السكتة الدماغية النمذجة في الفئران: التخثر الدائم من الشريان الدماغي الأوسط القاصي

الهدف العام من هذا الإجراء هو إحداث انسداد دائم في الشريان المخي الأوسط القاصي للفأر، مما يؤدي إلى احتشاء يتركز بشكل أساسي في القشرة المخية ويكون حجمه تقريباً مماثلاً للسكتات الدماغية لدى البشر. يتم تحقيق ذلك من خلال تقييم خط الأساس لعدم تماثل استخدام الأطراف قبل الجراحة أولاً. الخطوة التالية من الإجراء هي إجراء جراحة تحفيز السكتة الدماغية عن طريق التخثير الكهربائي للشريان المخي الأوسط القاصي.

بعد الجراحة، يتم اختبار العجز الحسي الحركي البؤري عن طريق تقييم عدم التماثل في استخدام الأطراف الأربعة. وأخيراً، يتم تحليل حجم الاحتشاء باستخدام صبغ البنفسج البلوري. وفي النهاية، تكون الآفات القشرية الناتجة متوسطة الحجم مع تباين بسيط، مما يجعل هذه التقنية نموذجاً قيماً لأبحاث السكتة الدماغية الأساسية والترجمية.

تتمثل المزايا الرئيسية لهذه التقنية مقارنة بنماذج السكتة الدماغية الشائعة الأخرى في أن معدل الوفيات في هذا النموذج ضئيل للغاية، بالإضافة إلى حجم المنطقة المصابة وموقعها. تمثل القشرة الحديثة غالبية حالات السكتات الدماغية البشرية، وهي قابلة للتكرار بدرجة عالية. وبوجه عام، سيواجه الأشخاص الجدد في هذه الطريقة صعوبة في البداية في إزالة الجمجمة برفق لتقليل الآفات الميكانيكية.

ثانياً، يعد التحديد الصحيح والربط المناسب للشريان السباتي الأوسط البعيد أمراً بالغ الأهمية في هذا النموذج. أولاً، قم بحقن المسكنات قبل 30 دقيقة من بدء العملية. قم بتشغيل بطانية التدفئة للفأر واضبطها على 37 درجة Celsius من أجل العملية.

بعد ذلك، تأكد من جاهزية الغاز التخديري المكون من 70% nitrogen و30% oxygen وisoflurine. ثم عرّض الفأر لـ 4% ISO fluorine في غرفة التحريض حتى يتوقف عن الحركة. بعد ذلك، ضع الفأر على وسادة التسخين وقم بإعطائه isoflurine بتركيز 4% لمدة دقيقة واحدة إضافية.

بعد مرور دقيقة واحدة، قم بتغيير معدل الـ isof fluorine إلى 1.5%. الآن، تأكد من تخدير الفأر بشكل كافٍ عن طريق قرص إصبع القدم، وإذا كان الأمر كذلك، قم بوضع ethanol dafan على العينين باستخدام مقص. ابدأ الجراحة بعمل شق بطول واحد سنتيمتر بين الأذن والعين. افصل الجلد وحدد العضلة الصدغية.

الآن، قم بضبط مولد الترددات العالية على وظيفة التخثير (coagulation)، والوضع ثنائي القطب (bipolar)، والقدرة على 12 watts، ثم قم بتوصيل الملقط. عند التحضير، أضف قطرة من المحلول الملحي إلى العضلة الصدغية المكشوفة. بعد ذلك، استخدم ملقط التخثير الكهربائي لفصل العضلة الصدغية عن الجمجمة عند جزئيها القمي والقاصي.

تكون النتيجة سديلة عضلية مرتخية. حدد الآن الشريان المخي المتوسط أو MCA أسفل الجمجمة الشفافة. يوجد هذا الشريان في الجزء المنقاري من المنطقة الصدغية، ظهرياً للجيب خلف الحجاج.

استخدم مثقاباً لترقيق العظم الموجود مباشرة فوق هذا الشريان حتى يصبح رقيقاً جداً. حافظ على رطوبة الجمجمة أثناء الثقب باستخدام محلول ملحي. الآن، وباستخدام ملقط دقيق جداً، أزل العظم بعناية للكشف عن فرع الـ MCA.

اضبط مولد الترددات العالية على سبعة وات. الآن، قم بتخثير الشريان باستخدام ملقط التخثير الكهربائي عن طريق لمسه بلطف دون الإمساك به. قم بتخثير الشريان في كل من الجهتين القريبة والبعيدة من التفرع؛ وفي حالة وجود تباين تشريحي يفتقر إلى تفرع الشريان الدماغي الأوسط (MCA)، قم بتخثير الشريان في أقرب نقطة ممكنة في موقعين، تفصل بينهما مسافة حوالي واحد مليمتر بعد عملية التخثير.

انتظر لمدة 30 ثانية ثم المس الشريان بلطف باستخدام ملاقط غير حادة. بعد ذلك، أعد العضلة إلى وضعها بحيث تغطي ثقب التثقيب. خيِّط الجرح وضع الحيوان في صندوق رعاية عند درجة حرارة 32 °C للتعافي من التخدير ثم أعِده إلى القفص.

بشكل عام، يستغرق الحيوان من خمس إلى 10 دقائق للتعافي من التخدير. ويُستخدم اختبار الأسطوانة للتحقق مما إذا كان الحيوان يفضل استخدام أحد الأطراف على الآخر. ضع الحيوان في أسطوانة من زجاج الأكريليك الشفاف يحيط بها مرآتان بزاوية قائمة.

قم بتصوير الحيوان بالفيديو لمدة خمس دقائق في مواجهة رأس المرآتين على الجانب الآخر من الأسطوانة. بعد كل تجربة، امسح الأسطوانة وسطح الطاولة باستخدام 60% ethanol. لاحقاً، قم بإجراء تحليل إطار بإطار.

قم بتقييم المقايسة عن طريق عد تلامسات إحدى القوائم الأربع مع الأسطوانة أثناء الوقوف الكامل، وأيضاً عن طريق عد عمليات الهبوط بإحدى القوائم الأربع. بعد تسجيل درجة الوقوف الكامل، يتم أخذ مقاطع تجميدية لكل دماغ بشكل تسلسلي بسماكة 20 micrometer وبفاصل 400 micrometer. اجمع المقاطع على شرائح للتخزين عند درجة حرارة minus 20 degrees Celsius.

باستخدام بروتوكول التقطيع هذا، يمكن وضع جميع المقاطع التي تغطي منطقة الاحتشاء من دماغ واحد على شريحة واحدة. صبغ المقاطع باستخدام بروتوكول الكريستال البنفسجي القياسي لتحديد منطقة الأنسجة المحتشية في كل مقطع من الدماغ. يمكن بعد ذلك تثبيت الشرائح ومسحها ضوئياً وتحليلها باستخدام طريقة Swanson لتقييم الوذمة.

كانت نسبة الوفيات التصحيحية الناتجة عن جراحة سد الشريان المخي الأوسط (MCA) أقل من 5%، ويرجع ذلك أساساً إلى النزف تحت العنكبوتية أو التخدير غير الصحيح. لم تحدث وفيات خلال هذه الفترة. وبالنسبة لهذا التحليل الخاص باستخدام PA، تم قياس عدم التماثل باستخدام اختبار الأسطوانة بعد تحريض السكتة الدماغية ومقارنته بالقيم المرجعية التي تم الحصول عليها قبل سد الشريان المخي الأوسط (MCA)، حيث تم اكتشاف عدم تماثل ملحوظ في الأطراف بعد 24 ساعة، والذي تعافى جزئياً خلال الأسبوع الأول بعد السكتة الدماغية، أي بعد مرور أسبوع على السكتة.

أدى تحفيز الاحتشاء في القشرة الدماغية مع التلوين بالكريستال البنفسجي إلى قياس متوسط حجم الاحتشاء بمقدار 15.4 cubic millimeters، وهو ما يمثل تقريباً 12% من نصف كرة دماغية واحدة. ويعد الانحراف المعياري لهذا النموذج منخفضاً جداً. بالإضافة إلى ذلك، أظهر موقع الاحتشاء تبايناً طفيفاً.

بمجرد إعدادها، يمكن إنهاء هذه العملية في غضون 10 دقائق إذا نُفذت بشكل صحيح. وبالإضافة إلى اختبارات الأسطوانة الموضحة وصبغ البنفسج البلوري، يمكن استخدام اختبارات سلوكية أخرى معتمدة وطرق نسيجية لمزيد من توصيف النتيجة ومعالجة أسئلة بحثية محددة. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء انسداد دائم للشريان السباتي الأوسط البعيد (distal MCA) في الفئران.

نوصي بشدة باستخدام إجراءات التشغيل القياسية والتوثيق التفصيلي لضمان إمكانية تكرار الطريقة.