قياس السلس وظيفة العضلات في الأنسجة المعزولة حمام تطبيقات لأبحاث الصيدلة

الهدف العام من هذا الإجراء هو قياس قوة العضلات الملساء. يتم تحقيق ذلك عن طريق تشريح الأنسجة وتحضيرها أولا. الخطوة الثانية هي تركيب الأنسجة في حمام أنسجة معزول.

ثم يتم اختبار صلاحية الأنسجة وأخذ قياسات الانكماش متساوي القياس. في النهاية ، يتم استخدام مستحضر حمام الأنسجة المعزولة لاختبار وظيفة المستقبلات وإشارات المستقبل وتفاعل العضلات الملساء. بشكل عام ، تتمثل المزايا الرئيسية لهذه التقنية في مرونة النظام ، وسرعة تحقيق النتائج ، والحفاظ على الأنسجة بأكملها سليمة.

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في أي مجال يستخدم المخدرات للتدخل في مستقبلات إشارات أو روح العضلات الملساء, هناك عدد قليل من الاستعدادات التي يجب التأكيد عليها. من الضروري تسخين نظام حمام المناديل إلى 37 درجة مئوية عن طريق تشغيل حمام الماء الساخن المعاد تدويره. يجب أن يتدفق الماء إلى كل مكون عند أدنى وصلة شائكة ويتدفق عند أعلى وصلة شائكة.

يجب توصيل كل مكون. يجب معايرة محولات الطاقة ويجب أيضا تشغيلها قبل 15 دقيقة على الأقل من التجربة لجعل درجة حرارتها متوازنة. بعد ذلك ، عند توصيل الغاز ، تحقق من وجود تسريبات ، ثم اضغط على النظام.

بعد ملء النظام بالمحلول ، تأكد من تجهيزه وإزالة أي فقاعات هواء. هناك ما يبرر أيضا اختبار مهويات حمام الأنسجة. سيؤدي التهوية الجيدة إلى توزيع الأدوية بشكل فعال ، ولكن لا يزعزع استقرار الأنسجة مباشرة قبل التجربة.

تشريح الأنسجة. بعد تخدير الفئران ، قم بإنشاء استرواح الصدر باستخدام المقص. لعنة على طول الحجاب الحاجز في الجزء السفلي من القفص الصدري.

ثم قطع من أسفل القفص الصدري إلى القص وتقسيم الأنسجة. قم بإزالة الأعضاء الموجودة فوق العمود الفقري لتحديد موقع الشريان الأورطي ، الذي يقع مباشرة على طول العمود الفقري. الآن قم بقطع جميع الوصلات بالشريان الأورطي وقطع الشريان الأورطي بشكل عمودي على العمود الفقري على مستوى الحجاب الحاجز.

بعد ذلك ، أمسك الشريان الأورطي برفق وقم بتشريح الشريان الأورطي من العمود الفقري. ابدأ في منطقة الحجاب الحاجز السفلية المجاورة للعمود الفقري واعمل باتجاه القلب. فقط احرص على عدم سحب أو سحب الأنسجة الأبهرية لأن ذلك قد يضر بها على الفور.

ضع الشريان الأورطي في طبق تشريح يحتوي على PSS. الآن خذ سلكا وقم بعمل زاوية صغيرة 90 درجة. في أحد طرفيه ، قم بتثبيت الطرف الزاوي للسلك في أساس طبق التشريح.

ثم قم بربط سلك التوجيه بحذر في تجويف الشريان الأورطي وحرك الشريان الأورطي على السلك. عندما يصبح الطرف الحر للسلك مرئيا ، قم بثنيه برفق وادفعه إلى الأساس ، وبالتالي تثبيت الأنسجة. الآن باستخدام مقص صغير وملقط كوكب الزهرة ، قم بإزالة الأنسجة الدهنية حول الأوعية الدموية والأنسجة الدخيلة الأخرى حتى يظهر الشريان الأورطي الصدري أبيض وأليفي إلى حد ما.

بمجرد إزالة الأنسجة الزائدة ، قم بإزالة الشريان الأورطي النظيف بعناية من السلك. قم بإنهاء هذا القسم عن طريق تقطيع الشريان الأورطي إلى حلقات بعرض ثلاثة إلى خمسة ملليمترات. حلقة الأبهر الوصولية.

أعددت خطافات من الأنسجة مع خيوط لتثبيتها في حجرة الحمام. يجب أن يحتوي خطاف واحد على خياطة بحلقة صغيرة معقودة لتثبيتها على قضيب. يحتاج الخطاف الآخر إلى قطعة خياطة بطول 10 إلى 14 سم.

لربط عقدة ، قم بإرفاق زوج من خطافات الأنسجة هذه بعناية بكل حلقة أورطي. احرص على تجنب تشابك الخطافات. بعد ذلك ، انقل كل قطعة من المناديل إلى طبق من PSS بدرجة حرارة الغرفة مع حامل مناديل مثبت على حامل حلقي.

بعد ذلك ، قم بتمرير الحلقة المعقدة على ربط القضيب واستخدم قطعة الخيط الطويلة لتثبيت الأنسجة. ثم ضع القضيب في الغرفة وتأكد من أن القضيب آمن. الآن ، اربط الخيط من الخطاف المتبقي بمحول القوة.

اترك ما يكفي من الركود في الخيط ، لذلك يمكن ضبط التوتر بين محول القوة والأنسجة بواسطة الميكرومتر. كرر هذه العملية لكل حلقة في كل غرفة. الآن ، قم بتعيين التوتر السلبي.

استخدم الميكرومتر لزيادة التوتر إلى جرامين وانتظر حتى يتوقف التوتر على الأنسجة عن الزيادة. ثم قم بزيادة التوتر بمقدار جرامين إضافيين ، ومرة أخرى ، انتظر التغيير في التوتر. للإنهاء.

يجب أن يكون التوتر الآن حوالي 3.2 جرام. كرر هذه العملية على كل حلقة في كل غرفة. بعد ضبط جميع التوترات السلبية ، اترك الأنسجة تتوازن لمدة ساعة.

خلال هذا الوقت ، استبدل PSS كل 15 دقيقة وقم بإجراء استعدادات أخرى للتجربة ، مثل تحضير الأدوية في نهاية فترة التوازن. اغسل المنديل مرة أخيرة ، واحفظ البيانات وأعد جميع المدخلات. ثم باتباع التفاصيل في بروتوكول النص ، قم بإجراء التحدي الأولي.

تأكد من توثيق هذه الإجراءات في البرنامج. بعد التحدي الأولي ، سوف يستقر تغيير التوتر. ثم اغسل دواء التحدي حتى تصل نغمة الأنسجة إلى خط الأساس.

دع الأنسجة ترتاح عند هذه النغمة الأساسية لمدة 10 دقائق الآن إلى حمام واحد في السيارة في هذه الحالة ، الماء إلى الآخر. أضف كمية كافية من البرازوسين لتركيز خمسة نانومولار في الحمام. دع حمامات المناديل تحتضن لمدة ساعة دون غسيل.

وفي الوقت نفسه ، قم بإصلاح رين الفينول بمجموعة واسعة من التركيزات على طول منحنى لوغاريتمي. بعد ساعة إضافة ناهض فينيل رين بتركيزات متزايدة إلى الحمام لتوليد استجابة تركيز تراكمية. بعد كل إضافة ، انتظر استجابة الأنسجة للهضبة قبل إضافة التركيز التالي.

استمر في إجراء الإضافات حتى لا تغير نغمة الأنسجة أو حتى يستقر منحنى الاستجابة بالكامل. بدلا من ذلك ، تم تحضين الشريان الأورطي الصدري في مضاد مستقبلات الأدرينالية ألفا واحد POZ sim لمدة ساعة واحدة قبل إضافة ناهض ألفا واحد الأدرينالية فينيل رين إلى حمام الأنسجة وتوليد منحنيات استجابة الانكماش التراكمية الحد الأقصى والنصف الأقصى للتقلصات من فينيل رين. على السيارة وحدها يتم تمييز أنسجة التحكم باللون الأخضر.

يحدد الحد الأقصى النصف التركيز الفعال للدواء. تظهر نفس القياسات للأنسجة المعالجة بالرازين باللون الأسود. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية قياس وظيفة العضلات الملساء في حمام الأنسجة المعزول.