طريقة معزولة فيفو السابقين الإرواء الرئة في الفئران نموذج: الدروس المستفادة من تطوير برنامج EVLP الجرذ

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنشاء نموذج نضح الرئة خارج الجسم الحي المتسق للفئران والذي سيؤدي إلى نتائج قابلة للتكرار. الخطوة الأولى هي تقنب القصبة الهوائية وبدء التهوية الميكانيكية. بعد ذلك ، يتم حشو الشريان الرئوي والأذين الأيسر.

الخطوة الأخيرة هي إزالة كتلة رئة القلب من تجويف الصدر ووضعها في دائرة تروية الرئة خارج الجسم الحي. في النهاية ، يتم استخدام مستشعرات الضغط ومحولات الوزن ومحلل غازات الدم لإظهار حالة الرئة في الوقت الفعلي عن طريق قياس ضغط الشريان الرئوي والمعلمات الأخرى. وفرة الرئة خارج الجسم الحي هي تقنية رائعة سمحت لنا بتوسيع مجموعة المتبرعين لزراعة الرئة.

نتوقع أنه من خلال هذه التقنية لتكون بمثابة منصة لتقييم الأعضاء ، يمكننا تحسين جودة الأعضاء التي يتم إحضارها إلى الزرع ونتائج الزرع الشاملة. هنا في مختبر النحاس ، صاغنا عبارة تسليح العضو ، وبالتالي تقييم العضو أو إعادة تشكيله أو إصلاحه ، ثم تعديله لتحسين الجودة وبالتالي تحسين نتائج الزرع. لقد طورنا نموذجا قويا وقابلا للتكرار من نضح الرئة خارج الجسم الحي.

من خلال هذا الفيديو ، سنوضح لك الخطوات الرئيسية والحاسمة لتطوير نموذج نضح الرئة خارج الجسم الحي ، والذي يمكن أن يكون بعد ذلك بمثابة منصة لأبحاث التروية والزرع. ابدأ بإعداد دائرة EVLP وتدوير ثمانية النفهات الدافئة في جميع أنحاء النظام. اضبط حمام الماء الدافئ والمبادل الحراري والصدر الاصطناعي على 37 درجة مئوية.

قم بتشغيل غاز الأكسجين الديوكسي من خلال PERFUSE ثمانية في مرشح الغاز للتأكد من أنه يحتوي على ما يقرب من 6٪ من الأكسجين المذاب للتجربة. بعد فتح برنامج الحصول على البيانات ، قم بتوصيل محول ضغط الشريان الرئوي ، والقصبة الهوائية ، ومحول الضغط التفاضلي ، والتدفق التنفسي ، ومحول الضغط التفاضلي ، ومحول وزن الرئة ، ومحول سرعة المضخة بصندوق المحول التناظري إلى الرقمي. أخيرا ، قم بإعداد طاولة العمليات وإعداد جميع أدوات التشغيل والمستلزمات اللازمة لهذا الإجراء.

بعد التحقق من التخدير عن طريق إصبع القدم ، قرصة ، ضع المخدر في وضع ضعيف على طاولة العمليات. ابدأ في تسجيل البيانات باستخدام برنامج الحصول على البيانات. عندما تصبح جاهزا ، ادخل تجويف البطن وحقن الهيبارين في الوريد الأجوف السفلي.

باتباع الإجراءات القياسية ، قم بتقشير القصبة الهوائية وتوصيل القنية بدائرة تهوية. قم بتشغيل جهاز التنفس الصناعي لبدء تهوية الرئتين ميكانيكيا. بعد ذلك ، اسحب التجويف الصدري لكشف الرئتين مع الحرص على تجنب لمسهما.

قم بإزالة الغدة الصعترية وتحويل محتويات البطن إلى جانب واحد لكشف الوريد الأجوف السفلي أو الوريد المساريقي. بعد القتل الرحيم ، ضع خياطة حريرية خلف الشريان الرئوي والشريان الأورطي. استعدادا لتأمين قنية الشريان الرئوي ، قم بعمل شق من ملليمترين إلى ثلاثة ملليمترات على السطح الأمامي لقناة تدفق البطين الأيمن وأدخل القنية في الشريان الرئوي الرئيسي.

قم بتثبيته بخياطة حريرية ، وقم بإزالة الجلطات من الأوعية الدموية الرئوية عن طريق زرع ما يقرب من 15 مل من محلول إلكتروليت منخفض البوتاسيوم عبر الشريان الرئوي وخارجه عبر قمة القلب. بعد ذلك ، ضع خياطة حريرية خلف القلب وحول البطينين. لتوسيع الصمام التاجي وتسهيل القنية، أدخل زوجا صغيرا من الملقط الجراحي في القمة من خلال الصمام التاجي وفي الأذين الأيسر.

عندما تصبح جاهزا ، أدخل قنية في القمة من خلال الصمام التاجي وفي الأذين الأيسر. قم بتأمين قنية الأذين الأيسر بخياطة الحرير. بعد ذلك ، قم بتوصيل قنية الشريان الرئوي بدائرة EVLP.

تأكد من أن خط التدفق القادم من الدائرة مهيأ بثمانية. لمنع دخول الهواء إلى القلب والرئتين، قم بتشغيل المضخة التمعجية الرئيسية واضبطها على سرعة منخفضة. سيسمح ذلك للثرثرة ثمانية بالتمرير عبر الشريان الرئوي والخروج من البطين الأيسر إلى تجويف الصدر.

راقب ضغط الشريان الرئوي للتأكد من أنه لا يرتفع مما يشير إلى انسداد أو ضعف القنية. عندما تصبح جاهزا ، قم بإيقاف تشغيل المضخة التمعجية. قم بتوصيل قنية الشريان الرئوي بدائرة تروية الرئة خارج الجسم الحي.

لا تقم بتوصيل قنية الأذين الأيسر بالدائرة حتى تتم إزالة كتلة رئة القلب من الجسم. قم بإزالة كتلة رئة القلب عن طريق تثبيت المريء باستخدام إرقاء وقطع أسفل المشبك بحيث يمكن استخدام المريء لرفع الهياكل القلبية الرئوية بشكل صريح ، وتشريح الأنسجة المحيطة وقطع الشريان الأورطي الهابط والأوعية المساعدة لتحرير كتلة رئة القلب أثناء رفعها عبر المريء. قم بتمرير القصبة الهوائية لتحرير كتلة القلب والرئة ووضعها في الموقع المحدد على دائرة EVLP.

ثم قم بتوصيل قنية الأذين الأيسر بخط التدفق وابدأ المضخة التمعجية. لتسجيل بيانات التهوية ومراقبة الضغط بسرعة ، قم بإزالة خط التهوية بسرعة من أعلى جهاز EVLP وقم بتوصيل الغلاف بمستشعرات الضغط. بعد ذلك ، أعد إدخال خط التهوية أعلى جهاز EVLP.

تأكد من أن مصيدة الفقاعات مملوءة بشكل كاف بثمانية. لتجنب إدخال فقاعات الهواء في الرئتين خلال ال 15 دقيقة الأولى ، قم بتغيير إعدادات التهوية والتروية ببطء إلى المستويات التجريبية المطلوبة. قم بزيادة معدل تدفق التروية إلى المعدل والضغط المطلوبين خلال مرحلة الزيادة الأولية هذه أيضا.

يوصى ببرمجة جهاز التنفس الصناعي لإنتاج أنفاس جانبية متقطعة لتسهيل حركة السوائل خارج مساحة الرئة وتأخير ظهور الوذمة. حدد الوقت صفر على أنه الوقت الذي تكون فيه معلمات التهوية بحجم مد وجزر يبلغ أربعة ملليلتر لكل كيلوغرام موجب. إنهاء ضغط الزفير عند سنتيمترين.

H2O ومعلمات التروية في مستوياتها المتوقعة وتظل ثابتة. إذا رغبت في ذلك ، خذ Perfuse ثماني عينات من تجميد فلاش منفذ العينة في النيتروجين السائل ، ولاحظ الوقت الذي تم فيه أخذ العينات. عند اكتمال التجربة ، قم بعزل أي قطع تشريحية ضرورية لجمعها وإما تجميدها سريعا في النيتروجين السائل أو وضعها في محلول تثبيت لمزيد من الدراسات.

لم يتغير وزن رئة ذكور فئران Sprague بشكل كبير خلال 60 دقيقة من نضح الرئة خارج الجسم الحي بعد أول 10 دقائق. لم يكن هناك أيضا تغيير في الضغط الشرياني الرئوي. وبالمثل ، لم تتغير مقاومة الأوعية الدموية الرئوية طوال مدة الدراسة.

بعد ساعة واحدة من التهوية بأحجام عالية من المد والجزر وزيادة تركيزات السيتوكين المؤيدة للالتهابات العالية في PERFUSE ثمانية ، بينما ظلت تركيزات السيتوكين المضادة للالتهابات دون تغيير. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد للخطوات الرئيسية اللازمة لإنشاء نموذج وفرة رئة صغير في الفئران في مختبرك.