الفئران زرع القرنية: نموذج لدراسة الشكل الأكثر شيوعا من الصلبة زراعة الأعضاء

الهدف العام من الإجراء التالي هو تقديم نموذج لرفض الطعم الخيفي الحاد للقرنية. يتم تحقيق ذلك عن طريق إزالة قرنية المتبرع أولا. تتمثل الخطوات التالية من الإجراء في إعداد سرير الكسب غير المشروع المتلقي وخياطة القرنية المانحة في مكانها.

ثم يتم اختبار سلامة الكسب غير المشروع ، وإذا لم يكن هناك تسرب ، يتم خياطة الجفن لإغلاقه. بعد أسبوع ، يتم تقييم عتامة طعم القرنية لقياس رفض الطعم الخيفي. في النهاية ، يمكن استخدام النموذج ، ويمكن اختبار مجموعة متنوعة من الاستراتيجيات العلاجية لتحديد أهم العوامل المرتبطة برفض الطعم الخيفي لعمليات زرع الأعضاء الصلبة.

زراعة القرنية هي الأكثر شيوعا في الولايات المتحدة. هناك العديد من النماذج الحيوانية المتاحة لهذا الإجراء ، لكن الفئران هي الأكثر استخداما. تم استخدام هذا النموذج لتحديد العوامل ، بما في ذلك رفض وقبول عملية زرع القرنية.

بعد تخدير الفئران المانحة والمتلقية وتأكيد حالات التخدير الخاصة بها عن طريق قرصة إصبع القدم ، ضع مرهم التشحيم النقي على العيون التي لا تخضع لعملية جراحية. ثم قم بتأمين الرأس بالعين المانحة أفقيا على دعامة قوية ومتحركة باستخدام شريط من الشريط عبر الرقبة. الآن باستخدام سن قطره ملليمترين تم مصبوغ طرفه باللون الأزرق الميثيل ، حدد موقع طعم القرنية المركزي.

ثم باستخدام شفرة سكين العين 15 درجة ، اخترق القرنية للمساعدة في تجنب تلف العدسة الأساسية. حقن المحلول اللزج المرن في الغرفة الأمامية حتى تصبح الغرفة أعمق. الآن استئصال الكسب غير المشروع المتبرع بمقص البندقية وانقل الكسب غير المشروع إلى طبق من HBSS على الجليد حتى استخدامه لتحقيق madres ، وقم بإعطاء بضع قطرات من 1٪ tpic aide و 2.5٪ إيفرين هيدروكلوريد للعين المتلقية.

ثم باستخدام سن 1.5 ملم ، حدد موقع الكسب غير المشروع كما هو موضح سابقا ، باستخدام شفرة سكين العين 15 درجة ، اخترق القرنية وحقن محلول لزج مرن في الغرفة الأمامية لتعميقها. من أجل الحفاظ على مسافة بين القرنية المانحة والعدسة ، يقلل هذا من فرصة تلف العدسة الأساسية وبطانة المتبرع. باستخدام مقص البندقية ، قم بإزالة زر القرنية المركزي المحدد من المستلم وتخلص منه.

أضف وسط لزج مرن إلى المنطقة التي تم إخلاؤها عن طريق إزالة زر القرنية لحماية الخلايا البطانية للقرنية من التلف عن طريق الاتصال المباشر بالعدسة. الآن ضع قرنية المتبرع فوق فراش الكسب غير المشروع باستخدام ملقط دقيق فائق النعومة. ضع اللقمة الأولى من خياطة النايلون 11.0 في الجانب المتبرع من خلال قرنية المتبرع بحوالي 90٪ من السماكة الكاملة.

ثم إلى الجانب المتلقي بنفس العمق ، ثم اربطها. استمر في تأمين القرنية المزروعة باستخدام خيوط منتصف الكاردينال. كل ما هو مطلوب هو ما مجموعه ثماني إلى 10 خيوط.

الآن إصلاح وغسل الغرفة الأمامية بحقن من المحلول الملحي. بدلا من ذلك ، قم بحقن الهواء في الغرفة الأمامية لإصلاحها. بعد الحقن ، اختبر سلامة الكسب غير المشروع برفق باستخدام إسفنجة السليلوز.

أخيرا ، قم بتقييم العين. تحديد ما إذا كان حدقة العين مستديرا وما إذا كانت الحجرة الأمامية تبدو طبيعية. إذا بدا الكسب غير المشروع جيدا ، ضع مرهما مضادا حيويا وأغلق الجفن اختياريا باستخدام خياطة حريرية 7.0 بعد الجراحة.

راقب الماوس حتى يستيقظ تماما ثم استمر في مراقبته في قفص منزله لمدة يومين. قم بإزالة الغرز من الفأر المخدر بين أربعة وسبعة أيام بعد العملية. بعد إزالة الغرز ، راقب الماوس لعدة أيام.

باستخدام مقياس التعتيم ، قم بتقييم كل قرنية بدرجة من صفر إلى خمسة. يشير الصفر إلى عدم وجود عتامة. تتوافق درجة واحد مع الحد الأدنى من التعتيم السطحي.

الدرجة الثانية إلى عتامة خفيفة إلى أعمق مع تلميذ أساسي ملحوظ. وقزحية العين علامة على درجة ثلاثة للقرنيات ذات التعتيم اللحمي حيث لا يمكن رؤية القزحية بالتفصيل باستثناء هوامش التلميذ. إذا كان هناك عتامة لحمية كثيفة ولا يمكن رؤية أي هياكل أساسية ، فامنح الكسب غير المشروع درجة أربعة.

إذا كان هناك عتامة كاملة مع وذمة لحمية مكثفة وتم حجب كل من التلميذ والقزحية تماما ، فقم بتسجيل الكسب غير المشروع بخمس يقترح بروتوكول النص أيضا مقياسا من صفر إلى ثمانية على تسلل الأوعية الدموية. يمكن إجراء مجموعة متنوعة من التلاعب باستخدام نموذج الكسب غير المشروع.

على سبيل المثال ، يمكن إضافة خلايا الطحال إلى الغرفة الأمامية من الفأر المتبرع. بعد القتل الرحيم للمتبرع ، قم بإزالة الطحال ونقله إلى مصفاة خلوية باستخدام مكبس حقنة سعة ثلاثة ملليلتر ، وقم بتعطيل الطحال ، ثم اغسل خلايا الطحال في 10 ملليلتر من HBSS ، وأعد تعليق الخلايا المغسولة في 10 ملليلتر من HBSS وعد الخلايا باستخدام مقياس الخلوي الدموي. احتفظ بالخلايا في درجة حرارة الغرفة حتى يتم استخدامها لاحقا.

قبل إجراء عملية زرع القرنية ، قم بحقن الخلايا في الغرفة الأمامية في العين المقابلة باستخدام مجهر تشريح ، وحقن 1 مليون خلية طحال في خمسة ميكرولترات من HBSS من إبرة قياس 33. تم استخدام النموذج لاختبار ما إذا كان تحمل الخلايا التائية لمستضد ألو الجهازي للمستضدات التي يعبر عنها طعم القرنية المتبرع قد يحسن بقاء الكسب غير المشروع. تم تحمل الفئران BC إلى C 57 أسود 10 مستضدات ألو عن طريق حقن خلايا الطحال B 10 في الغرفة الأمامية.

هذا لم يحسن قبول طعم القرنية. تظهر الدراسات أن إثبات تحمل المستضد المحدد للمستضد الألو كما تم قياسه بواسطة استجابات DTH لا يؤثر على نتيجة الطعوم الخيفية للجلد أو القرنية. أظهرت دراسة مماثلة أنه عندما تم إثبات تحمل DTH في فئران BAB c تجاه مستضدات B 10 allo ، فإن ترقيع الجلد الذي يحافظ على بعض أو كل مستضدات B 10 allo لم يزيد من البقاء على قيد الحياة.

الأمعاء C مع DTH الثابت الخاص بالمستضد لم تستفد بشكل ملموس من الطعوم الخيفية للقرنية أو الجلد. كما ترون من تجربة اليوم ، فإن زراعة القرنية هي إجراء صعب من الناحية الفنية. ومع ذلك ، هذا هو أفضل نموذج لدراسة الخلايا والعوامل التي تحدد نجاح الرسم البياني أو فشله.