وهناك نموذج من الفئران لا رجعة فيه وعكسها من جانب واحد الحالبي إعاقة

يعرض هذا الفيديو نموذجاً لفأر مصاب باعتلال عصبي انسدادي ناتج عن انسداد أحادي الجانب في الحالب، والذي يمكن أن يكون غير قابل للانعكاس أو قابلاً للانعكاس، كما يتم عرض بيانات نسيجية تسلط الضوء على الإصابة الهيكلية الناتجة وتعافيها بعد عكس الانسداد. يوضح هذا الرسم التخطيطي الخطوات الرئيسية لهذا النموذج. نرى هنا الكلية اليسرى والحالب والمثانة.

يتم إحداث انسداد حالبي أحادي الجانب قياسي عن طريق ربط الحالب. ويصبح الحالب متوسعاً وتصاب الكلية باستسقاء كُلوي بمرور الوقت. ولإجراء انسداد حالبي أحادي الجانب قابل للعكس، يتم ربط الحالب بالقرب من المثانة ويتم وضع أنبوب بلاستيكي ذو جدار ناعم، الموضح باللون الرمادي، حول الحالب عند نقطة الانسداد.

بهدف الحد من التوسع المفرط في الحالب، تصبح الكلية مائية (hydro nephrotic) بمرور الوقت، ثم يتم إزالة الانسداد في نقطة زمنية مناسبة للدراسة. في اليوم السابع من هذه التجربة، يتم إزالة أنبوب الجدار الرخو وقطع الحالب فوق مستوى الربط مباشرة. يتم إجراء مفاغرة للحالب غير المسدود في المثانة للسماح بتدفق البول، وعادة ما ينخفض الضغط في الكلية على مدار عدة أيام.

يمكن استخدام نموذج الانسداد أحادي الجانب للحالب، والذي يُشار إليه باسم UUO، لدراسة تطور إصابة الأنسجة والتليف الذي يلي اعتلال الكلية الانسدادي. بينما يمكن استخدام نموذج الانسداد الحالب القابل للعكس، والمختصر بـ RUUO، لاكتساب رؤية أعمق حول إعادة تشكيل الأنسجة التي قد تعقب الإصابة. فيما يلي عرض لتجربة نموذجية تدمج كلاً من إجراءات UUL وإجراءات UUL الخاصة بنا.

تخضع الفئران لعملية ربط الحالب أحادي الجانب (UUL) في اليوم صفر، وبعد سبعة أيام، يتم إما التضحية بالفئران لتقييم مستوى الإصابة أو إزالة الانسداد عن الحالبين لإجراء عملية عكس ربط الحالب أحادي الجانب (RUUR). بعد ذلك، تُترك الكلى لتنخفض الضغوط فيها لمدة سبعة أيام قبل جمع الأنسجة.

يمكن تقييم الأنسجة من حيث الإصابة الهيكلية، وارتشاح الخلايا البلعمية، وتراكم الخلايا الليفية العضلية، والتليف. يوضح الشكل التالي إعداداً جراحياً نموذجياً. تُجرى العملية باستخدام أدوات ومواد استهلاكية معقمة بجهاز التعقيم (autoclave) وموضوعة ضمن مجال جراحي معقم.

في حالة إجراء العمليات الجراحية لحيوانات متعددة، يجب تعقيم الأدوات بين الإجراءات باستخدام جهاز تعقيم خرزي، أو استخدام مجموعة أدوات جديدة لكل إجراء. يرتدي القائمون بالعملية رداءً وقناعاً وقبعة وقفازات معقمة. تم تخدير هذا الفأر من سلالة C 57 black six الذكر، والبالغ من العمر ثمانية أسابيع، عن طريق حقن كيتامين هيدروكلوريد وميلامين داخل الصفاق.

تم التأكد من عمق التخدير من خلال فقدان الاستجابة لقرصة إصبع القدم. تم حلق منطقة الجراحة وتعقيمها باستخدام محلول كلورهكسيدين مخفف. كما تم وضع مرطب للعين لمنع جفاف القرنية.

تم إعطاء مسكن الألم هيدروكلوريد البوبرينورفين عن طريق الحقن تحت الجلد. وُضع الفم على وسادة جراحية معقمة ومسخنة، وتم تثبيت الأطراف باستخدام مقصات فصل الأنسجة، وأُجري شق وسط البطن مع عمل فتحة على طول المرفق الخطي عديم الأوعية الدموية. سيفصل الفصل التالي كيفية إجراء عملية ربط الشريان الكلوي أحادي الجانب (UUOA) غير العكوس، حيث يتم إدخال مباعد كاليبر في الشق وتغطية الفأر بأغطية معقمة.

يتم إزاحة الأمعاء وتغطيتها بشاش معقم ومبلل لكشف الحالب الأيسر. يتم كشف الحالب وعزله باستخدام ملقط مائل لإحداث انسداد. يتم ربط الحالب مرتين باستخدام خيط جراحي من الحرير الأسود المجدول بمقاس 6-0.

يمكن أن يحدث انسداد الحالب في أي نقطة بين المثانة وحوض الكلية. ثم يتم تقسيم الحالب بين الغرز الجراحية. سيفصل الفصل التالي كيفية إجراء انسداد في الحالب يمكن عكسه.

هذه هي المرحلة الأولى من عملية ربط الحالب أحادي الجانب (RUUL). يتم كشف الحالب وعزله باستخدام ملاقط مائلة لإحداث انسداد. يتم ربط الحالب مرتين باستخدام خيط جراحي من الحرير المجدول الأسود مقاس 6.0.

يجب سد الحالب بالقرب من المثانة من أجل الحفاظ على طول مناسب من الحالب لإجراء عملية التوصيل بالمثانة. خلال إجراء عكس العملية، يتم تقليم الغرز، مع ترك إحدى الغرز طويلة لاستخدامها لاحقاً، ويتم قطع أنبوب بلاستيكي رخام الجدار بطول خمسة مليمتر تقريباً. ثم يتم عمل شق طولي بحيث يمكن فتحه وتوسيعة للسماح بتطبيقه حول الحالب.

يجب أن يكون للأنبوب البلاستيكي ذي الجدار الرخو قطر داخلي يبلغ 1 mm وقطر خارجي يبلغ 2 mm. ثم يتم وضع الأنبوب البلاستيكي ذي الجدار الرخو بعناية حول الحالب مع التأكد من بروز الغرزة الطويلة من مركز الشق عند إغلاقه. بعد ذلك، يتم تمرير خيط جراحي من الحرير المجدول الأسود قياس 6-0 حول الأنبوب ثم يتم ربطه.

بعد ذلك، يتم دمج الغرزة الطويلة الخارجة من مركز الأنبوب في الربطة التالية. يتم تنفيذ ذلك من أجل تثبيت الحالب والأنبوب في مكانهما بإحكام. سيعمل الأنبوب المحيط بالحالب على منع التوسع المفرط في الحالب عند نهاية إجراءات كل من UUO و RUUO.

تتم إعادة الأمعاء إلى مكانها، ثم يُخاط الصفاق ويُغلق الجلد باستخدام مشابك معدنية. كما يُوضع اليود على المنطقة الجراحية. ويتم عكس تأثير التخدير جزئياً عن طريق حقن aamaz تحت الجلد.

يتم إعطاء هيدروكلوريد والسوائل عن طريق حقن تحت الجلد بمقدار 1 mL من المحلول الملحي الدافئ. وتتم مراقبة الفئران حتى تستعيد وعيها، ثم تُترك لتتعافى في صندوق تدفئة محفوظ عند 29 °C لمدة 24 ساعة. وتصاب الكلى باستسقاء الكلية في الأيام التي تلي انسداد الحالب.

يمكن التضحية بالفئران إما في نقاط زمنية مختلفة خلال مرحلة الإصابة أو بعد عكس الانسداد. يفصل هذا الفصل التالي كيفية إجراء عملية عكس الانسداد، وهي المرحلة الثانية من إجراء RUUO. يتم تخدير الفأر وتحضيره كما تم وصفه سابقاً.

تتم إزالة مشابك الجلد المعدنية وإجراء عملية فتح بطن. تُزال غرز البريتون، ويمكن فتح البريتون بلطف باستخدام ملقط أسنان الجرذ. ثم يتم تحضير الفأر وكشف الحالب الأيسر كما تم وصفه سابقاً باستخدام ملقط مائل.

يتم عزل الحالب وأنبوب البلاستيك ذو الجدار الرقيق عن الأنسجة المحيطة. تُقطع الغرز التي تثبت الأنبوب ذو الجدار الرقيق باستخدام المشرط ثم تُزال. بعد ذلك، يُزال أنبوب البلاستيك ذو الجدار الرقيق بعناية، ليظهر بوضوح تمدد في الحالب.

يكون الحالب هشاً عند نقطة الانسداد وقد ينقطع بسهولة فوق منطقة الانسداد كما حدث في هذا المقطع. ومع ذلك، فإن الغرز التي وُضعت مسبقاً بالقرب من المثانة خلال المرحلة الأولى من عملية ربط الحالب أحادي الجانب (UUO) ستظل سليمة، وهذا سيضمن عدم تسرب البول من المثانة إلى التجويف البريتوني. يتم وضع قطعة من الشاش المعقم تحت الحالب لجمع أي رواسب بولية قد تصرف من الحالب الذي كان مسدوداً سابقاً.

يجب السماح للجزء المتبقي من الحالب غير المسدود بالتصريف حتى يخرج بول صافٍ، وذلك لضمان خلو تجويف الحالب من أي بقايا. وبمجرد تصريف الحالب وحوض الكلية، يتم وضع غرزة جراحية من الحرير الأسود المجدول مقاس 6-0 طويلة عند طرف الحالب؛ حيث تُستخدم هذه الغرزة للمساعدة في عملية المفاغرة اللاحقة بين الحالب والمثانة.

يتم بعد ذلك تدوير الحالب بحيث يصبح أمام موضعه الأصلي ويستقر فوق الكلية. ثم يتم وضع غرزة جراحية واحدة من خيط النايلون أحادي الشعيرة (nano polyamide monofilament TAing) عند نهاية الحالب. ويجب الحرص على ضمان بقاء الغرزة ضمن الغلاف العضلي وعدم دخولها إلى تجويف الحالب.

تُستخدم الغرزة لتثبيت الحالب في المثانة لاحقاً؛ ولتحضير المثانة لعملية المفاغرة، يتم إنشاء قناة عبر المثانة عن طريق تمرير إبرة قياس 21 بشكل قطري عبر المثانة. تُستخدم إبرة قياس 21 بعد ذلك لتوجيه إبرة ذات عروة عبر المثانة. ثم يتم تمرير غرزة نينو (Nino) التي وُضعت مسبقاً في الحالب عبر الشق الأول في المثانة وإخراجها من خلال جدار المثانة المجاور لنقطة الدخول لتمرير الحالب عبر المثانة.

يتم تمرير خيط الجراحة 6-0 الطويل، والموضوع في نهاية الحالب، عبر عين الإبرة. بعد ذلك، يتم سحب إبرة العين ببطء من خلال المثانة مع ضمان سحب الحالب أيضاً إلى داخل المثانة. وبمجرد استقرار الحالب داخل المثانة، يتم ربط الغرز النانوية الموضوعة في الحالب وجدار المثانة من أجل تثبيت الحالب في مكانه وضمان إحكام تثبيته.

يتم وضع غرزة otax ثانية. وتمرر هذه الغرزة مرة أخرى عبر الحالب، مع التأكد من بقائها داخل الغلاف العضلي، ثم عبر شق المثانة وتخرج من جدار المثانة. بعد ذلك يتم ربطها بطريقة مماثلة.

يتم وضع غرزة nano tax ثالثة في الجزء الخلفي من المثانة. بعد ذلك، تُستخدم الجهة الخلفية من مقص مفتوح لدفع جدار المثانة للخلف قليلاً للكشف عن طول الحالب. ثم يتم تقسيم الحالب فوق غرزة الرئة.

بعد ذلك، سيتراجع الحالب المصبوغ إلى داخل المثانة بزاوية مائلة. تُستخدم أربع نقاط لضمان تراجع الحالب بالكامل داخل المثانة. وأخيراً، يتم إغلاق جرح المخرج في المثانة باستخدام خيط جراحي أحادي الخيط من مادة البولي أميد مقاس 9-0، وقبل الإغلاق، تأكد من أن الحالب مثبت بإحكام داخل المثالية.

يتم إغلاق الصفاق والجلد كما وُصف سابقاً، وتُقدّم الرعاية بعد الجراحة كما وُصف سابقاً. في هذه الدراسة، تُترك جميع الفئران التي خضعت لعملية UUO للتعافي لمدة سبعة أيام للسماح للكلية التي تم إلغاء انسدادها بالتخلص من الضغط، على الرغم من إمكانية دراسة نقاط زمنية أبكر أو لاحقة. وفيما يلي البيانات التي توضح مظهر الكلى المسدودة وتلك التي تم إلغاء انسدادها والإصابة الناتجة عن ذلك.

يوضح هذا الشكل مظهر الكلى وحوض الكلية والحالب في حالة U-U-L-U-U-O الأصلية مقارنة بالكلية الأصلية. تظهر الكلية التي تعرضت لانسداد في حالة UUO لمدة سبعة أيام مصابة باستسقاء الكلية وباهتة اللون. وبعد سبعة أيام من إزالة الانسداد، أصبحت الكلية في حالة RUO غير مضغوطة، مع عودة حوض الكلية والحالب إلى حجم ولون مشابهين للكلية الأصلية.

لاحظ أن الحالب في نموذج IUO يكون أقصر من الحالبين في نموذجي UUO والكلى الأصلية، وذلك بسبب تقنية إزالة البنية والتشريح في المثانة. يوضح هذا الشكل صورًا تمثيلية لمقاطع كلوية مصبوغة بصبغة H و E من الكلى الأصلية، وكلى UUO، وكلى RUUO. تتكون الخلالية السليمة في الكلية الطبيعية من مقاطع عرضية لأنابيب سليمة ومتماسكة.

تظهر مجموعة من الأنيبيبات التي تشير إليها الأسهم السوداء توسعاً شديداً في اليوم السابع. وبالمقارنة مع الأنبوب المقابل، يقل هذا التوسع بشكل ملحوظ بعد سبعة أيام من عكس انسداد الحالب (Reversal of UUL) تالياً لعملية (QUL). يتم تحفيز نموذج الفأر لمرض اعتلال الكلية الانسدادي المعروض هنا عن طريق انسداد الحالب أحادي الجانب، والذي يمكن أن يكون غير قابل للعكس أو قابلاً للعكس.

يتيح النموذج العكوس الموضح هنا إزالة الانسداد الحالب وممارسة مفاغرة الحالب مع المثانة لاستعادة التدفق البولي بشكل كامل. ويسمح تخفيف الضغط عن الكلية الناتج عن ذلك بدراسة إعادة تشكيل الأنسجة في تجارب ما بعد الإصابة. إن دمج نموذجي اعتلال الكلية الانسدادي غير العكوس والعكوس يمنح الباحثين رؤية قوية للعمليات المرضية وكيفية تأثير التدخلات العلاجية في كل من تطور الإصابة وإعادة تشكيل الأنسجة اللاحقة.