الزائفة الزنجارية المستحثة الرئة الإصابات نموذج

الهدف العام من هذا الإجراء هو تقليد الالتهاب الرئوي وحالات إصابة الرئة في الفأر عن طريق إعطاء الهواء الكاذب. يتم تحقيق ذلك عن طريق تحضير السودوموناس أولا بالتركيز المناسب للحقن. في الخطوة الثانية ، تتعرض القصبة الهوائية للفأر بعناية ثم يتم إعطاء البكتيريا للرئتين عن طريق الحقن داخل القصبة الهوائية.

في الخطوة الأخيرة ، تتم مراقبة تطور المرض في الفأر بعناية. في النهاية ، يمكن دراسة التهاب الرئة وتغيرات موت الخلايا في الحاجز السنخي وإصلاح الرئة في رئة الفأر المحقونة بالهوائي الكاذب. تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية إلى علاج إصابة الرئة الحادة الناجمة عن الالتهاب الرئوي.

نظرا لأن هذا النموذج يحاكي العمليات التي تلي الالتهاب الرئوي لإنشاء quats من p Aerogen ، يبدأ PA 1 0 3 للتثبيت عن طريق نقل قارورة تبريد للبكتيريا من 80 درجة مئوية تحت الصفر ، والتخزين إلى مستوى السلامة الحيوية الثاني أو مختبر BSL اثنين في رف في صندوق مبطن بمناشف ورقية مبللة بالإيثانول بنسبة 70٪. ثم تحت خط BSL اثنين من غطاء محرك السيارة ، فإن P aerogen PA 1 0 3 مستعمرات بكتيرية على صفائح أجار دم الأغنام ، وتنمو المستعمرات في حاضنة 37 درجة مئوية. بعد حوالي 15 ساعة ، استخدم حلقة بكتيريا لنقل المستعمرات إلى خمسة ملليلتر من PBS.

ثم قم بتخفيف البكتيريا بشكل متسلسل في المزيد من PBS إلى واحد إلى 10 ، إلى أربعة ، إلى واحد إلى 10 إلى التركيزات السبعة ، مما يؤدي إلى التخفيف على ألواح أجار دم الأغنام الطازجة. ثم بعد حوالي 15 ساعة أخرى من الحضانة ، احسب وحدات تشكيل المستعمرة لكل لوحة لتحديد تركيز البكتيريا. بعد ذلك ، قم ب Eloqua الكمية المناسبة من البكتيريا في 0.5 مل من PBS في 1.5 مليلتر ، وقوارير تبريد ذات غطاء لولبي معقم ، ثم ضع القوارير محكمة الغلق في رف قارورة بالتبريد على مناشف ورقية محملة بالمطهر في صندوق غطاء سريع في خزانة BSL ، وقم بتغطية عيون برفق بمرهم فيتو يعمل.

احلق الشق بسرعة ونظف الجلد باستخدام مسحات متناوبة من الكحول وبوفيدون اليود ثلاث مرات وتأكد من التخدير عن طريق إصبع القدم. قرصة ، كبح جماح الفأر على لوح جراحي بعد علاج الجلد بمخدر موضعي. بعد ذلك ، قم بعمل شق صغير بطول خمسة ملليمترات في خط الوسط من عنق واستخدم ملقطا حادا لتحريك العضلات برفق للوصول إلى القصبة الهوائية.

عندما تتعرض القصبة الهوائية ، ارسم ما يصل إلى واحد في 10 إلى وحدات المستعمرة الخمس المكونة للبكتيريا في 20 إلى 30 ميكرولترا من PBS في حقنة يمكن التخلص منها سعة ملليلتر واحدة ومجهزة بإبرة قياس 27. ثم أدخل الإبرة في القصبة الهوائية وحقن المحلول ببطء. تأكد من أن يلهث ، مما يشير عادة إلى أن المحلول قد وصل إلى الرئة.

الآن أغلق الجرح بشكل معقم بستة خيوط معقمة أحادية الشعيرات الصفرية وقم بإدارة تسكين الألم بعد الجراحة. ثم تخلص من المحاقن والإبر في حاوية الأدوات الحادة ذات المخاطر البيولوجية المناسبة بعد حقن كل. كيف حال مايرز منفردة في أقفاص نظيفة في بيئة دافئة؟

فحص كل 30 دقيقة حتى تستعيد وعيها وتبدأ في الحركة. عالج الأدوات الجراحية بمطهر ثاني أكسيد الكلور لمدة 15 دقيقة. ثم اشطف الأدوات وأعدها إلى المختبر لمزيد من التعقيم حسب الضرورة.

ضع الفئران في منشأة BSL اثنين من طوال التجربة ثم بعد الاستئصال تحت التخدير ، اجمع أنسجة الرئة من كل تحت غطاء محرك BSL ثنائي. أخيرا ، إذا كانت هناك حاجة إلى مزيد من المعالجة ، فقم بنقل العينات في أنابيب محكمة الغلق موضوعة على رف على مناشف ورقية محملة بالمطهرات في صندوق غطاء كبس إلى منشأة المعالجة المناسبة. في هذه التجربة التمثيلية بعد 24 إلى 72 ساعة من حقن الهواء الفوسفوري ، يمكن ملاحظة زيادة الخلوية في أقسام الرئة.

بحلول 96 ساعة ، بدأت الرئة في التعافي وبحلول سبعة أيام ، يتم استعادة مورفولوجيا الحويصلات الهوائية الطبيعية إلى حد كبير. يظهر تلطيخ النفق لأقسام الرئة بعد 24 ساعة من تركيب هواء الفوسفور موت الخلايا داخل خلايا الحويصلات الهوائية لدراسة عملية الإصلاح. في هذه الإصابة ، يمكن حقن نموذج BRDU في الفئران بعد ثلاثة أيام من إعطاء الهواء.

كما هو موضح ، تظهر المعالجة بالهواء p فرط انتشار في أنسجة الرئة مقارنة بالحيوانات المعالجة بالسيطرة. لدراسة التغيرات في الحاجز والنفاذية والالتهاب بعد الإصابة ، يمكن جمع غسل القصبات الهوائية أو سائل الأمعاء في نقاط زمنية مختلفة. بعد الحقن الهوائي p ، على سبيل المثال ، يزداد تركيز البروتين داخل الأمعاء بشكل كبير بعد 48 ساعة من التثبيت البكتيري مما يشير إلى تسرب الحاجز الظهاري لعدد الخلايا.

تزداد الأمعاء أيضا بشكل ملحوظ في هذا الوقت ، مما يشير إلى استجابة التهابية بعد أربعة إلى خمسة أيام من حقن هوائي P ، يبدأ كل من مستوى بروتين الأمعاء وعدد الخلايا في الانخفاض مما يشير إلى الشفاء. علاوة على ذلك ، يزداد مستوى البروتين الالتهابي للبلاعم الثاني ، وهو السيتوكين المشارك في جذب العدلات بشكل ملحوظ في 48 ساعة ثم يعود إلى المستويات القاعدية في 96 ساعة. في تحلل الرئة بدون p aerogen ، لوحظ عدد قليل فقط من الخلايا الوحيدة في سائل الأمعاء.

في المقابل ، يوجد عدد كبير من العدلات في الأمعاء ، معزولة بعد 48 ساعة من الحقن. بحلول 96 ساعة ، يعود تكوين خلايا الأمعاء إلى مستويات التحكم بعد هذا الإجراء. يمكن إجراء طرق أخرى مثل التنظيف النسيجي أو المقطع أو جمع غسل القصبات الهوائية للإجابة على أسئلة إضافية مثل ، ما هي الخلايا أو العوامل المشاركة في الالتهاب والإصلاح بعد إصابة الرئة الحادة؟