوين كل من كمية المحلول الملحي المحقون وكمية السائل المسترجع. بعد ذلك، تُزال قسطرة الغسيل من القناة التشغيلية لجمع الخلايا الطلائية.

بعد ذلك، قم بتوجيه المنظار إلى موقع أخذ العينات المطلوب. على سبيل المثال، في هذه التجربة، يتم التوجيه نحو تفرع الرغامى؛ وعندما يستقر المنظار في موضعه، قم بتغطية فرشاة شعبية بالأنبوب وأدخلها في القناة العاملة للمنظار حتى تظهر طرف الفرشاة على الشاشة. ادفع الفرشاة والأنبوب البلاستيكي للأمام بمقدار 5 cm تقريبًا.

بعد ذلك، ادفع مقبض الفرشاة لإخراجها من الأنبوب البلاستيكي. وعندما تصبح الفرشاة في وضعها الصحيح، وجهها إلى الموقع المراد تنظيفه بالفرشاة. ثم ادفع واسحب الفرشاة برفق ذهاباً وإياباً أثناء توجيه المنظار.

لضمان التلامس بين الفرشاة وجدار القصبة الهوائية لكشط الخلايا الظهارية. توقف عن الكشط عند حدوث نزيف. ثم غطِّ الفرشاة بالأنبوب واسحبها خارج قناة العمل.

قم بدحرجة الشعيرات المغطاة بالخلايا الظهارية برفق فوق ما يصل إلى خمس شرائح مجهرية، ثم قم بتثبيت المسحات في ميثانول بارد لمدة 10 دقائق. بعد ذلك، اترك الشرائح لتجف في الهواء، ثم احفظها في درجة حرارة 20- درجة مئوية لإجراء خزعة رئة عبر القصبات الهوائية. بعد ذلك، وجه المنظار إلى موقع أخذ العينات المطلوب.

على سبيل المثال، في حالة استخدام LOAs crans كما في هذه التجربة، وقبل إدخال ملقط الخزعة في قناة العمل، قم بفتحه وإغلاقه عدة مرات للتأكد من عمله بشكل صحيح، ثم ادفع الملقط في الفرع الجانبي للقصبة الهوائية حتى تشعر بمقاومة خفيفة. الآن، اسحب الملقط للخلف لمسافة سنتيمترين إلى ثلاثة سنتيمترات وافتحه. ادفع الملقط للأمام مرة أخرى، لمسافة سنتيمترين تقريبًا، ثم أغلقه.

اسحب ملقط الخزعة وأخرجه من قناة العمل. استخدم إبرة لإزالة النسيج بعناية من ملقط الخزعة واحفظه في وسط تثبيت مناسب لمنع حدوث عمليات التحلل الذاتي. وأخيرًا، بعد ترك العجل ليتعافى في حظيرته، راقب الحيوان مرة أخرى للتأكد من عدم وجود استرواح صدري خلال الـ 24 ساعة القادمة، مع توفير العلف والماء النظيف.

عندما يستعيد الحيوان وعيه الكامل، يمكن صبغ المقاطع المجمدة من خزعات الرئة عبر القصبات مناعيًا كيميائيًا. ولتجسيد الممرض المحقون، لاحظ الاشتمالات الكلاميدية البنية في رئة هذا الحيوان الذي تم حقنه بالكلاميديا قبل أربعة أيام من أخذ العينات. يسمح الصبغ المناعي الكيميائي لخلايا الغسيل بتجسيد الممرضات داخل الخلايا.

على سبيل المثال، تُظهر هذه الصورة اشتمالات الكلاميديا الموجودة في البلاعم السنخية التي تم أخذ عيناتها من عجل. يمكن ملاحظة CTAC بعد تسعة أيام من التلقيح داخل القصبات بالكلاميديا. ويمكن تمييز خلايا غسيل القصبات والأسناخ عن طريق التصبيغ الخلوي.

تُعد البلاعم السنخية هي النوع الخلوي السائد في سائل غسيل الرئة. ومع ذلك، يزداد عدد الخلايا المحببة المتعادلة عند وجود عمليات التهابية. وبمجرد إتقان العملية، يمكن إجراء التلقيح في غضون 10 إلى 15 دقيقة، وأخذ العينات في غضون 20 إلى 30 دقيقة إذا نُفذت بشكل صحيح.

بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء التلقيح داخل القصبات في العجول، وكيفية أخذ عينات من سائل الغسيل القصبي السنخي، والمسحات القصبية، والخزعات الرئوية عبر القصبات في الحيوان المخدر.