تقييم غير الغازية من فعالية العلاجات الجديدة لعلوم الأمراض المعوية عن طريق التصوير بالمنظار المسلسل من الفئران الحية

الهدف العام من التجربة التالية هو اختبار فعالية العلاجات الجديدة في نماذج التهاب القولون والسرطان من خلال إحداث المرض في الفئران للتحقيق في العلاجات التي تمنع علم الأمراض المستحث. يتم إعطاء العلاج بشكل وقائي. في هذا الفيديو ، يتم استخدام بروتين إنترلوكين 11 البشري المؤتلف ، ثم يتم إعطاء كبريتات ديكستران الصوديوم أو DSS في مياه الشرب لإحداث تلف حاد في الغشاء المخاطي والعديد من السمات النسيجية المرضية المرتبطة بمرض التهاب الأمعاء.

بعد ذلك ، تتم مراقبة التغييرات في المرض عن طريق التنظير الداخلي من أجل تحديد الفعالية العلاجية. في النهاية ، تظهر النتائج انخفاض عبء المرض بناء على المراقبة بالمنظار والتسجيل بعد العلاج العلاجي للفئران المصابة بأمراض الأمراض المستحثة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي قدرتنا على مراقبة فأر واحد على مدار التجربة مقارنة بالتقنيات القياسية للنسيجة.

مطلوب فحص مجموعات متعددة من. يمكن أن تساعدنا هذه المنهجية في طرح الأسئلة الرئيسية والإجابة عليها من حيث التهاب وسرطان القولون ، وعلى وجه الخصوص محاولة إنشاء معالجة أفضل لإشارات السيتوكين قد تؤثر على تطور المرض. من المهم استخدام هذه النماذج قبل السريرية لتقييم فعالية الأدوية والمركبات ، وهذا يسمح لنا حقا باختبار نفس الفأر عدة مرات ومعرفة ما إذا كانت هذه المركبات لها نشاط.

سأعرض هذا الإجراء مع جيوفاني سي سيانو ، فني من معهدنا في اليوم الأول ، قم بإدارة العلاج ذي الأهمية وضوابط السيارة المناسبة. في هذا العرض التوضيحي ، تم إذابة خمسة ميكروغرامات من بروتين الإنترلوكين 11 البشري المؤتلف في 200 ميكرولتر من محلول ملحي مخزن بالفوسفات وتحديد داخل الصفاق توقيت وتواتر الإدارات ، والتي ستعتمد على ملف تعريف الحرائك الدوائية الذي تم إنشاؤه للكاشف العلاجي الذي يتم اختباره. يظهر هنا مخطط للعلاج الوقائي باستخدام الحقن داخل الصفاق مرتين يوميا على مدار التجربة.

راقب تناسق البراز ووجود الدم ووزن كل فأر يوميا. في أيام العلاج ، يجب أن يتزامن الوزن مع الدواء العلاجي لتقليل الضغط على الفئران الناجم عن المعالجة المتكررة. في اليوم الثالث ، قم بإعداد 2.5٪ من كبريتات ديكستران الصوديوم أو محلول DSS في مياه الشرب التي توفرها المنشأة الحيوانية بشكل روتيني للفئران.

ما يقرب من خمسة ملليلتر لكل فأر يوميا من محلول DSS للتجربة. قد يتغير استهلاك مياه DSS إذا تذبذبت درجة الحرارة المحيطة للمنشأة الحيوانية. توفير DSS طازج للفئران.

أضف ليام في زجاجات مياه نظيفة لمدة خمسة أيام متواصلة مساء اليوم الخامس. توفير مياه الشرب العادية بالإضافة إلى كريات الطعام المهروسة ومكملات البروتين المتوفرة في أطباق بتري الصغيرة. في صباح اليوم الثامن.

تابع القتل الرحيم للفأر كما هو موضح في بروتوكول النص لجمع الأنسجة للتحليل النسيجي اللاحق. قم بإجراء اختبار الدفعات الروتينية لتحديد جرعة DSS المناسبة والتحايل على اختلاف الدفعة. يجب أن تستند الجرعة المناسبة إلى فقدان الوزن والتهاب القولون المرضي المؤكد.

اضبط جرعة DSS بين وزن واحد و 4٪ لكل حجم. اعتمادا على البكتيريا الدقيقة للمنشأة الحيوانية ومجموعة DSS. يجب تجميع معدات التنظير الداخلي وفقا للإجراءات القياسية.

تعقيم وتنظيف مسبار المنظار باستخدام 70٪ إيثانول أو مادة تشحيم مضادة للبكتيريا. يمكن تسجيل مقاطع الفيديو باستخدام كمبيوتر محمول أو كمبيوتر مكتبي وبرامج وسائط قياسية مثل iMovie. شاشة الكمبيوتر القياسية بدلا من جهاز مراقبة الدرجة الطبية كافية لتصور القولون أثناء إجراء التنظير الداخلي.

تخدير مجموعات من خمسة إلى ستة فئران في وقت واحد في غرفة مع 3٪ عيون من الفلور في 100٪ أكسجين بمعدل 0.2 إلى 0.4 لتر في الدقيقة. بمجرد تخدير الفئران ، وهو ما يتم تأكيده عن طريق قرصة إصبع القدم ، يجب تغيير مستويات الفلور إلى ما بين 0.5 و 2٪ للصيانة ، قم بإزالة فأر فردي من الغرفة وضعه على الجانب البطني لأعلى مع تثبيت رأسه في مخروط الأنف ، ويجب مراقبة التخدير الكامل وتعديل الأرجل الخلفية بحيث يتم شدها خلف الفأر. مكان. مرهم الفيتو على عيون الفئران لمنع الجفاف.

أمسك ذيل الفأر حيث يلتقي بالعمود الفقري السفلي للكشف بوضوح عن فتحة الشرج. سيسمح تدفق الهواء للقولون بالانتفاخ إذا كان تدفق الهواء قويا جدا. سيتم ضخ الهواء في معدة الفأر.

أدخل غمد المنظار الصلب في المستقيم بعناية. بشكل عام ، يمكن إدخال المنظار حتى ثلاثة سنتيمترات وعند هذه النقطة ينحني القولون في الفئران ولا يمكن الوصول إليه من قبل المنظار الصلب. من الصعوبات الشائعة أثناء إجراءات التنظير الداخلي انسداد الوصول إلى تجويف القولون بسبب البراز.

تجنب ذلك عن طريق تدليك بطن الفئران بلطف قبل الإجراء لتشجيع التغوط. بدء تسجيل الفيديو في أي مرحلة من مراحل إجراء التنظير. يمكن تسجيل تسجيل المرض بواسطة مساعد متمرس أثناء الإجراء أو في وقت لاحق من ملفات الفيديو ، وتأكد من تنفيذ هذه الإجراءات بواسطة عالم متمرس.

سيستغرق كل إجراء تنظير داخلي حوالي دقيقتين لكل فأر بعد الفحص بالمنظار. أعد الفئران إلى قفصها وراقبها أثناء التعافي من التخدير. يتم إيقاظ بشكل عام متنقلة في غضون دقيقتين بعد إزالتها من مخروط الأنف الموضح هنا من الفئران المعرضة ل DSS لنمذجة مرض التهاب الأمعاء الحاد.

في اليوم الثامن من البروتوكول دون علاج. الفئران من النوع البري تعاني من التهاب القولون كما هو متوقع لفقدان الوزن ، وتظهر صور التنظير الداخلي ودرجات التهاب القولون بالمنظار للفئران الضابطة وتلك التي خضعت للعلاج ببروتين إنترلوكين 11 البشري المؤتلف. يستخدم فقدان الوزن كمعيار قياسي لمراقبة الأمراض المرتبطة بالتهاب القولون ، والتي تستخدم بشكل روتيني لمراقبة الصحة العامة للفئران كما هو موضح من خلال انخفاض درجة التهاب القولون بالمنظار.

انخفاض المرض بعد العلاج العلاجي للفئران المصابة بأمراض الأمراض المستحثة. لذلك بمجرد أن تتقن هذه التقنية ، يجب أن تكون قادرا على تقييم الماوس في دقيقتين تقريبا. وبشكل عام ، ما يسمح لك حقا هو اختبار ما إذا كانت هذه العلاجات لها تأثير على الالتهاب والسرطان أم لا في نموذج ما قبل السريري ذي الصلة.