إزالة العناصر النزرة التي كتبها نحاسي أكسيد النانوية من اليورانيوم في الموقع استرداد التسييل المياه وتأثيره على بقاء الخلية

الهدف العام من هذا الإجراء هو فحص معالجة الجسيمات النانوية بأكسيد النحاسي كعملية إزالة الملوثات في الإنتاج ، ونزيف الماء ، وتقييم السمية الخلوية باستخدام الخلايا البشرية المستنبتة. يتم تحقيق ذلك عن طريق معالجة المياه النازفة أولا بجسيمات أكسيد النحاسية النانوية. يتم تقييم تغيرات تركيز العناصر الفردية قبل العلاج وبعده.

بعد ذلك ، يتم تخفيف وسائط زراعة الخلايا المركزة إما بالماء النازف غير المعالج أو أكسيد النحاس. إنتاج الجسيمات النانوية المعالجة ينزف الماء بالإضافة إلى مكملات زراعة الخلايا القياسية لإعداد وسائط الاختبار ، ونزيف الإنتاج غير المعالج ، ووسائط الماء وأكسيد النحاسي ، وإنتاج الجسيمات النانوية المعالجة بنزيف. ثم يتم تطبيق الوسائط المائية على خلايا الكلى والكبد البشرية وثقافتها ، ويتم قياس قابليتها للبقاء على مدار سبعة أيام.

في النهاية ، يوضح M-T-T-S-A إزالة الزرنيخ والسيلينيوم والفاناديوم واليورانيوم من الإنتاج. يرتبط نزيف الماء بواسطة جزيئات أكسيد النحاسية النانوية بزيادة صلاحية خلايا الكلى والكبد البشرية. هذه هي الدراسة الأولى التي تبحث في إزالة ملوثات معينة باستخدام جزيئات أكسيد كوبر النانوية أثناء تقييم التغيرات في السمية الخلوية المرتبطة بالإزالة في شكل ثقافة الخلايا.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية هي أن العينة البيئية كما هي موجودة في الطبيعة ، يتم اختبارها جنبا إلى جنب مع الجسيمات النانوية بتنسيق مائي غير مكلف. يمكن تطبيق جزيئات أكسيد النحاسية النانوية التي تم اختبارها في هذه الدراسة على أنظمة المياه الجوفية الأخرى مثل المياه الجوفية المنزلية المرتبطة بالمجتمعات الصغيرة. يؤدي تجديد جزيئات أكسيد النحاسية النانوية إلى تقليل النفايات وتقليل مشاكل التخلص من النفايات.

لبدء هذا الإجراء ، قم بإعداد جزيئات أكسيد النحاسية النانوية وجمع الماء النازف أو PBW كما هو موضح في بروتوكول النص لمعالجة PBW بجسيمات أكسيد النحاسية النانوية عند 50 ملليغرام من الجسيمات النانوية المحضرة إلى أنبوب مخروطي سعة 50 مليلتر ، متبوعا ب 50 مل من PBW يغلق الأنبوب ويتفاعل لمدة 30 دقيقة على شاكر مداري على طاولة عند جهاز طرد مركزي 250 دورة في الدقيقة ، تعمل أنابيب العينة عند 250 مرة G لمدة 30 دقيقة على تغيير سرعة ووقت جهاز الطرد المركزي اعتمادا على الجسيمات النانوية لضمان أن تصبح الجسيمات النانوية مضغوطة في أنبوب الطرد المركزي بعد الطرد المركزي ، قم بتصفية المادة الطافية باستخدام حقنة 0.45 ميكرون. ثم يتم إرسال عينات المرشح لتحليل العناصر لإعداد وسائط زراعة الخلايا. أولا ، استخدم ماء التناضح العكسي من المختبر.

وتشمل هذه 100٪ 75٪ 50٪ و 25٪ غير المعالجة PBW أو الجسيمات النانوية أكسيد CIC المعالجة PBW Next عند 25 مل من 10 X-E-M-E-M المركز إلى 190 مل من RO. بالإضافة إلى كل تركيز من تركيزات PBW المعالجة وغير المعالجة. اضبط الرقم الهيدروجيني لكل محلول على 7.4 باستخدام هيدروكسيد الصوديوم أو حمض الهيدروكلوريك.

ثم استكمل كل تركيز من وسائط PBW plus غير المعالجة والمعالجة ، بالإضافة إلى وسائط التحكم RO بالمكونات القياسية المدرجة في بروتوكول النص. بعد كل تركيز من وسائط PBW بالإضافة إلى وسائط التحكم في التناضح العكسي غير المعالجة وغير المعالجة بالإضافة إلى وسائط التحكم بالتناضح العكسي ، يتم ضبط الأسمولية. يتم تطبيق قطرة من كل محلول على قرص ورقي خال من المذاب ويتم وضع القرص في ضغط بخار OSM ter.

ثم يتم ضبط الأسمولية إلى ما بين 290 و 310 مللي أوسمول لكل كيلوغرام عن طريق إضافة ماء التناضح العكسي. أخيرا ، قم بتصفية كل محلول باستخدام وحدة تصفية فراغ 22 ميكرون من نقطة الصفر وتخزينها عند أربع درجات مئوية. قم بإعداد مزرعة خلايا الكلى الجنينية البشرية وخلايا سرطان الخلايا الكبدية البشرية قبل يومين إلى ثلاثة أيام من طلاءها.

في 96. ألواح الآبار لكل مصنعين وتعليمات بعد إزالة الخلايا من أطباق الاستزراع الخاصة بهم ، باستخدام أجهزة الطرد المركزي التربسين عند 1000 مرة G لمدة خمس دقائق وصب التربسين. أضف خمسة ملليلتر من محلول ملحي مخزن بالفوسفات أو PBS واخلط الخلايا للحصول على محلول خلية واحدة.

ثم ضع 20 ميكرولترا من محلول الخلية المفردة على مقياس الخلوي الدموي للحصول على عدد الخلايا لكل مليلتر من المحلول بعد الطرد المركزي. مرة أخرى ، كما كان من قبل والصب ، استخدم PBS لشطف الخلايا بالكمية المناسبة من X-E-M-E-M لضبط تركيز الخلايا إلى 500 خلية لكل 100 ميكرولتر لكل بئر. بعد ذلك ، املأ الآبار المحيطة باللوحة ب 200 ميكرولتر من PBS للتحكم في التبخر.

ضع الخلايا بكثافة 500 خلية لكل بئر ، مع إضافة 100 ميكرولتر إلى كل بئر باستثناء الآبار المحيطة. احتضان الخلايا لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية ، مما يسمح لها بالتعافي قبل إجراء خط الأساس. قراءات MTT لكثافة الخلية.

قم بإجراء قراءات MTT الأساسية لكثافة الخلية عن طريق إزالة وسائط البذر من العمود الأول وإضافة 100 ميكرولتر من MTT إلى الآبار لمدة ساعة واحدة. بعد ساعة واحدة. قم بإزالة MTT وأضف 100 ميكرولتر من ثنائي ميثيل سلفوكسيد لإذابة MTT Informason الذي تنتجه الخلايا القابلة للحياة.

ثم اقرأ الكثافة البصرية للعمود الأول بطول موجة امتصاص 570 نانومتر. للحصول على قراءة أساسية ، أضف محلول واحد لكل لوحة. استبدل وسائط البذر ب 100 ميكرولتر من وسائط تحكم X-E-M-E-M RO بالإضافة إلى كل تركيز من تركيزات الوسائط PPW plus المعالجة وغير المعالجة.

احتضان الخلايا في تركيزات الاختبار أو محاليل التحكم لمدة سبعة أيام كل يوم. بعد قراءة MTT الأساسية ، قم بإزالة حلول التحكم والاختبار من العمود التالي من اللوحة الخاصة بها وكرر بروتوكول MTT. كرر البروتوكول كل يوم لمدة سبعة أيام في المتوسط.

نتائج OD كل صف وتقرير مقابل الوقت لإنشاء منحنى نمو لمدة سبعة أيام لتقييم تأثير استخلاب النحاس على بقاء الخلية وأكسيد النحاس. تتبع وسائط PBW plus المعالجة بالجسيمات النانوية نفس الإجراء باستثناء 100 ميكرومولار د البنسلين للتحكم في المحاليل واختبارها قبل إضافة المحاليل إلى الألواح الخاصة بها. كخطوة أخيرة ، قم بإجراء تحليل البيانات باستخدام برنامج الرسوم البيانية العلمية ، أزالت معالجة الجسيمات النانوية بأكسيد النحاسي الزرنيخ والسيلينيوم واليورانيوم والفاناديوم من انتواع PBW.

تدعم نتائج النمذجة النتائج التحليلية التي تحمي أنه في PBW 99٪ من الزرنيخ و 94٪ من السيلينيوم و 99٪ من الفاناديوم موجودة كأنواع سالبة قادرة على امتصاص جزيئات أكسيد النحاسية النانوية. ومع ذلك ، فإن 35.5٪ فقط من أنواع اليورانيوم المذاب سالبة الشحنة ، مما يحد من امتصاص اليورانيوم إلى أكسيد النحاس. تضررت صلاحية الجسيمات النانوية بطريقة تعتمد على التركيز في الخلايا المزروعة في وسائط PBW plus غير المعالجة ، في حين أن معالجة الجسيمات النانوية بأكسيد النحاسي حسنت من الجدوى الخلوية في كلا خطي الخلايا.

هيك وهب النمو الخلوي في اليوم الخامس في وسائل الإعلام التحكم تظهر التقاء متصل جيدا صحة المظهر. على العكس من ذلك ، نمت هيك والخلايا غير المعالجة. وسائط PBW plus أقل تماسكا وتظهر انفصال وتبدو مستديرة أو غير صحية.

علاوة على ذلك ، هيك ، ونمت الخلايا في أكسيد الكابيك. أظهرت وسائط PBW plus المعالجة بالجسيمات النانوية تحسنا في الطلاقة والتعلق والصحة مقارنة بالخلايا المزروعة في وسائط PBW بالإضافة إلى وسائط PBW غير المعالجة بعد هذا الإجراء. يمكن استخدام طرق اختبار السمية الأخرى مثل قياس التدفق الخلوي للإجابة على أسئلة إضافية حول التغيرات الميكانيكية والسمية الخلوية للمخاليط قبل العلاج وبعده.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لاختبار فعالية النحاسية والجسيمات النانوية في إزالة الماء والملوثات وتأثيراتها على زراعة الخلايا. ومع ذلك ، من المهم أن تتذكر مراقبة تركيزات النحاس في المياه المعالجة.