متعدد القطب تسجيلات صفيف من داء الصرع بعد الجراحة القشرية الأنسجة البشرية

الهدف العام من هذا الإجراء هو إجراء تسجيلات مصفوفة متعددة الأقطاب الكهربائية للأحداث الشبيهة بالنوبات من الأنسجة القشرية للصرع البشري ، وبالتالي توفير طريقة لمعالجة الآليات الأساسية الكامنة وراء أنشطة الصرع ، والبدء ، والانتشار ، وتأثيرات الأدوية المضادة للصرع على المستويين الخلوي والشبكي. يتم تحقيق ذلك أولا عن طريق استئصال الأنسجة القشرية البشرية بعناية من المرضى الذين يعانون من الصرع المقاوم للأدوية أثناء الجراحة. الخطوة الثانية هي إزالة الجلطات الدموية والأوعية والسحايا والمادة البيضاء الزائدة قبل التقطيع.

بعد ذلك ، قم بتقطيع كتلة الأنسجة إلى شرائح 400 ميكرون. الخطوة الأخيرة هي الحفاظ على الشرائح في ظروف واجهة الأكسجين العالي ودرجة الحرارة المتحكم فيها مع التروية البطيئة. في النهاية ، يتم استخدام تقنية مصفوفة الأقطاب الكهربائية المتعددة لتسجيل النشاط الشبيه بالخلايا الداخلية تلقائيا وإثارة الأحداث الشبيهة ب ictal.

يبحث مختبرنا في دور التفاعلات الدبقية العصبية في علم الأمراض الفيزيائية الدماغية لدراسة كيف يمكن للخلايا العصبية أن تولد نشاطا شبكيا مرضيا لدى البشر. لقد أنشأنا مؤخرا تسجيلات مصفوفة متعددة الأقطاب الكهربائية للأنسجة القشرية البشرية بعد الجراحة بالتعاون مع رعاية الرقبة ومستشفيات بتري. اليوم ، سيوضح لك جراح الأعصاب توماس بلو في مستشفى رعاية الرقبة ، جنبا إلى جنب مع أخصائي الصرع والباحث في مستشفى اللازورد وإيلينا DOI ما بعد الدكتوراه في مختبري كيفية أداء هذه التقنيات والاستفادة منها بشكل جيد.

من جمع أنسجة الصرع البشرية إلى تسجيلات MEA ex vivo ، يسمح استخدام الأنسجة القشرية البشرية بالصدمات الكهربائية لعلاج مرضى الصرع بالاستكشاف المباشر للخلايا العصبية البشرية الصرعية والخلايا الدبقية التي يتم الحفاظ عليها وظيفيا ، والتي ترتبط ببعضها البعض في شبكات محددة. في التحقيقات المختبرية ، يتيح النسيج البشري الوصول إلى الخلايا المفردة وأنشطة الشبكة ، والآليات الأيونية ، والتي لا يمكن معالجتها بالكامل في الجسم الحي. يمكن أن يساعد تسجيل MEA للأنسجة القشرية البشرية في الإجابة على سؤال رئيسي في مجال الصرع ، مثل الآليات الخلوية الكامنة وراء التكوين الخارجي وانتشار النوبات.

تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية إلى الصرع الآفي وعلاجه لأنها تسمح بفهم آليات مقاومة الدواء الصيدلاني وتأثير الدواء المضاد للصرع على حدث شبيه بالنوبات المسجل في الشرائح القشرية البشرية. في المختبر. الميزة الرئيسية للمصفوفات الكهربائية المتعددة على الطرق الحالية مثل e أو e أو g أو في الجسم الحي ، هي أنها تسمح بالتحفيز غير الجراحي والمتزامن وتسجيل إمكانات المجال والنشاط متعدد الوحدات من عدة جوانب من الأنسجة.

لبدء الإجراء ، قم بإعداد غرفة الواجهة عن طريق ملء الجزء السفلي أولا بالماء المقطر. ثم قم بتوصيل الغرفة بمصدر كربوجين. بعد ذلك ، قم بقص قطعة من أنسجة العدسة لتناسب المنطقة المسطحة من حجرة الشريحة.

ضعه بجوار أنبوب الإدخال للسماح للفقاعات بالهروب من خط الإدخال قبل الوصول إلى الشرائح. بعد ذلك ، قم بقص قطعتين من خيوط القطن التي تقطعت بها السبل بنفس طول قطعة من أنسجة العدسة. ضعها على جانبي المنطقة المسطحة للغرفة ، واضبط معدل تدفق المضخة التمعجية على مليلتر واحد في الدقيقة.

بعد ذلك قم بتشغيل الأكسجين للماء في الجزء السفلي من الغرفة. ثم اضبط وحدة التحكم في درجة الحرارة على 37 درجة مئوية. قم بتغطية الجزء العلوي من غرفة الواجهة بقطعة من الطفيلي وانتظر 30 دقيقة على الأقل حتى تزداد درجة الحرارة وتستقر.

الآن ، قم بإعداد أدوات التشريح ، والتي تشمل ملقطين دقيقين ، وملعقة ، وملعقة صغيرة ، وشفرة ، وطبقين زجاجيين من بتري ، وفرشتين ، وغراء سيانواكريلات. بعد ذلك ، قم بإعداد الاهتزاز عن طريق تعيين معلمات التقطيع. في هذا الإجراء ، قم بإزالة السائل النخاعي النخاعي المحضر من الفريزر الذي يبلغ سعره 80 درجة مئوية تحت الصفر وسحقه إلى سلاش.

أكسجته بالكربوجين. ثم انقل 250 مل من سلاش السائل الدماغي النخاعي A إلى زجاجة زجاجية واحتفظ بها في زجاجة مفعل مملوءة بالثلج لجمع الأنسجة في غرفة الجراحة. تحت التخدير العام القياسي ، استخدم نظام الملاحة العصبية للسماح بتوطين دقيق للقشرة.

بعد ذلك ، قم بعمل شق في الجلد ، ثم قم بعمل ثقب في العظام ، متبوعا ببضع القحف. بعد ذلك ، ارفع رفرف العظام برفق وافتح الجافية بالمقص. بعد ذلك ، قم بإجراء استئصال كتلة قشرة الصرع وتجنب التخثر الواسع.

قم بقطع كتلة قشرية بسمك سنتيمتر واحد وضعها في السكروز المؤكسج المجمد القائم على السائل الدماغي النخاعي. بعد ذلك ، انقل الأنسجة الموجودة في السائل الدماغي النخاعي المجمد إلى المختبر في أسرع وقت ممكن ، مع تجنب الصدمات الميكانيكية. الآن ، املأ طبق بتري وصينية الاهتزاز العازلة بطين A CSF المؤكسج القائم على السكروز واستمر في أكسجة طين A CSF بالكربوجين.

ثم أخرج المنديل بعناية من الزجاجة بملعقة وضعه في طبق بتري. باستخدام الملقط قم بإزالة الجلطات الدموية والأوعية والسحايا بعناية لتجنب المقاومة أثناء التقطيع. قطع جانب الأنسجة بشفرة للحصول على سطح مستو مواز قدر الإمكان للجانب الآخر من الأنسجة.

ثم قم بلصق الأنسجة على لوحة عينة الاهتزاز من أجل تحضير شرائح قشرية عرضية. بعد ذلك ، ضعه في الدرج العازل وقم بتقطيع شرائح بسمك 400 ميكرون بسرعة منخفضة. بعد ذلك ، قم بقص بضع قطع من أنسجة العدسة بملعقة وفرشاة.

انقل هذه الشرائح من أنسجة العدسة إلى حجرة الواجهة. احتضنها عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة على الأقل قبل التسجيل. في هذا الإجراء، قم بتوصيل نظام التروية بمضخة تمعجية ونظام MEA بجهاز كمبيوتر.

ثم ضع شريحة MEA فارغة داخل مكبر الصوت. بعد ذلك ، اضبط وحدة التحكم في درجة الحرارة لتسخين عنصر القنية في غرفة MEA على 37 درجة مئوية. ابدأ نضح السائل الدماغي النخاعي المؤكسج بمعدل خمسة إلى ستة ملليلتر في الدقيقة.

بعد ذلك ، افتح برنامج التسجيل. تأكد من أن جميع أقطاب MEA متصلة جيدا وأنه لا توجد ضوضاء بسبب التروية. الآن صب بعض التسجيل الدافئ السائل الدماغي النخاعي في طبق بتري زجاجي.

انقل شريحة من حجرة الواجهة إلى طبق بتري عن طريق الإمساك بأنسجة العدسة. ثم افصل الشريحة بعناية عن الأنسجة عن طريق غمرها في المحلول ، أو استخدم فرشاة صغيرة لتسهيل الانفصال. بعد ذلك ، املأ شريحة MEA ببعض السائل الدماغي النخاعي.

انقل الشريحة إلى شريحة MEA باستخدام ملعقة مع ماصة بلاستيكية سابقة. قم بإزالة المحلول برفق لجعل الشريحة تلتصق بمنطقة القطب الكهربائي واحتفظ بها في مكانها باستخدام مرساة بلاتينية. بعد ذلك ، أضف ملليلترا واحدا من تسجيل السائل الدماغي النخاعي إلى شريحة MEA وضعها في مكبر الصوت.

ثم ابدأ التروية من خمسة إلى ستة ملليلتر في الدقيقة. بعد ذلك ، تحقق من موضع الشريحة في منطقة تسجيل MEA. باستخدام برنامج مراقبة MEA ، قم بضبطه إذا لزم الأمر.

من أجل التسجيل من الطبقات القشرية والتقاط صورة ، ابدأ التسجيل. هذا أثر تمثيلي لنشاط الشريحة القشرية البشرية المسجلة بواسطة قطب MEA. في السائل الدماغي النخاعي العادي ، من الممكن ملاحظة نشاط داخلي مثل النشاط التلقائي بعد 15 دقيقة من التروية مع ستة مللي مولار من البوتاسيوم A CSF الخالي من المغنيسيوم.

تظهر النوبة الأولى وتتبعها أحداث أخرى كل دقيقتين إلى ثلاث دقائق. يوضح التتبع الأزرق النشاط الذي تم تكبيره. تعرض هذه اللوحة البيانات عالية التمرير التي تمت تصفيتها عند 250 هرتز ، والتي تكشف عن نشاط متعدد الوحدات عند التكبير هنا هو تسجيل تمثيلي لنوبة من جميع أقطاب MEA الخالية من المغنيسيوم.

ستة مللي مولار من البوتاسيوم أ السائل النخاعي. يمثل كل مربع قطبا كهربائيا من مصفوفة 12 × 12 MEA ويظهر نافذة زمنية 82. يشير الخط المنقط إلى موضع السطح القشري بالنسبة إلى مصفوفة MEA.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية نقل الأنسجة القشرية البشرية بأمان ، وإعداد وتخزين الصدفية القشرية القابلة للحياة ، وإجراء تسجيلات MEA لأنشطة الصرع التلقائية والمستحثة أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن يكون لديك تعاون وثيق بين الفريق السريري في المستشفى والباحثين في المختبر. لا تنس أبدا أن العمل مع الأنسجة البشرية يمكن أن يكون خطيرا ، ويجب دائما القيام بالحماية ، مثل ارتداء القفازات لتجنب أي مرض معد محتمل بعد هذا الإجراء. يمكن أن تقترن تقنيات أخرى مثل التصوير الفلوري ، ومصباح التصحيح ، والتسجيل ، وفرز السنبلة ، والتحليل النسيجي بتسجيلات EM EA لربط الخصائص المشبكية وديناميكيات أيون سلوك الخلية المفردة والتشوهات الخلوية والجزيئية بالأنشطة السكانية.

يمكن أن يمهد إجراء تسجيلات MEA لأنسجة الصرع البشرية الطريق للباحث لاستكشاف الصرع الآفي من أجل توضيح الآليات الكامنة وراء تكوين الآفات ومقاومة الأدوية ، بالإضافة إلى دور التفاعل العصبي في هذه الظاهرة. شكرا لك على المشاهدة ونتمنى لك السعادة في تجربتك.