بروتوكول SIVQ-LCM لالصك ArcturusXT

الهدف العام من هذا الإجراء هو استخدام تحليل صور SIVQ الثابت مكانيا أو التكميم المتجه أو SIVQ مع التقاط الليزر MICRODISSECT أو LCM لتحديد ميزات الأنسجة ذات الأهمية وإجراء التشريح الدقيق الموجه بسرعة. يتم تحقيق ذلك عن طريق التقاط صور للأنسجة المستهدفة لأول مرة ل SIVQ. ثم يتم إجراء تحليل SIVQ ، ويتم استيراد التعليق التوضيحي SIVQ إلى جهاز التشريح الدقيق للمعالجة.

في النهاية ، يمكن عزل الخلايا ذات الأهمية بواسطة S-I-V-Q-L-C-M للتحليل الجزيئي النهائي. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية هي أن S-I-V-Q-L-C-M يبسط عملية اختيار وتشريح المناطق المستهدفة الكبيرة التي قد تكون صعبة وتستغرق وقتا طويلا من خلال تقنيات التشريح الدقيق التقليدية لالتقاط الليزر. وسيتم توضيح الإجراء الدكتور آفي روزنبرغ, زميل إكلينيكي في مختبرنا, لتصوير عينات الأنسجة ذات الأهمية.

أولا ، قم بتحميل الشرائح على المرحلة الآلية لأداة التشريح الدقيق وقم بتشغيل البرنامج ذي الصلة. ثم حدد خانات الاختيار المناسبة لتعيين مواضع الشرائح المحملة وتأكد من حفظ ملفات الصور الملتقطة بتنسيق JPEG. اضبط سطوع الصورة وتركيزها على الشاشة لتحسين جودة الصورة.

بعد ذلك ، باستخدام صندوق أدوات الفحص ، قم بتشغيل الناشر واضبط سطوع المصباح 60 وكسب الكاميرا 20. في نافذة النظرة العامة ، انقر بزر الماوس الأيمن للتحديد وتذكر الإعدادات والحفظ. التقط صورة نظرة عامة مصغرة للشريحة لتوفير خارطة طريق لعملية التشريح.

اضبط التكبير وابحث عن منطقة الاهتمام. ثم التقط صورة للمنطقة لتحليل خوارزمية الصور الملتقطة. ابدأ بنقل الصور إلى مجلد SIVQ.

ثم افتح SIVQ وقم بتحميل الصورة الملتقطة ذات الاهتمام. انتقل إلى منطقة الاهتمام واضبط حجم نافذة العرض الخمسة والستة دون ضبط تكبير الصورة. ثم حدد حجم متجه الحلقة وعدد الحلقات التي سيتم استخدامها للتحليل.

انقر بزر الماوس الأيمن فوق ميزة صورة المسند المراد التقاطها في نافذة إطار العرض السادسة، وحدد خريطة الحرارة، ثم انقر فوق مسح ضوئي إلى X لتحليل الصورة. ثم استخدم الجزء العلوي من الشريطين المنزلقين الأفقيين لضبط خصوصية المتجه الإجمالية. استخدم الشريط السفلي لزيادة الحساسية بعد إجراء الجلد.

لزيادة المساحة المصنفة على أنها مطابقة ، قم بإلغاء تحديد مربع راديو الخريطة الحرارية للتأكد من تغيير خريطة SIVQ الحرارية إلى اللون الأحمر الموحد وزيادة حجم الطلاء. احفظ الصورة بالنقر فوق حفظ الصورة زر. ثم قم بتحويل إخراج BMP إلى تنسيق ملف JPEG.

ثم استخدم محررا سداسيا عشريا لإعادة ضبط الإحداثيات الموضعية الموجودة بين بداية علامة الصورة وأول علامة جدول تكميم محددة في رأس الملف الخاص ب JPEG بعد التحليل من صورة أداة التشريح الأصلية قبل بدء التشريح الدقيق. ضع غطاء التقاط الليزر MICRODISSECT أو غطاء المضاعف المشترك الأصغر في وسط المنطقة ذات الاهتمام حيث تم التقاط الصور لتحليل SIVQ. بعد ذلك ، بعد معايرة ليزر الأشعة فوق البنفسجية والأشعة تحت الحمراء ، قم بتحسين المعلمات بما في ذلك مدة الطاقة ومواقع الليزر وسرعة القطع بالأشعة فوق البنفسجية.

ثم افتح برنامج التحديد التلقائي واستورد الصورة التي تم تحليلها. قم بإنشاء ملف تحليل جديد لتدريب برنامج التحديد التلقائي للتعرف على التعليق التوضيحي SIVQ. حدد الآن مناطق الخلفية التي تم تمييزها بالمربعات الزرقاء للصورة التي تم تحليلها بواسطة SIVQ.

ثم حدد مناطق الاهتمام أو R OIS المميزة بالدوائر الحمراء وانقر فوق تعلم لإنشاء ملف التدريب. انسخ المناطق المحددة إلى الصورة الحية. لبدء التشريح الدقيق ، حدد صندوق أدوات microdisect واختر أزرار التقاط الأشعة تحت الحمراء أو القطع بالأشعة فوق البنفسجية المناسبة.

بعد اكتمال التشريح ، انقل غطاء LCM إلى محطة مراقبة الجودة والتقط صورة للعينة التي تم تشريحها. أخيرا ، إذا تم تشريح العينات المطلوبة بنجاح ، فانقر فوق زر المرحلة الحالية وقم بإزالة غطاء المضاعف المشترك الأصغر لبدء إجراء الاستخراج الجزيئي للتحليل النهائي. في هذه التجربة التمثيلية ، كان قسم أنسجة الثدي البشري المضمن في البارافين الثابت للفورمالين هو صبغة مناعية للسيتوكيراتين AE واحد ، AE ثلاثة باستخدام بروتوكول الكيمياء المناعية القياسي.

نظرا لأنه لا يمكن تغطية هذا النسيج للتشريح المجهري ، فقد يكون من الصعب تقدير الخلايا الملطخة بالخلايا الكيميائية المناعية بصريا. وبالتالي ، لتوفير مطابقة أفضل للمؤشر وصورة محسنة ، تمت إضافة الزيلين إلى قسم الأنسجة لإنشاء زلة غطاء زائفة. ثم تم التقاط صورة JPEG للمنطقة الانزلاقية للغطاء الزائف واستيرادها إلى SIVQ لتحليل الخوارزمية.

تم اختيار ميزة الصورة المسند التي لوحظت على أنها صبغة DAB بنية داكنة من قبل المستخدم وتم بدء خوارزمية SIVQ لتحليل الصور. ثم تم تحويل خريطة SIVQ الحرارية إلى طلاء أحمر يتم التعرف عليه بواسطة برنامج الاختيار الآلي ، وسمح للزيلين بالتبخر. ثم تم استيراد خريطة SIVQ الحرارية إلى برنامج التحديد الآلي.

أخيرا ، تم تشريح الخلايا المميزة باستخدام ليزر الأشعة تحت الحمراء. ثم تم نقل غطاء المضاعف المشترك الأصغر إلى محطة مراقبة الجودة لأداة التشريح المجهري وفحصه بصريا لتقييم نجاح التشريح. كما تم فحص الأنسجة المتبقية وإعادة استيراد خريطة SIVQ الحرارية.

لمزيد من التأكيد على كفاءة التشريح المجهري، بمجرد إتقانه، يمكن إجراء S-I-V-Q-L-C-M في غضون دقائق لكل شريحة بسرعة مما يوفر مدخلات غنية لمجموعة متنوعة من التقنيات التحليلية النهائية بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تنفيذ S-I-V-Q-L-C-M في سير عمل Microdissect الخاص بك.