Imaging Local Ca<sup>2+</sup> Signals in Cultured Mammalian Cells

Jeffrey T. Lock; Kyle L. Ellefsen; Bret Settle; Ian Parker; Ian F. Smith

doi:10.3791/52516

التصوير المحلية الكالسيوم 2+ الإشارات في خلايا الثدييات مثقف

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Imaging Local Ca²⁺ Signals in Cultured Mammalian Cells

التصوير المحلية الكالسيوم 2+ الإشارات في خلايا الثدييات مثقف

Full Text

11,494 Views

09:30 min

March 3, 2015

DOI: 10.3791/52516-v

Jeffrey T. Lock¹, Kyle L. Ellefsen¹, Bret Settle¹, Ian Parker^1,2, Ian F. Smith¹

¹Neurobiology and Behavior,University of California, Irvine, ²Physiology and Biophysics,University of California, Irvine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

نقدم هنا تقنيات لتصوير أحداث Ca²+ المحلية بوساطة_{IP 3} باستخدام المجهر الفلوري في خلايا الثدييات السليمة المحملة بمؤشرات Ca^{2 +} جنبا إلى جنب مع خوارزمية تعمل على أتمتة تحديد وتحليل هذه الأحداث.

الهدف العام من هذا الإجراء هو إثبات اكتساب واكتشاف وتحليل IP المحلي ثلاث إشارات كالسيوم بوساطة في خلايا الثدييات السليمة باستخدام التصوير القائم على الكاميرا. يتم تحقيق ذلك عن طريق زراعة الخلايا أولا على أطباق الغطاء السفلي الزجاجي وتحميلها بأشكال نفاذية لغشاء الخلية لمؤشر الكالسيوم الفلوري. CAL خمسة 20 وIP ثلاثة.

الخطوة الثانية هي وضع زجاج الغطاء على مسرح المجهر المقلوب وإضاءة العينة بضوء 488 نانومتر لإثارة صبغة الفلورسنت الحساسة للكالسيوم Cal five 20. بعد ذلك ، يتم تحفيز إشارات الكالسيوم المحلية عن طريق تعريض الخلايا لنبضة قصيرة من ضوء الأشعة فوق البنفسجية. تحرر هذه الصورة IP ثلاثة من سلائف محبوسة بحيث يمكنها الآن الارتباط بمستقبل أسيتول ثلاثي الفوسفات والتوسط في إطلاق الكالسيوم من الشبكة الإندوبلازمية.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos