أخذ العينات التربة والنيماتودا الممرضة للحشرات عزل (Steinernematidae، Heterorhabditidae)

الهدف من هذا الإجراء هو توضيح الأساليب والتقنيات المستخدمة بشكل شائع لأخذ عينات التربة وعزل الديدان الخيطية المعوية المسببة للأمراض. يتم تحقيق ذلك عن طريق جمع عينات التربة أولا عن طريق نهج عرضي ، أو كما هو موضح في نهج أخذ العينات العشوائي. بعد ذلك ، خفت عينات التربة مع الحشرات لاستعادة الديدان الخيطية المعوية المسببة للأمراض بشكل انتقائي.

الخطوة الأخيرة هي جمع الديدان الخيطية من الحشرات المصابة باستخدام مصيدة بيضاء معدلة. في النهاية ، تمثل هذه التقنيات خطوات رئيسية للإنشاء الناجح لمزارع الديدان الخيطية المسببة للأمراض المعوية في المختبر ، وتشكل الأساس للمقايسات الحيوية في المصب. تتمثل ميزة تقنية أخذ عينات التربة في أنه يمكننا الذهاب إلى الحقل وجمع المراحل الناضجة من الديدان الخيطية المسببة للأمراض.

أنا بدلا من أخذ عينات من الحشرات المصابة بهذه الديدان الخيطية ، والتي نادرا ما تواجهها. تستخدم استراتيجية العينة العشوائية التي نستخدمها بشكل شائع لتقييم تنوع الديدان الخيطية المسببة للأمراض من منطقة أو منطقة جغرافية كبيرة. تم وصف هذه التقنية لأول مرة من خلال المراهنة في Accur في عام 1975.

إنه إجراء انتقائي يعتمد على فرضية أن مراحل المعيشة الحرة ستنجذب إلى مضيفات الحشرات وتطفلها. عرض الإجراءات سيكون طالب الدراسات العليا في Rue Orozco وفني أبحاث Ming Mingle في مختبري. مختبر. يجب أن لا تقل مساحة موقع جمع العينات عن مترين مربعين ، وإذا أمكن ، أكبر من أربعة أمتار مربعة.

لكل عينة تربة ، خذ ثلاث عينات فرعية أصغر على الأقل داخل منطقة عينة DM a C. يمكن دمج العينات الفرعية إذا كانت تلبي أهداف الدراسة. اجمع عينات التربة على عمق صفر إلى 15 سم.

يجب أن تكون كل عينة من 250 جراما إلى كيلوغرام واحد. استخدم حواف CORAs التربة أو المجارف اليدوية أو الأدوات المماثلة ، واجمعها من خمسة مواقع عشوائية على الأقل داخل كل منطقة أخذ عينات محددة. يجب أن تكون كل عينة معبأة في أكياس مزدوجة وتحمل علامة مقاومة للماء.

يجب أن يحتوي الملصق على معلومات عن الموقع والموقع والارتفاع والتاريخ والمتغيرات البيئية مثل وصف الموائل مع الغطاء النباتي ودرجة الحرارة المرتبطة به في الموقع. قم بتدوين الحشرات المحلية وأنواع اللافقاريات الأخرى. اجمع الأنواع التي لا يمكن تحديدها على الفور لتحديدها لاحقا في المختبر بين مواقع التجميع ، واغسل أدوات التجميع جيدا بالماء ، ثم قم بتطهيرها باستخدام 70٪ من الإيثانول أو 0.5٪ المبيض.

قم بتخزين عينات التربة في مبرد عند ثماني إلى 15 درجة مئوية للنقل. يفصل CES جزءا واحدا من العينة لتحليل الخصائص الإجمالية للتربة مثل تكوينها وملمسها وموصلها وما إلى ذلك. من كل عينة تربة ، قم بإزالة الحطام الذي قد يؤدي إلى تلوث ميكروبات الزلازل.

ثم بلل التربة بالماء حتى تتمكن الديدان الخيطية الموجودة فيها من التحرك بسهولة. قم بتحميل 200 إلى 250 جراما من التربة الرطبة في وعاء بلاستيكي بغطاء. ثم أضف طعوم الحشرات.

تكفي خمس إلى 10 حشرات. اربط الغطاء واقلب الحاوية وضعها في الظلام. في درجة حرارة الغرفة كل يومين إلى ثلاثة أيام ، قم بإزالة الحشرات الميتة وعند الحاجة ، استبدلها بالحشرات السليمة لمزيد من الوزن.

إذا كانت جثة الحشرة بنية اللون أو المغرة ، فهذا يشير إلى أن شتاين ونيما يتطفلان على باريت. بينما إذا كانت الجثة من اللون الأحمر إلى الأرجواني الداكن ، فتوقع المغاير. استخدم مصيدة بيضاء معدلة لجمع الديدان الخيطية التي تطفلت على طعوم الحشرات.

أولا ، ضع غطاء طبق بتري 50 أو 60 ملم في قاعدة طبق 100 ملم. ثم ضع ورقة من واتمان دائري. رقم واحد ورقة الترشيح في الطبق الأصغر.

اشطف جثث الحشرات بالماء المعقم وانقلها إلى ورق الترشيح. انتشر حتى لا يكونوا على اتصال ببعضهم البعض. املأ الطبق الأكبر فقط بحوالي 20 مل من الماء المقطر وقم بتغطية المجموعة بالأطباق الأكبر. غطاء.

قم بتسمية الأطباق باسم الديدان الخيطية وتاريخ وتاريخ اصطياد الحشرات. تم إعداد المصيدة. احتفظ بالمصائد في درجة حرارة الغرفة وراقب الديدان الخيطية المعدية أو الأحداث أو IJs الخارجة من جثث الحشرات.

قد يستغرق ذلك من 10 إلى 25 يوما ويعتمد على درجة الحرارة ومستوى الرطوبة في مكان الاحتفاظ بالمصيدة. إذا تبخر مستوى الماء في المصيدة ، فتأكد من إعادة تعبئته على أطباق باستخدام IJs. احصد الماء من الطبق الأكبر الذي يجب أن يحتوي على الديدان الخيطية.

اترك الديدان الخيطية تغرق لبضع دقائق ثم صب الماء ببطء. بمجرد بقاء الديدان الخيطية في كمية صغيرة من الماء ، اشطفها عدة مرات عن طريق إضافة الماء مرة أخرى ثم سكبها بعناية. ثم قم بعمل تخفيفات متسلسلة لتقدير عدد الديدان الخيطية.

في قارورة استزراع سعة 250 ملليلتر ، اضبط تركيز الديدان الخيطية إلى ما بين واحد و 3000 ديدان خيطية لكل مليلتر. قم بتخزين هذا التعليق بين 10 و 20 درجة مئوية. بشكل عام في الطبيعة ، تكون فرص العثور على الحشرات المتطفلة بواسطة الديدان الخيطية المسببة للأمراض المعوية منخفضة للغاية.

وبالتالي ، تم استخدام البروتوكول الموضح باستخدام يرقات الورم الميلانيني G كطعم لعزل هذه الديدان الخيطية بمعدل أكثر كفاءة. بعد خمسة أيام ، أصيبت الحشرات بالعدوى وكان لونها أحمر. أظهرت الفخاخ البيضاء المعدلة مسارات الديدان الخيطية.

بعد 15 يوما من هذه الفخاخ ، تم جمع الديدان الخيطية في الماء ، وكان لها مظهر نظيف ، وكانت خالية من أنسجة الحشرات. قد تكون دورة الاستخراج الفردية باستخدام يرقات الغاليوم ميلانيا غير كافية لاستعادة جميع الديدان الخيطية المسببة للأمراض من أوما الموجودة في عينة التربة. لذلك نوصي بالقيام بذلك عدة مرات.

أيضا ، ننصح المستخدمين بالتفكير في الحشرات الأخرى بدلا من Galleria ، مما سيعزز أيضا فرص الشفاء. مناقشة عينات التربة مع الحشرات هي تقنية يمكن أخذها في الاعتبار أيضا لعزل مسببات الأمراض الحشرية الأخرى مثل البكتيريا أو الفطريات.