تأثير الغدة ذكر ملحق المنتجات على وضع البيض في بطني الأرجل الرخويات

الهدف العام من هذا البروتوكول هو توصيف تأثيرات بروتينات السائل المنوي على سلوك وضع البيض لأنواع خنثى متزامنة. يتم تحقيق ذلك عن طريق عزل الأفراد أولا عن ثقافة المختبر الموحدة ، متبوعا بتشريح الأعضاء المستهدفة. ثانيا ، يتم جمع المنوية وعمل محلول علاجي.

بعد ذلك ، يتم تلقيح القواقع بشكل مصطنع. ثم يتم وضعهم في مقال سيرة ذاتية. في ظل الظروف القياسية ، يتم جمع كتل البيض ومسحها ضوئيا ووضعها في BS الفردية لتفقس.

بعد بضعة أسابيع ، يتم عد الصغار ومسحها ضوئيا ، وبعد ذلك يمكن تحليل جميع الصور باستخدام البرمجيات الحرة. يمكن أن يساعد هذا البروتوكول في الإجابة على أسئلة حول عمليات الانتقاء الجنسي التي يتم التوسط فيها عن طريق بروتينات السائل المنوي. نظرا لأننا ننظر هنا إلى الخنثى المتزامنة ، يمكننا أيضا معالجة ما إذا كانت هذه العمليات تعمل بطرق متشابهة أو مختلفة كما تفعل في الأنواع الجنسية المنفصلة.

بالنسبة لهذا البروتوكول ، استخدمنا IL العظيم في les ، والذي نحتفظ به في جامعة VU في أمستردام. نستخدم هذا النوع لدراسة أسئلة حول الانتقاء الجنسي والتكاثر. في خنثى ، نظرا لحجم جسمها الكبير نسبيا ، يمكن الوصول إليها تجريبيا بسهولة.

بالإضافة إلى ذلك ، نظرا لاستخدامه في العديد من التخصصات البيولوجية المختلفة كنوع نموذجي ، فإننا نعرف الكثير عن البيولوجيا الأساسية لهذه. اسمي يومي. أنا حاصل على درجة الدكتوراه في قسم العلوم البيئية.

في الجامعة الكاملة ، سأعرض البروتوكولات التالية. هيا بنا نبدأ. لإجراء حياة حيوية موثوقة ، تستخدم ثقافة المختبر بشكل شائع لاستبعاد المتغيرات الكامنة.

يتم الاحتفاظ بالماء النحاسي المنخفض عند 20 درجة مئوية ، ودورة الظلام الفاتحة هي 12 × 12 ساعة. في جامعة جامعة VU ، يتم الحفاظ على ثقافة المختبر في خزانات مرافق التربية مع التبادل المستمر للمياه. في ظل الظروف القياسية ، يتم تغذية القواقع البالغة بالخس عند الرغبة الجنسية وفصلها حسب فئتها العمرية.

بمجرد إزالة القواقع من منشأة التكاثر ، سيتم اعتبارها قيد الاستخدام ولا يمكن إعادتها إلى خزانات التكاثر. قبل البدء في الإجراء ، ستحتاج إلى مجهر ستيريو ، ولوحة تشريح مع دبابيس ، ومقص جراحي صغير ، وملقط ، وحقنة مملوءة بمحلول كلوريد المغنيسيوم ، وبعض المناشف الورقية للقتل الرحيم للحلزون ، واختراق القدم بإبرة الحقن بزاوية 45 درجة ، والضغط برفق بشكل مستمر حتى يرتاح الحلزون ويظل ممدودا. قم بإزالة إبرة الحقن وتأكد من القتل الرحيم للحلزون.

بعد ذلك ، خذ الملقط وقم بإزالة القشرة بعناية. بعد الانحناء في منتصف الطريق ، اكشط العضلة العضلية برفق من القشرة. ثم قم بلف الحلزون برفق من قوقعته باتباع اتجاه لف القشرة.

الآن تمت إزالة الحلزون من قوقعته ويمكن التخلص من القشرة. بعد ذلك ، ضع الحلزون على لوحة التشريح وضع دبوسا في الطرف الخلفي للقدم. ثم ضع دبوسا في الرأس.

ضع بعض التوتر على الحلزون وضع الدبوس في الطبق. الآن الحلزون جاهز للتشريح. قم بتشغيل الضوء لمجهر الاستريو واضبط المجهر.

قبل إجراء الشق الأول ، من المهم توطين الإناث. ستكون هذه لاحقا نقطة مرجعية. قم بعمل شق أول أسفل حافة الوشاح مباشرة واقطع باتجاه أنثى بور.

قم بتدوير مسام الرأس باتجاه الرأس. تأكد فقط من قطع الجلد وعدم ضرب أي أعضاء وقطع في خط مستقيم. في هذه الدراسة ، سنقوم بتشريح غدة البروستاتا والحويصلات المنوية للسائل المنوي المنوية على التوالي.

يرجى ملاحظة أنه بالنسبة لمخزون المنوية والسوائل المنوية الكاملة ، يجب عزل القواقع لمدة أسبوع واحد لتغذيتها حسب الرغبة الجنسية. التشريح هو نفسه كما هو موضح سابقا. تقع الحويصلات المنوية في الجزء الخلفي من.

بعد ذلك ، سيتم تعليق غدة البروستاتا في محلول ملحي ووضعها على الجليد. في وقت لاحق. سيتم خلطها مع حلول العلاج.

قبل الحقن داخل المهبل ، ستتم إضافة المنوية التي تم جمعها إلى السائل المنوي أو البروتينات الفردية بجرعة ذات صلة. بالنسبة لتقنية التلقيح الاصطناعي هذه ، ستحتاج إلى حقنة سعة مليلتر واحد تحتوي على محلول الاختبار المناسب لإبرة حقن على المحاقن ، مع التأكد من عدم وجود فقاعات عالقة في المحاقن للحقن ، استخدم أنبوب السيليكون بعناية. حرك أنبوب السيليكون فوق إبرة الحقن.

تأكد من ثقب الأنبوب وإزالة الهواء من الأنبوب. قبل الحقن ، يجب تخدير الحلزون. وسيتبع هذا نفس البروتوكول الوارد في الفصل الثاني.

سيتم إعطاء الحلزون جرعة من اثنين إلى ثلاثة ملليلتر من 50 ضرسا صغيرا من كلوريد المغنيسيوم. عندما يتم تخدير الحلزون واسترخاءه بشكل صحيح ، ضعه في القالب لإبقائه في وضع مستقر. بعد ذلك ، أمسك نهاية أنبوب السيليكون بزوج من الملقط الناعم وادفعه برفق في أنثى بور.

ثم اضغط برفق على المحقنة وحقن الحجم المحدد لمحلول الاختبار بعناية. انتظر نصف دقيقة حتى ينتشر الضغط في الأنبوب إلى العضو الأنثوي. بعد ذلك ، قم بإزالة الأنبوب بعناية وضع الحلزون في الحاوية الخاصة به.

بعد كل شيء ، تم تلقيح القواقع بشكل مصطنع. يمكن نقلها إلى خزاناتها التجريبية ويمكن أن تبدأ المقايسة الحيوية للسير سوف تتعافى القواقع من التخدير بعد بضع ساعات. المقايسات الحيوية.

بالنسبة للانتقاء الجنسي ، تستغرق التجارب عادة أسبوعين قبل بدء الكائنات الحيوية. من المهم وضع جميع الأفراد في حاوياتهم الخاصة وتسميتهم. بعد ذلك ، قم بقياس طول قشرة كل حلزون.

هذا مؤشر جيد على حجمها ، والذي يمكن أن يكون له تأثير على السلوك الجنسي. بعد ذلك ، يتم وضع القواقع في خزان تجريبي. هذا الخزان له نفس الشروط القياسية مثل منشأة التربية.

كما تمت مناقشته في الفصل الأول ، من المهم وضع الحاويات في الاتجاه الصحيح بحيث تتبع الفتحات تدفق المياه في الخزان. أثناء المقايسات الحيوية ، يجب إطعام القواقع بانتظام. يتم قطع كمية قياسية من أقراص الخس من الخس باستخدام مثقاب ثقب معدني.

الجرعة الكافية هي قرصين كل يوم. مع الأنواع النموذجية ، lumia stauss ، يجب فحص القواقع بحثا عن كتل البيض كل يوم. سيتم جمع كتل البيض هذه للقياسات.

لمسح البيض ، ستحتاج إلى جهاز كمبيوتر محمول يحتوي على برنامج تشغيل الماسح الضوئي ، وماسح ضوئي مسطح ، ومقياس مليمتر قياسي ، وملعقة نقل كتلة البيض وألواح زجاجية لوضعها فوق كتل البيض. أولا ، خذ الملعقة واكشط كتل البيض من جدران الحاوية. تم وضع كتل البيض غير الشفافة للتو ولا يمكن استخدامها.

في حدث القياس هذا ، ضع كتل البيض على ألواح النقل وكرر هذه الخطوات حتى تمتلئ اللوحات. بعد ذلك ، ضع كتل البيض على البلاط الزجاجي بنفس ترتيب ألواح النقل. ستلتصق كتل البيض بالبلاط الزجاجي ، وتقلبها رأسا على عقب وتضعها بعناية على الماسح الضوئي المسطح أسفل المقياس مباشرة.

ثم اضغط على الأطباق لسحق كتل البيض. سيؤدي هذا إلى إضافة كل البيض حتى الآن حتى يتم مسحه ضوئيا بشكل جيد. قبل المسح ، ينصح بضبط الإعدادات للحصول على أفضل نتيجة.

للمسح الضوئي ، من المهم ضبط الدقة إلى الحد الأقصى لإجراء مسح معاينة لاقتصاص منطقة العمل لاحقا ، وأخيرا ، لضبط السطوع والتباين قبل إجراء الفحص النهائي. بعد المسح ، سيتم وضع كتل البيض في قوارير خاصة بها لتنضج وتفقس. يتم تحديث هذه القوارير في المياه كل يومين للحفاظ على الأكسجين عند المستوى المناسب.

مع فقس المزيد من القواقع ، يجب استخدام تقنيات مختلفة لإنعاش الماء. أفضل ترتيب هو السكب أو الفيضان في البداية وبعد ذلك امتصاص الماء باستخدام ماصة مفتوحة الصورة JA برنامج جداول البيانات. لتسجيل البيانات والصورة من داخل الصورة J أولا، استخدم أداة التكبير/التصغير للانتقال إلى مقياس المليمتر.

قم بتكبير النافذة وضبطها بحيث يملأ المليمتر الواحد الشاشة. ارسم خطا باستخدام أداة الخط بين خطي المؤشر. بعد ذلك ، انتقل إلى التحليل ، ثم قم بتعيين المقياس.

في القائمة المنبثقة ، سترى الطول المقاس يضبط المسافة المعروفة إلى واحد ووحدة إلى ملليمترات. حدد المربع عمومي وأغلق النافذة. الآن بعد أن تم تعيين المقياس ، يمكننا التكبير نحو كتل البيض الأولى حتى 800٪استخدم الأداة الإهليلجية لرسم محيط البيض.

اضغط على D لرسم المحيط. سيساعد ذلك في منع قياس نفس البيضة مرتين. اضغط على M لقياس المحيط.

ستظهر نافذة بعد جمع بيانات كافية. يمكن حفظ نافذة البيانات كملف Excel. يمكن أيضا نسخ البيانات مباشرة إلى ورقة عمل.

إذا لم تظهر القياسات المفضلة في النافذة المنبثقة ، فيمكن تعديلها وتحليلها. يمكن أيضا إجراء القياسات المحددة ، وعد البيض الفردي لكل كتل بيض بمساعدة المكون الإضافي لعداد الخلايا. انتقل إلى المكونات الإضافية.

ثم قم بتحليل وتحديد عداد الخلية. ستظهر نافذة عداد الخلية. حدد مربع الاحتفاظ بالأصل واضغط على تهيئة.

ظهرت نافذة عداد جديدة. حدد أداة العبور هنا من شريط الأدوات. ثم حدد نوع العداد في قائمة عداد الخلية.

بالنقر فوق نافذة عداد الخلايا ، سيتم حساب البيض. يمكن العثور على العدد الإجمالي بجوار نوع العداد في قائمة عداد الخلية. يمكن حساب كتل البيض المتعددة باستخدام عداد الخلايا.

يمكن إضافة أنواع العدادات وإزالتها إذا رغبت في ذلك ، يجب نسخ هذا الرقم يدويا إلى جدول بيانات أو نتائج الضغط ، وستظهر نافذة. عرض جميع النتائج. باستخدام هذه الطريقة ، أظهرنا كيفية جمع بروتينات السائل المنوي ، وكيفية اختبارها بطريقة مفيدة.

لقد أظهرنا ذلك باستخدام مستخلص غدة البروستاتا الكامل ، ولكن بالطبع ، يمكن اختبار بروتينات السائل المنوي الفردية بنفس الطريقة. بالإضافة إلى ذلك ، من الممكن النظر في العمليات الأخرى ووضع البيض. أظهرت نتائج تجاربنا أن هناك بروتين سائل منوي واحد يسمى أفيوس ستاتين يتوسط في انخفاض حارة البيض.

بالإضافة إلى ذلك ، نجد أن نقل السائل المنوي يزيد من الحجم أو الأعمدة الستاتين هو أول بروتين سائل منوي مميز بالكامل في خنثى متزامن. بينما تم الإبلاغ عن تأثيرات السائل المنوي في كثير من الأحيان في الأنواع ذات الجنسين المنفصلين ، فإن نتائجنا تسلط الضوء على أن السوائل المنوية لها نفس القدر من الأهمية في الخنثى.