Name: الزائفة الزنجارية المستحثة الرئة الإصابات نموذج (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 24 s
Description: اكتشف نموذج إصابة الرئة المستحث بالزائفة الزنجارية في الفئران عبر الحقن داخل القصبة الهوائية. يُمكّن هذا النموذج من دراسة الالتهاب وآليات إصلاح أنسجة الرئة بدقة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

تم دعم هذا العمل من خلال منح المعاهد الوطنية للصحة HL105947-01 (YL) و HL07829-16 (AM) و HL090152 (AM).

تمت الموافقة على التجارب على الحيوانات من قبل لجنة رعاية الحيوان واللجان المؤسسية للسلامة الأحيائية في جامعة إلينوي في شيكاغو. ملاحظة: يجب أن يتم تنفيذ جميع الإجراءات التي تنطوي الزائفة مع السلامة الأحيائية المستوى 2 (BSL2) الممارسات، والتي تشمل ولكن لا تقتصر على: قناع، حماية العين، ثوب أو بذلة، وقفازات مزدوجة. العمل في شهادة السلامة الأحيائية مجلس الوزراء. علاج الأدوات في اتصال مع البكتيريا مع التبييض أو ثاني أكسيد الكلور المطهرة القائم. استخدام مربع مختومة لعينات النقل. 1. P. الزنجارية الثقافة والنمو <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> متجر P. الزنجارية PA103 باعتباره الأسهم البكتيري في كاب المسمار cryovial في -80 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع القارورة في رفوف في مربع مع 70٪ من الإيثانول المناشف الورقية المبللة واتخاذ لغرفة المستوى 2 (BSL2) المختبر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خط البكتيريا على لوحات أجار الدم الأغنام وتنمو عند 37 درجة مئوية لمدة 15 ساعة ~ في حاضنة. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> في غطاء BSL2، خدش البكتيريا من البكتيريا لوحة مع حلقة وresuspend في 5 مل PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخزين السهم عند 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى 3 أشهر. ومع ذلك، وتحديد عيار كل 2 أسابيع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> متسلسل تمييع البكتيريا في برنامج تلفزيوني (عادة من 4 إلى 1:10 1:10 7) لوحة والتخفيف من المعروف على لوحات أجار الدم الأغنام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لوحات ل~ 15 ساعة. عد المستعمرات وحساب مستعمرة تشكيل وحدة (كفو) لتحديد تركيز البكتيريا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> resuspend وتركيزات مناسبة (~ 5 × 10 3 خلية / ميكرولتر) في 0.5 مل PBS في 1.5 مل العقيمة cryovials سقف المسمار. ختم cryovials ووضعها في رف cryovial على مطهر المناشف الورقية لادن في مربع المفاجئة غطاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل مربع إلى منشأة الحيوان BSL2. مرة واحدة هناك، افتح مربع في مجلس الوزراء BSL2. </li></ol> 2. P. الزنجارية تقطير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء عملية جراحية بقاء جو معقم و مطهر (قفازات معقمة، والأدوات المعقمة، وتقنيات العقيم). استخدام ثنى العقيمة لتوفير سطح العمل لمعقمة (تعقيمها) الأدوات الجراحية. تعقيم الأدوات باستخدام حبة تعقيم الساخن بين كل إجراء تقطير القصبة الهوائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وزن الفئران قبل التخدير. تخدير الفئران مع الكيتامين (100 ملغ / كلغ)، زيلازين (5 ملغ / كلغ)، في 0،1-0،2 مل PBS البريتونى (IP). تحديد فعالية مخدر من غير استجابة لقرصة أخمص قدميه. استخدام مرهم البيطرية على العينين لمنع جفاف تحت التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كبح الفئران على لوحة العمليات الجراحية في BSL2 مجلس الوزراء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد المنطقة لقطعها. يحلق هذا المجال وإعداد الجلد باستخدام بالتناوب الكحول ومسحات اليود البوفيدون 3 مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> علاج منطقة شق مع مخدر موضعي (ليدوكائين)، وهذا التخدير كافية لجراحة بسيطة مثل شق الجلد للوصول إلى القصبة الهوائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق صغير (حوالي 5 ملم) في خط الوسط من الرقبة، واستخدام و حادةorceps للتحرك برفق العضلات للوصول إلى القصبة الهوائية. فضح القصبة الهوائية عن طريق تشريح الجراحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رسم البكتيريا الحل في 1 مل حقنة واحدة مع إبرة 27 G. لكل الماوس، إدارة 20-30 ميكرولتر من البكتيريا في التركيز المناسب (تصل إلى 10 5 كفو كل الماوس). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ادخال الإبرة في القصبة الهوائية. حقن محلول ببطء في القصبة الهوائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من أن صيحات الحيوان، والتي عادة ما يشير هذا الحل قد وصلت إلى الرئة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق الجرح مع الغرز معقمة (6-0 حيدة) تحت ظروف معقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام 0.1 ملغ / كغ عن طريق الحقن تحت الجلد البوبرينورفين كما تسكين بعد العملية للسيطرة على الألم بعد الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من أن الوقت اللازم من تحريض التخدير الأولي لإغلاق الجرح هو أقل من 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الحقن، والتخلص من المحاقن والإبر في وعاء واقية الأدوات الحادة المناسبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معالجة الأدوات الجراحية مع ثاني أكسيد الكلور الديسي مقرهاnfectant لمدة 15 دقيقة، شطف والعودة إلى المختبر للتعقيم وإعادة استخدامها عند الضرورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بيت الفئران منفردة في أقفاص نظيفة في بيئة دافئة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اطمئنان على الحيوانات كل 30 دقيقة حتى يستعيد وعيه ويبدأ في التحرك. وبعد ذلك في فترات زمنية 12 ساعة لمدة 3 أيام بعد الجراحة الأولى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إبقاء الفئران في المنشأة BSL2 الحيوان في كافة مراحل التجربة. تأكد من أن الأنسجة الوحيدة الواردة في صندوق مغلق يترك منشأة BSL2 الحيوان. إذا كانت الفئران تبدي أي من السلوكيات المحتضرة (الذي يعرف بأنه ضيق التنفس والخمول، وعدم ambulate ردا على التحفيز لطيف) في أي نقطة في الدراسة، الموت ببطء الفئران عن طريق الاستنشاق CO 2 من مصدر المعبأة تليها خلع عنق الرحم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء موضوع التجريبي استنزاف تحت التخدير. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع أنسجة الرئة من الفئران الموت الرحيم. تنفيذ هذه الإجراءات في غطاء BSL2. إذا لزم الأمر، ونقل العينة باستخدام أنابيب مختومة وضعت في راكك مطهر على مناشف ورقية لادن في مربع غطاء المفاجئة لمزيد من العملية. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Ware, L. B., Matthay, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acute+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">The acute respiratory distress syndrome.</a> N Engl J Med. 342, 1334-1349 (2000).</li>
<li>Matthay, M. A., Ware, L. B., Zimmerman, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acute+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">The acute respiratory distress syndrome.</a> J Clin Invest. 122, 2731-2740 (2012).</li>
<li>Shimabukuro, D. W., Sawa, T., Gropper, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injury+and+repair+in+lung+and+airways%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Injury and repair in lung and airways.</a> Crit Care Med. 31 (8), 524-531 (2003).</li>
<li>Wansleeben, C., Barkauskas, C. E., Rock, J. R., Hogan, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+of+the+adult+lung%3A+Their+development+and+role+in+homeostasis%2C+regeneration%2C+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Stem cells of the adult lung: Their development and role in homeostasis, regeneration, and disease.</a> Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 2, 131-148 (2013).</li>
<li>Singleton, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamin+2+and+c-abl+are+novel+regulators+of+hyperoxia-mediated+nadph+oxidase+activation+and+reactive+oxygen+species+production+in+caveolin-enriched+microdomains+of+the+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Dynamin 2 and c-abl are novel regulators of hyperoxia-mediated nadph oxidase activation and reactive oxygen species production in caveolin-enriched microdomains of the endothelium.</a> J Biol Chem. 284, 34964-34975 (2009).</li>
<li>Sadikot, R. T., Blackwell, T. S., Christman, J. W., Prince, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogen-host+interactions+in+pseudomonas+aeruginosa+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Pathogen-host interactions in pseudomonas aeruginosa pneumonia.</a> Am J Respir Crit Care Med. 171, 1209-1223 (2005).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foxm1+mediates+the+progenitor+function+of+type+ii+epithelial+cells+in+repairing+alveolar+injury+induced+by+pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Foxm1 mediates the progenitor function of type ii epithelial cells in repairing alveolar injury induced by pseudomonas aeruginosa.</a> J Exp Med. 208, 1473-1484 (2011).</li>
<li>Kurahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+septic+shock+in+pseudomonas+aeruginosa+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of septic shock in pseudomonas aeruginosa pneumonia.</a> J Clin Invest. 104, 743-750 (1999).</li>
<li>Kumar, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distal+airway+stem+cells+yield+alveoli+in+vitro+and+during+lung+regeneration+following+h1n1+influenza+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Distal airway stem cells yield alveoli in vitro and during lung regeneration following h1n1 influenza infection.</a> Cell. 147, 525-538 (2011).</li>
<li>Delano, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sepsis+induces+early+alterations+in+innate+immunity+that+impact+mortality+to+secondary+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunology%22%5BJournal%5D)">Sepsis induces early alterations in innate immunity that impact mortality to secondary infection.</a> J Immunology. 186, 195-202 (2011).</li>
<li>Lange, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+sepsis+following+smoke+inhalation+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">A murine model of sepsis following smoke inhalation injury.</a> Biochem Biophys Res Commun. 391 (3), 1555-1560 (2010).</li>
<li>Kobayashi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+chemokines+in+neutrophil+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci%22%5BJournal%5D)">The role of chemokines in neutrophil biology.</a> Front Biosci. 13, 2400-2407 (2008).</li>
<li>Matute-Bello, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Animal models of acute lung injury.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 295, L379-L399 (2008).</li>
<li>Sadikot, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+immunomodulation+of+the+nf-kappab+pathway+in+airway+epithelium+impacts+host+defense+against+pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Targeted immunomodulation of the nf-kappab pathway in airway epithelium impacts host defense against pseudomonas aeruginosa.</a> J Immunol. 176, 4923-4930 (2006).</li>
<li>Pinto, I. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+experimental+model+of+neutrophilic+pulmonary+response+induction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pneumologia%22%5BJournal%5D)">Development of an experimental model of neutrophilic pulmonary response induction in mice.</a> J Pneumologia. 29, 213-214 (2003).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

والزائفة الماوس الرئة نموذج الإصابة التي وصفنا هنا يحاكي العملية برمتها من التهاب أو إصابة الرئة، والإصلاح، والدقة التي تحدث بعد إصابة الرئة الحادة أو التهاب رئوي. لديها مزايا فريدة مقارنة مع العديد من النماذج إصابة أخرى في أنها ذات الصلة سريريا وآمنة نسبيا وسهلة في التعامل معها. في خطوة حاسمة في الإجراء هي أن حقن محلول البكتيريا يحتاج إلى أن تكون بطيئة جدا. إذا حقن سريع جدا، من المحتمل أن يموت قبل خنق الفئران. ب...

ويتعرض الرئتين لمسببات الأمراض البيئية وعرضة للالتهاب وإصابة 1-3. خلال الحالات المرضية مثل الالتهاب الرئوي أو متلازمة الشدة التنفسية للبالغين (ARDS)، مسببات الأمراض، فضلا عن العوامل الالتهابية الصادرة عن الكريات البيض تحفز الإصابة وموت الخلايا السنخية 1-3. من المهم تطوير نماذج حيوانية من إصابة الرئة الحادة لتسهيل دراسة علم الأمراض من الإصابة وكذلك آلية للإصلاح. حاليا، معظم الناس يستخدمون فرط التأكسج وبليوميسين يسببها الماوس نماذج إصابة الرئة 4. ومع ذلك، تسببت آليات فرط التأكسج الإصابة ليست هي نفسها حيث أن معظم إصابات الرئة شيوعا التي تحدث أثناء الالتهاب الرئوي أو ARDS 5. بليوميسين الإصابة الحادة يسببها نادرة في سياق السريرية 4. نحن هنا تقرير ماوس الرئة نموذج اصابة باستخدام الحقن داخل القصبة الهوائية من P. الزنجارية 6،7. هذا النموذج هو ذات الصلة سريريا، ويقلد عrocesses أن يحدث بعد الالتهاب الرئوي 8. على أنه انتهازي، الممرض في المستشفيات الأفراد المناعة، P. الزنجارية عادة يصيب الجهاز الرئوي، والمسالك البولية، والحروق، والجروح، ويسبب أيضا التهابات الدم الأخرى 6. البكتيريا تطلق الفوعة عامل ذيفان خارجي A، تتكاثر وتؤدي الاستجابة المناعية 6. الإدارة داخل trachael من P. الزنجارية يعكس الوضع في تعرض الإنسان للبكتيريا التي تسبب الالتهاب الرئوي، ومن المرجح أن يكون مختلفا عن أفادت مؤخرا فيروس الأنفلونزا H1N1 الرئة الناجم عن نموذج إصابة 9 في علم الأمراض. منذ P. الزنجارية هي العوامل المسببة للأمراض الانتهازية، وأنها آمنة نسبيا للتعامل مع مقارنة لبعض مسببات الأمراض أكثر ضراوة. نحن هنا يستخدم الحقن داخل القصبة الهوائية لإدارة البكتيريا لاحظنا أن هذه الطريقة إدخال المزيد من الجراثيم في المنطقة الأسناخ الرئوية البعيدة للمقارنةبعض الإجراءات الأخرى مثل استخدام القسطرة عن طريق الفم. بالمقارنة مع غيرها من نماذج إصابة الرئة الحادة، وP. نموذج الزنجارية الموصوفة هنا هي مناسبة لدراسة إصابة الرئة الناجمة عن بكتيريا والالتهاب المفرط. على عكس النماذج الحيوانية الأخرى التي تستخدم P. الزنجارية للحث على الإنتان 10،11، وهنا نستخدم الحقن داخل القصبة الهوائية من هذه البكتيريا للحث محلية إصابة الرئة الحادة.

<table><tbody><tr><td>مخدر: كيتامين, زيلازين, ليدوكائين, بوبرينورفين</td><td></td><td></td><td>صيدلانية 27</td></tr><tr><td>جرام إبرة</td><td>فيشر</td><td>1482648</td><td></td></tr><tr><td>حقنة</td><td>فيشر</td><td>14823434</td><td>1 مل</td></tr><tr><td>مقص</td> أدوات <td>العلوم</td><td></td><td></td>الدقيقة</tr><tr><td>ملقط</td><td>أدوات</td><td></td><td></td>العلوم الدقيقة</tr><tr><td>خياطة أدوات العلوم الدقيقة&nbsp;</td><td>فيشر</td><td>19-037-526</td><td></td></tr><tr><td>مقياس العين ، القفازات ، ثوب</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>السلامة الحيوية خزانة</td><td></td><td></td><td></td>السلامة الحيوية</tr><tr><td>المطهر</td><td></td><td></td> القائم على ثاني أكسيد الكلور <td>Clidox</td></tr><tr><td>لوحات أجار الدم للأغنام &nbsp ؛</td><td>توريد Medex</td><td>HL-1160</td><td></td></tr></tbody></table>

الزائفة الزنجارية المستحثة الرئة الإصابات نموذج

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

من أجل دراسة إصابة الرئة الحادة والالتهاب الرئوي الإنسان، فمن المهم تطوير نماذج حيوانية لتقليد العديد من المظاهر المرضية لهذا المرض. نحن هنا قمنا بتطوير نموذج إصابة الرئة الماوس عن طريق الحقن داخل القصبة الهوائية من البكتيريا الزائفة الزنجارية (P. الزنجارية أو PA). باستخدام هذا النموذج، تمكنا من إظهار التهاب الرئة في مرحلة مبكرة من الإصابة. وبالإضافة إلى ذلك، لوحظ السنخية الظهارية حاجز التسرب من خلال تحليل غسيل القصبات (BAL)؛ وموت الخلايا السنخية لوحظ من قبل تونيل الفحص باستخدام الأنسجة المحضرة من المصابين الرئتين. في مرحلة لاحقة بعد الإصابة، لاحظنا انتشار الخلايا المطلوبة لعملية الإصلاح. تم حل إصابة 7 أيام من بدء P. الزنجارية الحقن. هذا نموذج يحاكي مسار تسلسلي للالتهاب الرئة والإصابة وإصلاح أثناء الالتهاب الرئوي. هذا نموذج حيواني ذات الصلة سريريا هو مناسبة لدراسة علم الأمراض، وآلية للإصلاح، وollowing إصابة الرئة الحادة، ويمكن أيضا أن تستخدم لاختبار وكلاء العلاجية المحتملة لهذا المرض.

ابتداء من 24-72 ساعة بعد P. حقن الزنجارية، وقد لوحظ زيادة الخلوية في أقسام الرئة (الشكل 1A-D). بدأت الرئة للتعافي من اصابة في آخر 96 ساعة (الشكل 1E). في 7 أيام إضافة P. الزنجارية، تم استعادة التشكل الحويصلات الهوائية العادية إلى حد كبير (الشكل 1F). نفق تلطيخ أقسام الرئة باستخدام أعدت في 24 ساعة بعد P. أظهر الزنجارية موت الخلية في الخلايا الأسناخ (الشكل 1G-I). من أجل درا...

لقد طورنا نموذجا لإصابة رئة الفأر عن طريق الحقن داخل القصبة الهوائية للبكتيريا Pseudomonas aeruginosa. يحاكي هذا النموذج إصابة الرئة أثناء الالتهاب الرئوي وهو ذو صلة سريريا.

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو تقليد الالتهاب الرئوي وحالات إصابة الرئة في الفأر عن طريق إعطاء الهواء الكاذب. يتم تحقيق ذلك عن طريق تحضير السودوموناس أولا بالتركيز المناسب للحقن. في الخطوة الثانية ، تتعرض القصبة الهوائية للفأر بعناية ثم يتم إعطاء البكتيريا للرئتين عن طريق الحقن داخل القصبة الهوائية.في الخطوة الأخيرة ، تتم مراقبة تطور المرض في الفأر بعناية. في النهاية ، يمكن دراسة التهاب الرئة وتغيرات موت الخلايا في الحاجز السنخي وإصلاح الرئة في رئة الفأر المحقونة بالهوائي الكاذب. تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية إلى علاج إصابة الرئة الحادة الناجمة عن الالتهاب الرئوي.نظرا لأن هذا النموذج يحاكي العمليات التي تلي الالتهاب الرئوي لإنشاء quats من p Aerogen ، يبدأ PA 1 0 3 للتثبيت عن طريق نقل قارورة تبريد للبكتيريا من 80 درجة مئوية تحت الصفر ، والتخزين إلى مستوى السلامة الحيوية الثاني أو مختبر BSL اثنين في رف في صندوق مبطن بمناشف ورقية مبللة بالإيثانول بنسبة 70٪. ثم تحت خط BSL اثنين من غطاء محرك السيارة ، فإن P aerogen PA 1 0 3 مستعمرات بكتيرية على صفائح أجار دم الأغنام ، وتنمو المستعمرات في حاضنة 37 درجة مئوية. بعد حوالي 15 ساعة ، استخدم حلقة بكتيريا لنقل المستعمرات إلى خمسة ملليلتر من PBS.ثم قم بتخفيف البكتيريا بشكل متسلسل في المزيد من PBS إلى واحد إلى 10 ، إلى أربعة ، إلى واحد إلى 10 إلى التركيزات السبعة ، مما يؤدي إلى التخفيف على ألواح أجار دم الأغنام الطازجة. ثم بعد حوالي 15 ساعة أخرى من الحضانة ، احسب وحدات تشكيل المستعمرة لكل لوحة لتحديد تركيز البكتيريا. بعد ذلك ، قم ب Eloqua الكمية المناسبة من البكتيريا في 0.5 مل من PBS في 1.5 مليلتر ، وقوارير تبريد ذات غطاء لولبي معقم ، ثم ضع القوارير محكمة الغلق في رف قارورة بالتبريد على مناشف ورقية محملة بالمطهر في صندوق غطاء سريع في خزانة BSL ، وقم بتغطية عيون برفق بمرهم فيتو يعمل.احلق الشق بسرعة ونظف الجلد باستخدام مسحات متناوبة من الكحول وبوفيدون اليود ثلاث مرات وتأكد من التخدير عن طريق إصبع القدم. قرصة ، كبح جماح الفأر على لوح جراحي بعد علاج الجلد بمخدر موضعي. بعد ذلك ، قم بعمل شق صغير بطول خمسة ملليمترات في خط الوسط من عنق واستخدم ملقطا حادا لتحريك العضلات برفق للوصول إلى القصبة الهوائية.عندما تتعرض القصبة الهوائية ، ارسم ما يصل إلى واحد في 10 إلى وحدات المستعمرة الخمس المكونة للبكتيريا في 20 إلى 30 ميكرولترا من PBS في حقنة يمكن التخلص منها سعة ملليلتر واحدة ومجهزة بإبرة قياس 27. ثم أدخل الإبرة في القصبة الهوائية وحقن المحلول ببطء. تأكد من أن يلهث ، مما يشير عادة إلى أن المحلول قد وصل إلى الرئة.الآن أغلق الجرح بشكل معقم بستة خيوط معقمة أحادية الشعيرات الصفرية وقم بإدارة تسكين الألم بعد الجراحة. ثم تخلص من المحاقن والإبر في حاوية الأدوات الحادة ذات المخاطر البيولوجية المناسبة بعد حقن كل. كيف حال مايرز منفردة في أقفاص نظيفة في بيئة دافئة؟فحص كل 30 دقيقة حتى تستعيد وعيها وتبدأ في الحركة. عالج الأدوات الجراحية بمطهر ثاني أكسيد الكلور لمدة 15 دقيقة. ثم اشطف الأدوات وأعدها إلى المختبر لمزيد من التعقيم حسب الضرورة.ضع الفئران في منشأة BSL اثنين من طوال التجربة ثم بعد الاستئصال تحت التخدير ، اجمع أنسجة الرئة من كل تحت غطاء محرك BSL ثنائي. أخيرا ، إذا كانت هناك حاجة إلى مزيد من المعالجة ، فقم بنقل العينات في أنابيب محكمة الغلق موضوعة على رف على مناشف ورقية محملة بالمطهرات في صندوق غطاء كبس إلى منشأة المعالجة المناسبة. في هذه التجربة التمثيلية بعد 24 إلى 72 ساعة من حقن الهواء الفوسفوري ، يمكن ملاحظة زيادة الخلوية في أقسام الرئة.بحلول 96 ساعة ، بدأت الرئة في التعافي وبحلول سبعة أيام ، يتم استعادة مورفولوجيا الحويصلات الهوائية الطبيعية إلى حد كبير. يظهر تلطيخ النفق لأقسام الرئة بعد 24 ساعة من تركيب هواء الفوسفور موت الخلايا داخل خلايا الحويصلات الهوائية لدراسة عملية الإصلاح. في هذه الإصابة ، يمكن حقن نموذج BRDU في الفئران بعد ثلاثة أيام من إعطاء الهواء.كما هو موضح ، تظهر المعالجة بالهواء p فرط انتشار في أنسجة الرئة مقارنة بالحيوانات المعالجة بالسيطرة. لدراسة التغيرات في الحاجز والنفاذية والالتهاب بعد الإصابة ، يمكن جمع غسل القصبات الهوائية أو سائل الأمعاء في نقاط زمنية مختلفة. بعد الحقن الهوائي p ، على سبيل المثال ، يزداد تركيز البروتين داخل الأمعاء بشكل كبير بعد 48 ساعة من التثبيت البكتيري مما يشير إلى تسرب الحاجز الظهاري لعدد الخلايا.تزداد الأمعاء أيضا بشكل ملحوظ في هذا الوقت ، مما يشير إلى استجابة التهابية بعد أربعة إلى خمسة أيام من حقن هوائي P ، يبدأ كل من مستوى بروتين الأمعاء وعدد الخلايا في الانخفاض مما يشير إلى الشفاء. علاوة على ذلك ، يزداد مستوى البروتين الالتهابي للبلاعم الثاني ، وهو السيتوكين المشارك في جذب العدلات بشكل ملحوظ في 48 ساعة ثم يعود إلى المستويات القاعدية في 96 ساعة. في تحلل الرئة بدون p aerogen ، لوحظ عدد قليل فقط من الخلايا الوحيدة في سائل الأمعاء.في المقابل ، يوجد عدد كبير من العدلات في الأمعاء ، معزولة بعد 48 ساعة من الحقن. بحلول 96 ساعة ، يعود تكوين خلايا الأمعاء إلى مستويات التحكم بعد هذا الإجراء. يمكن إجراء طرق أخرى مثل التنظيف النسيجي أو المقطع أو جمع غسل القصبات الهوائية للإجابة على أسئلة إضافية مثل ، ما هي الخلايا أو العوامل المشاركة في الالتهاب والإصلاح بعد إصابة الرئة الحادة؟

pseudomonas-aeruginosa-induced-lung-injury-model

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

علم المناعة والعدوى

نحن تصف طريقة أجار حبات لإقامة عدوى مجرى الهواء المستمر على المدى الطويل المزمن الزائفة الزنجارية في نموذج الفأر.

على المدى الطويل المزمن<em&gt; الزائفة الزنجارية</em&gt; عدوى مجرى الهواء في الفئران

نحن تصف طريقة لإحداث الالتهاب الرئوي العدلات التي كتبها تحديا للعديد السكاريد الشحمي رذاذ بالإرذاذ، لنموذج إصابة الرئة الحادة. بالإضافة إلى ذلك، كما وصفت التقنيات الجراحية الأساسية لعزل الرئة، التنبيب الرغامي والقصبات غسيل.

وهناك طريقة لتوليد الرئوي العدلات عن طريق رذاذ lipopolysaccharide في

بينما تسمح الدراسة المختبرية للتفاعلات بين المضيف وممرض الأمراض بتوصيف الاستجابات المناعية المحددة ، فإن النماذج في الجسم الحي مطلوبة لمراقبة تأثيرات الاستجابات المعقدة. باستخدام التعرض المبيضات البيضاء متبوعا بعدوى الرئة بوساطة الزائفة الزنجارية ، أنشأنا نموذجا للفئران للتفاعلات الميكروبية المشاركة في إمراضية الالتهاب الرئوي المرتبط بجهاز التنفس الصناعي.

دراسة المجتمعات الميكروبية<em&gt; في فيفو</em&gt;: نموذج من التفاعل بوساطة بين المضيف<em&gt; المبيضات البيض</em&gt; و<em&gt; الزائفة الزنجارية</em&gt; في الخطوط الجوية

وقد وصفت العديد من الطرق في الأدب لنمذجة الالتهاب الرئوي الجرثومي في الفئران. هنا، نحن تصف غير الغازية، وغير مكلفة، طريقة سريعة لإحداث الالتهاب الرئوي عن طريق الطموح (أي استنشاق) من اللقاح البكتيري pipetted في البلعوم. طرق المصب لتقييم الاستجابة المناعية الفطرية الرئوية هي أيضا مفصلة.

والطريقة غير الغازية ومن الناحية الفنية غير كثيفة للتحريض وPhenotyping التجريبية البكتيرية والالتهاب الرئوي في الفئران

&lt; p class = 'jove_content'&gt; يتم وصف طريقة لتأسيس التهابات الرئة في القوارض ذات الكفاءة المناعية. مع الكفاءة ، يمكن إجراء هذه الطريقة بسرعة وسهولة للحث على عدوى مستقرة مع العديد من عزلات المكورات العنقودية الرئوية ، الملوية النزلية ، المتصورة الزنجارية ، K. pneumoniae و A. baumannii.

نموذج الالتهاب الرئوي القوي في مناعيا القوارض لتقييم مضاد للبكتيريا فعالية ضد<i&gt; S. الرئوية</i&gt;،<i&gt; H. النزلية</i&gt;،<i&gt; K. الرئوية</i&gt;،<em&gt; P. الزنجارية</em&gt; أو<em&gt; A. baumannii</em

وترد أساليب بسيطة لما أبدته من إنتاج أميلويدس السامة للخلايا بعد إصابة بطانة الرئوية الزائفة الزّنجاريّة.

طرق "كشف السامة للخلايا أميلويدس التالية العدوى من الرئة خلايا بطانية" الزائفة الزّنجاريّة

يقدم هنا إجراء خطوة بخطوة للحث على إصابة الرئة الحادة في الفئران عن طريق مباشرة داخل الرغامى السكاريد ولإجراء تحليل FACS عينات الدم، والسائل القصبات الهوائية، وأنسجة الرئة. الحد الأدنى من التوغل، والتعامل البسيط، والقابلية للتكرار الجيد، ومعايرة شدة المرض هي مزايا هذا النهج.

إحداث إصابات الرئة الحادة في الفئران عن طريق التبيل المباشر للكيس الشحمي داخل الرغامى

نحن نصف بروتوكول التطعيم المتأخر لتوليد التهابات الجروح المزمنة في الفئران ذات الكفاءة المناعية.

نموذج التلقيح المتأخر لعدوى الجروح المزمنة الزائفة الجيروجينوسا

تصف هذه المخطوطة إنشاء نموذج معدي للالتهاب الرئوي في الفئران وتوصيف حل الإصابة جنبا إلى جنب مع طرق نمو البكتيريا والتقطير داخل القصبة الهوائية. كما تم وصف نهج جديد باستخدام قياس التدفق الخلوي عالي الأبعاد لتقييم المشهد المناعي.

نموذج تجريبي لتقييم حل الالتهاب الرئوي

يوجد حاليا نقص في نماذج في الجسم الحي قابلة للفحص الدوائي ضد الالتهابات البكتيرية المزمنة. هنا ، نصف بروتوكولا لعدوى الجرح بواسطة عزلة سريرية Pseudomonas aeruginosa لتوليد عدوى مستمرة في يرقات الزرد.

نمذجة عدوى الزائفة الزائفة المستمرة في يرقات أسماك الزرد المصابحة

في هذه الدراسة، تم إثبات أن تقنية الغرس غير الغازية في الحنجرة تطور ALI في الفئران باستخدام منظار الحنجرة الأساسي لضمان توصيل LPS بدقة إلى الرئتين. يتم حقن LPS عبر أنبوب في القصبة الهوائية باستخدام منظار الحنجرة. يتم تقييم حجم إصابة الرئة في عدة نقاط زمنية.

إعطاء دهنية السكاريد غير الجراحية في القصبة الهوائية لتحفيز إصابة حادة في الرئة لدى القوارض

اكتشف نموذج إصابة الرئة المستحث بالزائفة الزنجارية في الفئران عبر الحقن داخل القصبة الهوائية. يُمكّن هذا النموذج من دراسة الالتهاب وآليات إصلاح أنسجة الرئة بدقة.

الزائفة الزنجارية المستحثة الرئة الإصابات نموذج

استكشف المزيد من الفيديوهات