التحليل الكمي من العيوب تسلق في نموذج ذبابة الفاكهة من الاضطرابات العصبية

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحديد قدرة التسلق للذباب والذباب البري المتحور للجينات المشاركة في الحركة. يتم تحقيق ذلك عن طريق نقل الذباب أولا إلى أسطوانة زجاجية متدرجة. الخطوة الثانية هي إزاحة الذباب إلى قاع الأسطوانة عن طريق النقر برفق على الأسطوانة على حشوة الرغوة.

بعد ذلك ، يتم تسجيل الذباب الذي يعبر خط الهدف باستخدام كاميرا فيديو لمدة دقيقتين. الخطوة الأخيرة هي تحليل مقاطع الفيديو ورسم عدد الذباب فوق الخط المستهدف كل 10 ثوان. في النهاية ، يتم استخدام اختبار التسلق لتحديد العيوب في قدرة التسلق على الخطوط الطافرة لذباب الفاكهة.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية ، أو التقنيات الحالية ، مثل الطريقة البرية ، هي أنها تتمتع بالقدرة على اكتشاف الاختلافات الطفيفة في القدرة على التسلق. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الاضطرابات التنكسية العصبية ، مثل دور جينات معينة في الشلل النصفي التشنجي الوراثي على ضعف المشي التدريجي. تميل الآثار المترتبة على هذه التقنية إلى تطوير العلاج.

IP للاضطرابات العصبية لأنه يوفر فحصا كميا بسيطا لاختبار الاستجابة للأدوية والطفرات للجينات التنكسية العصبية المرشحة ابدأ بتخدير 20 ذبابة باستخدام ثاني أكسيد الكربون وضع جميع الذباب في قارورة تجميع 25 ملم × 95 ملم تحتوي على طعام. ثم قم بتخزين القارورة التي تحتوي على الذباب أفقيا في صينية من الورق المقوى لتجنب حبسها في أي سائل قد يتراكم في قاع القارورة. ضع الذباب في حاضنة لمدة 21 ساعة على الأقل تحت دورة مظلمة فاتحة مدتها 12 ساعة في صباح اليوم التالي ، وقم بإعداد اختبار التسلق عن طريق نقل الذباب من القارورة إلى أسطوانة زجاجية متدرجة سعة 250 مليلتر ، وأغلق الجزء العلوي بغشاء شمعي لمنع هروب أي ذباب.

إجراء التجربة في الإضاءة المحيطة عند 22 درجة مئوية و 40٪ رطوبة. قم دائما بإجراء التجارب في نفس الوقت من اليوم لتجنب الخلط بين دورات النوم. أيضا ، حدد موقع الأسطوانة على سطح الطاولة لإبقائها ثابتة كل يوم.

احسب عدد الذباب الميت في قاع الأسطوانة وفي قوارير الطعام ، سجل هذا الرقم على أنه معدل الوفاة. بعد ذلك ، قم بإعداد كاميرا الفيديو على حامل ثلاثي القوائم. ركز الكاميرا على خط 190 مليلتر من الأسطوانة المتدرجة 250 مليلتر برفق شديد.

اضغط على الأسطوانة من خمس إلى 10 مرات على وسادة رغوة خلية مغلقة بقوة كافية لإزاحة الذباب إلى السطح السفلي الداخلي. ثم استخدم اليد الأخرى للضغط على التسجيل على الكاميرا. ثم اضغط على الأسطوانة ست مرات بنمط غير إيقاعي مميز أثناء تسجيل الكاميرا.

قم بإجراء كل تجربة لمدة دقيقتين من آخر وقت يتم النقر على الذباب. أخيرا ، تخلص من الذباب في 95٪ من الإيثانول. بمجرد اكتمال التجربة ، كرر اختبار التسلق هذا 10 مرات باستخدام 20 ذبابة جديدة في كل مرة لاكتشاف الاختلافات الصغيرة في الحركة بين المجموعات.

اغسل الأسطوانات في غسالة الصحون وجففها طوال الليل لإعادة استخدامها بمجرد اكتمال التجربة لتحليل أداء الذبابة ، ابدأ بمشاهدة مقاطع فيديو لكل سجل تجريبي للذبابة. العدد الإجمالي للذباب الذي يمر بخط الهدف كل 10 ثوان. إذا صعدت الذبابة إلى أسفل أو سقطت ، فسجل تلك الذبابة على أنها ناقص واحد واحسب الذبابة التالية لعبور خط الهدف بنفس رقم الذبابة التي صعدت أو سقطت.

على سبيل المثال ، إذا سقطت الذبابة 15 تحت خط الهدف ، فإن الذبابة التالية التي تعبر الخط تعتبر الذبابة 15 وليس 16. ثم اطرح معدل الوفيات من العدد الإجمالي للذباب للحصول على عدد الذباب المتبقي في مؤامرة التجربة. النسبة المئوية للذباب فوق خط الهدف في كل نقطة زمنية عند العمل مع الطفرات الشديدة ، يمكن رؤية درجات مختلفة من عيب التسلق باستخدام فحوصات التسلق المختلفة.

هنا ، تم تسجيل عدد الذباب البالغ من العمر ثمانية أيام والذي صعد إلى قمة قارورة طعام فارغة بعد 18 ثانية مما يدل على عدم وجود فرق كبير في سلوك التسلق بين المجموعتين. من ناحية أخرى ، باستخدام مقايسة التسلق من هذا البروتوكول ، تظهر Bastin 17 dash seven over TM three mutant flyments flys عجزا في الأداء مقارنة بالضوابط. نظرا لأن العديد من اضطرابات القاطرة تقدمية ، فمن المهم ملاحظة تطور الذباب بمرور الوقت.

في عمر يومين ، هناك فرق كبير في عدد الذباب الذي يتسلق فوق خط الهدف. مقارنة بالضوابط. يستمر أداء التسلق هذا في الانخفاض مع تقدم عمر الذباب المتحور من يومين إلى يومين.

بمجرد إتقان هذه التجربة والتحليل ، يمكن إكمال هذه التجربة والتحليل في ثلاث ساعات. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحديد عيوب القاطرة في نماذج دولا الطافرة للاضطرابات العصبية.